Skript

FETTFÄRBUNG
Fette werden in Form von kleinen, stark lichtbrechenden Kügelchen in den Zellen
von Bakterien, Hefen und anderen Pilzen gespeichert. Das Ausmaß der
Fettspeicherung wird durch das Alter der Zellen und die Zusammensetzung des
Nährmediums bestimmt.
Besonders reich an Lipoiden sind z.B. Rhizobium leguminosarum, Mycobacterium
tuberculosis und Geotrichum candidum.
Der Nachweis von Fetten erfolgt durch Färbung mit fettlöslichen Farben, vor allem
Diazo- und Polyazo-Farben wie Congorot, Sudan IV und Sudanschwarz B.
Sudanschwarz B färbt nicht nur Neutralfette, sondern auch Phosphatide.
Organismus:
Pichia jadinii, 7 Tage auf Sabouraud-Agar kultiviert.
Durchführung:
1. Mit einer Pasteurpipette einen Tropfen Wasser auf einen fettfreien
Objektträger tropfen.
2. Unter sterilen Vorsichtsmaßnahmen mit der Impföse etwas Material von
der Schrägkultur entnehmen und mit einem zweiten Objektträger zu einem
feinen Film ausziehen.
3. Präparat lufttrocknen, anschließend hitzefixieren.
4. Objektträger mit Sudanschwarz B - Lösung übergiessen und Farbe 15 min
einwirken lassen.
5. Farbe abgiessen, mit Filterpapier oder Kleenex abtrocknen, lufttrocknen.
6. In Ethyllactat eintauchen, bis keine Farbe mehr abgeht (Pinzette
benutzen).
7. Mit Filterpapier trocknen.
8. 10 sec mit Safraninlösung gegenfärben, mit Wasser abspülen.
9. Deckglas auflegen und unter Ölimmersion mikroskopieren.
Auswertung:
Die Fetteinschlüsse sind schwarzblau gefärbt, der Zellinhalt rot.
Reagenzien:
Sudanschwarz B: 0,3 g in 75 ml 95%igem Ethanol lösen und mit
Ionenaustauscherwasser auf 100 ml auffüllen
0,5%ige wässrige Safraninlösung
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