Abschlussbericht (pdf) - AGES

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PCR-Reaktion inhibierende Inhaltsstoffe) in Frage. In der Probe SR 3 verdünnt
konnte das positive Ergebnis des Referenzmaterials bestätigt werden.
Für ER 2 war der von Roetschi ermittelte Ct-Wert höher, für ER 3 niedriger, als der
von uns ermittelte Wert.
Die Verdünnungen wirkten sich unterschiedlich aus. SR 3 wurde im unverdünnten
Zustand negativ getestet, in der 1:10 Verdünnung jedoch positiv. Dies weist auf die
PCR inhibierende Inhaltstoffe im unverdünnten Material hin. SR 2, ER 2 und ER 3
lieferten höhere Ct-Werte in verdünnter Form, was durch die niedrigeren DNA
Mengen zu erwarten war, wenn keine inhibierenden Inhaltstoffe wirken.
Auch wenn in einem Einzelfall (SR 3) ohne Verdünnung kein positives Ergebnis
ermittelt und erst durch die Verdünnung eine Detektion ermöglicht wurde, ließ sich
aus diesem Versuch kein genereller Vorteil einer Verdünnung ableiten. Daher wurde
in der Folge mit unverdünnten Extrakten gearbeitet.
Material
(Extraktion
Roetschi)
Analyse
Roetschi
Ct-Wert
Analyse
BIEN
Ct-Wert
Material
(Extraktion BIEN)
Analyse
BIEN
Ct-Wert
ER 2 25,69 18,44 SR 2 34,26
ER 2_1:10 - 22,43 SR 2 1:10 35,32
ER 3 15,35 29,52 SR 3 negativ
ER 3_1:10 - 33,00 SR 3 1:10 27,63
- - - Negativkontrollbienen negativ
- - - Negativkontrollbienen
1:10
Tabelle 2: Etablierungsschritt 1, ermittelte Ct-Werte
negativ
2.11.2 Etablierungsschritt 2
Um den Elutionspuffer (Buffer AE) als möglichen Inhibitor abklären zu können, wurde
dieser bei der DNA-Extraktion der Probe SR 4 durch Milli-Q ® Reinstwasser ersetzt.
Mit diesen Extrakten wurde in der Originalkonzentration sowie in der 1:10
Verdünnung eine real-time PCR durchgeführt.
Wie in Tabelle 3 angeführt, wurde die Positivprobe wurde als positiv und die
Negativprobe als negativ identifiziert.
Projekt: Molekularbiologische Untersuchungen zum möglichen Vorkommen von Melissococcus plutonius (Erreger der
Europäischen Faulbrut) an Bienen in Österreich