Skript

MIKROSKOPISCHE ZÄHLUNG DER ANZAHL DER ZELLEN VON
BÄCKERHEFE MIT DER ZÄHLKAMMER
Die Zählkammer wird zur mikroskopischen Zählung von Mikroorganismen,
Blutkörperchen usw. verwendet. Bei dieser Zählung ist zu berücksichtigen, daß alle
Zellen (lebende und tote) erfaßt werden.
Die Zählkammer
Wie das Schnittbild (Abb. 1) zeigt, ist die Zählkammer ein plangeschliffener
Objektträger (Oberfläche des Kammersteges), auf dem ein relativ dickes Deckglas
(ca. 0,2 mm) auf den beiden äußeren Stegen in einem definierten Abstand
(Kammertiefe K) vom Kammersteg liegt. Auf dem Kammersteg ist ein Netzquadrat
von 1 mm Kantenlänge eingeätzt, das je Seite in 20 Teile geteilt ist (Abb. 2). Es
entstehen also kleine Quadrate von 1/20 mm Kantenlänge: dies entspricht einer
Fläche von 1/400 mm 2 . Jede 5. Reihe von kleinen Quadraten weist eine Mittellinie
auf. So entsteht im Gesamtnetz eine Abgrenzung zu 25 Gruppenquadraten, die
jeweils aus 16 kleinen Quadraten bestehen.
Die Wahl der Kammertiefe ist vom Zählgut abhängig. Als Faustregel gilt:
Für Hefen und Organismen gleicher Größenordnung : 0,1 mm
Für Bakterien und Organismen gleicher Größenordnung : 0,02 mm
Durchführung:
1. 1 g Bäckerhefe wird in einem Erlenmeyerkolben in 100 ml dest. Wasser
suspendiert. Von dieser Suspension (10 -2 ) wird 1 ml mit 9 ml Wasser im
Reagenzglas vermischt. Diese Suspension der Verdünnungsstufe 10 -3 wird
ausgezählt. Die Verdünnung ist sorgfältig durchzuführen, da der Verdünnungsfaktor
in die Rechnung eingeht.
2. Die beiden äußeren Stege der Zählkammer werden leicht angefeuchtet, dann
wird das Deckglas aufgelegt und ganz vorsichtig auf die Stege gedrückt, so daß
Newton´sche Ringe (Interferenzerscheinung) entstehen, wodurch die Kammerhöhe
genau gewährleistet ist.
3. Mit einer Pasteurpipette wird eine kleine Menge der Hefesuspension 10 -3 (vorher
gut schütteln) aufgenommen und vom Rand her auf den mittleren Kammersteg
getropft, so daß die Flüssigkeit unter das Deckglas gesaugt wird. Wird eine zu
geringe Kammertiefe gewählt, besteht die Gefahr, daß beim Einsaugen zu viele
Organismen am Deckglas hängenbleiben und nicht auf die Meßfläche verteilt
werden, wodurch erhebliche Fehler auftreten können.
4. Die Zählkammer wird unter das Objektiv des Mikroskops gelegt und auf das
eingeätzte Gitternetz des Kammerstegs scharf eingestellt. Kondensorblende stark
abblenden, sonst wird das Gitter nicht sichtbar.
5. Es wird die Anzahl der Hefen, die auf 5 Gruppenquadraten (= 80 kleine
Quadrate) liegen, ausgezählt. Bei der Zählung sind die Organismen, die auf dem
rechten und unteren Rand eines Quadrates liegen nicht zu zählen, um
Doppelregistrierung zu vermeiden.
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