Doktorarbeit Nina Ewerdwalbesloh - Universität zu Lübeck

Einleitung
1.9 Aufgabenstellung
Die Antisense-Therapie ist v.a. in Kombination mit der klassischen Chemotherapie ein
vielversprechender neuer Ansatz der Krebstherapie. Es wurden bereits in einigen
klinischen Studien signifikante Effekte verschiedener Kombinationstherapien in Bezug
auf Tumorreduktion und Erhöhung der Überlebensrate gezeigt.
Ein Zielprotein der Antisense-Therapie ist das für die Zellproliferation essentielle Ki-67-
Protein. Für dieses konnten bereits in Monolayer-Zellkulturen eine Reduktion des
mRNA- und Proteinlevels, eine Zellproliferations-Hemmung und Apoptose-Einleitung
gezeigt werden. Des Weiteren wurde eine Abnahme der Größe und Verlust der
dreidimensionalen Struktur von Sphäroiden demonstriert. Bei in-vivo-Versuchen konnte
eine Tumorreduktion an subkutanen Prostata-, Harnblasen- und Nierenzelltumoren
gezeigt werden. Eine erste abgeschlossene klinische Phase-I-Studie hat die
Verträglichkeit der Ki-67-Antisense-Therapie bei intravesikaler Applikation zur Therapie
von Harnblasen-Karzinomen gezeigt.
Anknüpfend an diese Ergebnisse war der erste Schwerpunkt dieser Arbeit, erstmalig den
Effekt einer Kombination von Antisense-Oligonukleotiden gegen das Ki-67-Protein und
verschiedenen Chemotherapeutika (Gemcitabin, Cis-Platin und Taxol) auf die
Zellproliferation zu untersuchen. Untersucht werden sollten die Auswirkungen am
Monolayer und auf Sphäroide:
− auf mRNA-Ebene mittels PCR
− auf die Zellproliferation mittels zweier Zellproliferations-Assays
− auf die Ki-67-Expression mittels MIB-1-Färbung
Zweiter Schwerpunkt der Arbeit war die Etablierung der Ki-67-RNA-Interferenz mittels
siRNA, welche eine neue und innovative Methode der Genstilllegung ist. Dazu sollten
mittels quantitativer PCR die Effekte auf mRNA-Ebene des Ki-67-Proteins untersucht
und mit den Ergebnissen der bereits etablierten Antisense-Oligonukleotid-Therapie
verglichen werden.
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