Abschlussbericht (pdf) - AGES

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Anmerkung: Zu Beginn wurden - ausgehend vom vorliegenden Volumen des
Überstandes - 80 % an Isopropanol zugesetzt, wodurch das
Fassungsvermögen des 2 ml Reaktionsgefäßes überschritten worden
wäre. Aus diesem Grund wurde das Gemisch auf zwei Reaktionsgefäße
aufgeteilt und die nachfolgenden Schritte parallel ausgeführt, wobei die
Inhalte nach dem letzten Waschschritt wieder vereinigt wurden.
2.11.3.2 Ergebnisse der DNA-Aufreinigung mittels Promega Wizard ® Magnetic
DNA Purification System for Food-Kit
Die Ergebnisse der NanoDrop ® -Messung (siehe Tabelle 4) zeigten eine Reduktion der
DNA-Konzentration nach der Durchführung der Aufreinigung.
Anhand der PCR-Resultate (siehe Tabelle 4) konnte erneut bei Probe SR 3
ungereinigt eine Inhibition beobachtet werden.
Das gereinigte Extrakt von SR 3 erbrachte jedoch ein positives Ergebnis. Die Ct-
Werte der gereinigten und ungereinigten Extrakte von SR 2 waren fast gleich. Bei
SR 4 führte die Aufreinigung zu einem höheren Ct-Wert. Aufgrund der teilweise
gegenläufigen Auswirkungen auf die Messergebnisse (Ct-Werte) und den
zusätzlichen Arbeitsschritten und Kosten fand die DNA-Aufreinigung keine weitere
Anwendung.
Material
(Extraktion BIEN)
Analyse
BIEN
Ct-Wert
Nukleinsäurekonzentration
ng/µl
SR 2 gereinigt 24,30 37,13
SR 2 ungereinigt 162,00 37,71
SR 3 gereinigt 19,10 26,98
SR 3 ungereinigt 456,70 Negativ
SR 4 gereinigt 42,80 38,45
SR 4 ungereinigt 1049,80 34,32
Tabelle 4: Etablierungsschritt 3, Nukleinsäurekonzentrationen und Ct-Werte
Projekt: Molekularbiologische Untersuchungen zum möglichen Vorkommen von Melissococcus plutonius (Erreger der
Europäischen Faulbrut) an Bienen in Österreich