Untersuchungen zur Anwendbarkeit und Validität von In-vitro ...

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128 II Ergebnisse und Diskussion 5.2.1 Ergebnisse für Pflanzenextrakte mit geringer inhibitorischer Aktivität Die Inhibition der CYP-Enzyme durch Pflanzenextrakte (125, 250, 500, 1000 µg/ml) mit geringer inhibitorischer Aktivität wurde mit Hilfe der Mikrotiterplatten-basierten Fluoreszenz-Methoden und den als Referenz dienenden LC/MS-Methoden bestimmt. Die Balkendiagramme, welche die Hemmung der CYP-Enzyme durch die getesteten Pflanzenextraktkonzentrationen zeigen, sind im Anhang unter VI.1 dargestellt. Für einen Vergleich der beiden Methoden, wurden die Konzentrationsbereiche der IC50- Werte aus den Diagrammen (Anhang VI.1) abgelesen und tabellarisch aufgeführt (Tab. 19). Die Konzentrationsbereiche der IC50-Werte werden im Folgenden der Einfachheit halber als IC50-Werte bezeichnet, obwohl keine exakten IC50-Werte bestimmt wurden und somit der Ausdruck eigentlich nicht korrekt ist. Während 18 der 81 mit der Fluoreszenzmethode erhaltenen IC50-Werte (ca. 22 %) mit denen der LC/MS-Methoden übereinstimmten, lagen 46 % der fluorimetrisch bestimmten IC50-Werte niedriger und 23 % höher als die Werte der Referenzmethoden (Tab. 19). Einige IC50-Werte (9 %) konnten mit der Fluoreszenz- Methode nicht bestimmt werden. Der Grund hierfür war, dass für die Extrakte von Baldrianwurzel und Basilikumkraut (CYP2B6, CYP2C9) sowie Bittersüßstengel (CYP2B6, CYP2C9, CYP2D6) mit steigender Inhibitorkonzentration nicht wie üblicherweise eine Abnahme sondern eine Zunahme der Fluoreszenzintensität resultierte (siehe Anhang VI.1). Diese Pflanzenextrakte besitzen mit hoher Wahrscheinlichkeit eine starke Eigenfluoreszenz bei den entsprechenden Anregungs- und Emissionswellenlängen. Am besten stimmten die IC50-Werte der Extrakte der Weißdornblätter mit Blüten und der Korianderfrüchte mit den Werten der Referenzmethode überein. Sehr auffällig war, dass der Passionsblumenkraut- und Heidelbeeren-Extrakt überwiegend zu niedrige IC50-Werte für die fluorimetrische Bestimmung aufwiesen. Allen voran zeigten Passionsblumenkraut für CYP1A2/CEC und CYP3A4/BFC sowie Heidelbeeren für CYP2C19 extrem große Abweichungen der IC50-Werte (Faktor 4-8) gegenüber den IC50-Werten, die mit Hilfe der Referenzmethoden (LC/MS) bestimmt wurden. Im Gegensatz zu den Cumarin- Derivaten CEC (CYP1A2) und BFC (CYP3A4) stimmten die mit den Fluoreszenzsubstraten Ethoxyresorufin (CYP1A2) und Benzyloxyresorufin (CYP3A4) ermittelten IC50-Werte mit den LC/MS-Daten relativ gut überein.
II Ergebnisse und Diskussion 129 Tab. 19 Konzentrationsbereiche der IC50-Werte (µg/ml) für die inhibitorisch schwach aktiven Pflanzenextrakte bezüglich der getesteten CYP-Enzyme. Die Bestimmung erfolgte mit Hilfe der Mikrotiterplatten-basierten Fluoreszenz- und LC/MS-Methoden. Baldrianwurzel Basilikumkraut Bittersüßstengel CYP Fluoresz. LC/MS Fluoresz. LC/MS Fluoresz. LC/MS 1A2 500-1000 a 250-500 500-1000 a 250-500 >1000 a >1000 500-1000 b 125-250 b 500-1000 b 2B6 - e
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