Untersuchungen zur Anwendbarkeit und Validität von In-vitro ...

II Ergebnisse und Diskussion 67
Auswertung dieser Daten mit Hilfe von SigmaPlot ® resultiert fälschlicherweise ein Km-
Wert von 36,7 ± 5,0 µM und eine Kinetik mit Substratinhibition für die CYP2B6katalysierte
Umsetzung von Bupropion zu 4-Hydroxybupropion. Für den CYP2B6-
Assay zur Bestimmung der inhibitorischen Aktivität von Testsubstanzen hätte die
Ionensuppression von 4-Hydroxybupropion zur Folge, dass eine stärkere
inhibitorische Aktivität der Testsubstanzen vorgetäuscht wird. Da die Ionenbildung
von 4-Hydroxybupropion aufgrund einer Koelution durch Bupropion unterdrückt wird,
liegen die ermittelten Werte für Hydroxybupropion generell zu niedrig.
Abb. 27 Michaelis-Menten-Diagramm zur Km-Wert-Bestimmung der CYP2B6-katalysierten Umsetzung
von Bupropion zu 4-Hydroxybupropion, wobei die Ionenbildung von Hydroxybupropion in der ESI-
Quelle aufgrund einer Koelution durch Bupropion unterdrückt wurde (AR: Peakflächenverhältnis 4-
Hydroxybupropion/Interner Standard Propranolol; Km: Michaelis-Menten-Konstante).
1.3.2.6 Durchführung des CYP2B6-Assays
Die Bestimmung der inhibitorischen Aktivität von CYP2B6 wurde mit einer
Bupropion-Konzentration von 50 µM durchgeführt. Diese Konzentration entspricht
weitgehend dem ermittelten Km-Wert von Bupropion (46,7 µM). Die Enzym-