Doktorarbeit Nina Ewerdwalbesloh - Universität zu Lübeck

Einleitung
Kretschmer-Kazemi Far und Sczakiel (2003) zum Beispiel gezeigt, dass die biologische
Aktivität mit sehr aktiven (IC 50 ca. 0,2-0,5 nM) und inaktiven (IC 50 >1 µM) siRNA-
Konstrukten um das tausendfache variiert.
Obwohl diese Faktoren zu Beginn häufig nicht vorhersehbar sind, ist statistisch gesehen
eine von fünf siRNA-Sequenzen effektiv (Dallas und Vlassow, 2006). Eine Hilfe für die
Auswahl der Sequenzen sind Algorithmen, die viele Faktoren oder Charakterzüge,
welche experimentell erarbeitet wurden, berücksichtigen. So wird durch diese
Analysierung eine Liste von siRNA-Sequenzen erstellt, welche am wahrscheinlichsten
effektiv sind. Beispiel für solch eine Such-Software ist unter
www.jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/ (Whitehead Institute, August 2007) zu finden. Um
zu verhindern, dass diese Sequenzen Homologien zu anderen Genen haben, sollte mit
diesen ausgewählten siRNA-Sequenzen ein „BLAST search“
(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST, August 2007) durchgeführt werden. Es wurde allerding
von Seyhan et al. (2005) gezeigt, dass einige effektive Sequenzen von keinem der
verfügbaren Algorithmen gefunden wurden.
Erste Vergleiche der Wirksamkeit von siRNA und Antisense-Oligonukleotiden zeigen,
dass die Geninhibierung durch siRNA deutlich wirksamer ist als durch Antisense-
Oligonukleotide (Bertrand et al. 2002). Hierbei liegen die IC 50 -Werte für siRNA bis zu
100-1000 fach niedriger als bei thiolierten AS-Oligonukleotiden (Kretschmar-Kazemi
Far und Sczakiel, 2003; Miyagishi et al., 2003).
Dass siRNA nicht nur in vitro, sondern auch in vivo ein vielversprechender Ansatz ist,
haben mittlerweile viele Experimente gezeigt. So konnte z.B. durch siRNA, welche das
Onkogen H-Ras stilllegt, in vivo das Tumorwachstum von Ovarial-Karzinomen in
Mäusen inhibiert werden (Yang et al., 2003).
Bei relativ problemloser Produktion zeigen erste Daten, dass siRNA eine günstige
Pharmakokinetik auszeichnet und von vielen Organen aufgenommen werden kann
(Braasch et al., 2004). Mittlerweile wurde siRNA gegen verschiedene Krankheiten, wie
z.B. altersabhängige Makuladegeneration, Hepatitis B und C, Chorea Huntington oder
Morbus Parkinson und Respiratoral-syncytial-Virus entwickelt (Howard, 2003; Dallas
und Vlassov, 2006). Des Weiteren wurde in vivo siRNA gegen Tumoren wie z.B.
kleinzelliges Lungen-Karzinom und Glioblastom untersucht (Lakka et al., 2004;
Sumimoto et al., 2005). Auch erste Phase-I-Studien haben mittlerweile begonnen. So
wurde eine Phase-I-Studie mit siRNA gegen VEGF (Cand 5) bei altersabhängiger
Makuladegeneration abgeschlossen, welche positive Resultate brachte
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