Skript

Hemmstoff-Verdünnungsreihe
Einer Nährlösung, die für das Wachstum des zu untersuchenden Organismus
(Bacillus) geeignet ist, wird der Hemmstoff, hier Penicillin, in einer
Konzentrationsreihe zugesetzt. Der Versuchsansatz wird gleichmäßig mit dem
Testorganismus inokuliert. Nach Bebrütung wird festgestellt bis zu welcher
Konzentration ein „normales“, d.h. ungehemmtes Wachstum erfolgt und welche
Konzentration das Wachstum vollständig verhindert. Bei manchen Substanzen wird
konzentrationsabhängig eine mikrobiostatische (bakteriostatische) und mikrobicide
(baktericide) Wirkung beobachtet.
Durchführung:
1. Herstellung der Hemmstoff-Verdünnungsreihe:
Ausgangslösung (Reagenzglas Nr. 1): 0,2 mg Penicillin in 10 ml 0,9% NaCl-
Lösung lösen, steht am Platz
Beschriftung der Reagenzgläser mit 5 ml 0,9%iger NaCl-Lösung: 2-11
In das Reagenzglas Nr. 2 werden 5 ml der Ausgangslösung (Reagenzglas Nr. 1)
pipettiert. Durch mehrmaliges Aufziehen der Pipette wird durchmischt und 5 ml
aus dem Röhrchen in das nächste Reagenzglas mit 5 ml gegeben. Dieser
Vorgang wird bis zum 11. Röhrchen wiederholt.
2. Verdünnungsreihe von der am Platz stehenden Bakteriensuspension unter
sterilen Bedingungen in 10er Stufen bis zur Stufe 10 -5 herstellen.
3. Die Reagenzgläser mit den 4,5 ml Nährlösung werden von 1-11 numeriert. Zu
dem 11. Reagenzglas werden 0,5 ml der Hemmstoff-Lösung mit der höchsten
Verdünnungsstufe (11) gegeben. In die folgenden werden mit der gleichen
Pipette je 0,5 ml der entsprechenden Hemmstoff-Verdünnungsstufen in
steigender Konzentration pipettiert.
4. Beimpfung: Jedes Reagenzglas wird mit 1 Tropfen Bakteriensuspension der
Verdünnungsstufe 10 -5 beimpft.
5. Die Reagenzglaskulturen werden 24 Stunden bei 30°C bebrütet.
Auswertung:
Die Röhrchen werden auf Trübung untersucht.
7. Von den Röhrchen, die keine Trübung aufweisen, wird durch Überimpfen (siehe
Pkt. 4) in Medium ohne Hemmstoff eine Subkultur angelegt, um auf baktericide
oder bakteriostatische Wirkung zu überprüfen. Das weitere Vorgehen erfolgt
nach den Punkten 4 und 5.
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