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Seite 1 von 45 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung .......................................................................................... 3 1.1 Erreger .................................................................................................... 3 1.2 Symptome und Krankheitsbild ................................................................... 4 1.3 Bekämpfung ............................................................................................ 6 1.3.1 Bekämpfungsverfahren in der Schweiz und Großbritannien ................... 6 1.4 Erregernachweis ...................................................................................... 7 1.4.1 Mikroskopie ....................................................................................... 7 1.4.2 Molekularbiologische Untersuchungsmethoden .................................... 7 2 Material und Methode ....................................................................... 8 2.1 Probenmaterial ........................................................................................ 8 2.2 Probenherkunft und Symptombeschreibung ............................................... 9 2.3 Referenzmaterial für die Untersuchungen ................................................ 12 2.3.1 Positives Referenzmaterial ................................................................ 12 2.3.2 Negatives Referenzmaterial .............................................................. 13 2.4 Ergebnisklassifizierung ........................................................................... 13 2.5 Geräte, Materialien und Reagenzien ........................................................ 13 2.5.1 Geräte und Materialien ..................................................................... 13 2.5.2 Reagenzien ...................................................................................... 14 2.6 Primer und Sonde .................................................................................. 15 2.7 Herstellung der benötigten Arbeitslösungen ............................................. 16 2.7.1 Enzymatischer Lysis Puffer für DNA-Extraktion ................................... 16 2.7.2 Primer (Master-Mix-Komponenten für PCR)........................................ 17 2.7.3 MGB-Sonde (Master-Mix-Komponente für PCR) .................................. 17 2.8 Probenvorbereitung ................................................................................ 17 2.9 DNA-Extraktion mittels Qiagen DNeasy ® Blood & Tissue-Kit ...................... 18 2.10 Master-Mix und real-time PCR .............................................................. 18 2.10.1 Master-Mix ...................................................................................... 19 2.10.2 Real-time PCR Bedingungen ............................................................. 20 2.11 Etablierung der PCR-Methode .............................................................. 21 2.11.1 Etablierungsschritt 1 ........................................................................ 21 2.11.2 Etablierungsschritt 2 ........................................................................ 22 2.11.3 Etablierungsschritt 3 ........................................................................ 23 2.11.4 Etablierungsschritt 4 ........................................................................ 26 2.11.5 Aufgetretene Probleme und ihre Lösung ............................................ 26 2.12 Erreger-Nachweis in Bienenproben aus Österreich ................................ 27 3 Ergebnisse ....................................................................................... 27 3.1 Ergebnis der Untersuchungen von Bienenproben aus Österreich nach Bundesländern ................................................................................................ 30 3.2 Symptombeschreibung und Untersuchungsergebnis ................................. 32 4 Diskussion ....................................................................................... 33 5 Zusammenfassung .......................................................................... 36 6 Danksagung .................................................................................... 38 7 Abkürzungen und Begriffserklärungen ........................................... 39 8 Literatur .......................................................................................... 40 Projekt: Molekularbiologische Untersuchungen zum möglichen Vorkommen von Melissococcus plutonius (Erreger der Europäischen Faulbrut) an Bienen in Österreich
Seite 2 von 45 9 Anhang ............................................................................................ 43 9.1 Fragebogen ........................................................................................... 43 Projekt: Molekularbiologische Untersuchungen zum möglichen Vorkommen von Melissococcus plutonius (Erreger der Europäischen Faulbrut) an Bienen in Österreich
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Seite 41 und 42: Seite 40 von 45 8 Literatur AGES (2
Seite 43 und 44: Seite 42 von 45 Tschumi, M. (2011)
Seite 45: Seite 44 von 45 Fragebogen „Proje

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