(Störende) Einflüsse biologischer Puffer auf verschiedene Assays * Puffersubstanz BCA a, d Lowry b, d Bemerkungen (Folin) ACES + signifikante Absorption von UV-Licht bei 230 nm, bindet Cu 2+ ADA + + starke Absorption im UV-Bereich unter 260 nm; bindet Metallionen AMP BES – + bindet Cu 2+ Bicarbonat begrenzt löslich; braucht geschlossenes System, da im Gleichgewicht mit CO 2 Bicin + + wird langsam durch Ferricyanid oxidiert; bindet stark Cu 2+ Bis-Tris + Ersatz für Cacodylat Bis-Tris-Propan Borat bildet kovalente Komplexe mit Mono-/Oligosacchariden, Ribose- Untereinheiten von Nukleinsäuren, Pyridinnukleotiden, Glycerin Cacodylat sehr giftig; heute meist durch MES ersetzt CAPS – + CAPSO CHES + Citrat bindet an einige Proteine, komplexiert Metalle; ersetzt durch MES DIPSO + Glycin + stört Bradford-Proteinnachweis Glycylglycin + bindet Cu 2+ HEPES – + kann Radikale bilden, nicht geeignet für Redox-Studien c HEPPS, EPPS – + kann Radikale bilden, nicht geeignet für Redox-Studien c HEPPSO – + kann Radikale bilden, nicht geeignet für Redox-Studien c Imidazol komplexiert Me 2+ , relativ instabil Maleinsäure absorbiert im UV-Bereich; ersetzt durch MES o<strong>der</strong> Bis-Tris MES – + Ersatz für Cacodylat MOPS – + teilweise Zersetzung beim Autoklavieren in Anwesenheit von Glukose; vernachlässigbare Metallionen-Bindung MOPSO + Phosphat Substrat/Inhibitor verschiedener Enzyme (hemmt viele Kinasen <strong>und</strong> Dehydrogenasen, Enzyme mit Phosphatestern als Substrat; hemmt Carboxypeptidase, Fumarase, Urease; präzipitiert/ bindet zweiwertige Kationen; pK steigt bei Verdünnung; PIPES – + kann Radikale bilden, nicht geeignet für Redox-Studien c POPSO + TAPS + TAPSO + TEA TES – + bindet Cu 2+ Tricin + + bindet stark Cu 2+ ; zusätzliches Cu 2+ im Lowry-Assay ermöglicht seine Verwendung; wird durch Flavine photooxidiert; Ersatz für Barbital (Veronal) Tris + + stark Temperatur-sensitiv; pH sinkt pro 10-fache Verdünnung um 0,1 Einheit; inaktiviert DEPC, kann Schiff-Basen mit Aldehyden/ Ketonen bilden, da primäres Amin; nimmt an manchen enzymatischen Reaktionen teil (z.B. Alkalische Phosphatase) * z.T. nach Bollag, D.M. & Edelstein, S.J. (1992) Protein Methods, Kapitel 1, II (S. 3–9). Wiley-Liss, New York. a BCA K<strong>aus</strong>hal, V. & Barnes, L.D. (1986) Anal. Biochem. 157, 291– 294. Die Puffer wurden in einer Konzentration von 50 mM eingesetzt. b Lowry Peterson, G.L. (1979) Anal. Biochem. 100, 201 – 220, mit Empfehlungen, wie man störende Einflüsse min<strong>der</strong>n bzw. beseitigen kann <strong>und</strong> Angaben zu tolerierbaren Endkonzentrationen. Zum Teil reicht es, die betreffende Substanz als Kontrolle einzuschließen. c Radikalbildung Grady, J.K. et al. (1988) Anal. Biochem. 173, 111 – 115. Das Piperazin-Ringsystem bildet unter bestimmten Bedingungen Radikale. Diese Puffer sind deshalb nicht für die Untersuchung von Redox-Prozessen in <strong>der</strong> Biochemie geeignet. d Fehlende Eintragungen bedeuten nicht, dass keine Beeinflussung <strong>der</strong> Ergebnisse möglich ist. 56 chem_is_try • AppliChem © 2008
Nummernk<strong>und</strong>e Keith Tipton <strong>und</strong> Kollegen pfl egen <strong>und</strong> verwalten die Enzymliste für die „International Union of Biochemistry and Molecular Biology“ (IUBMB). Dazu zählt die funktionelle Klassifi zierung bekannter <strong>und</strong> neuer Enzyme gemäß <strong>der</strong> Reaktion die sie katalysieren <strong>und</strong> die Vergabe <strong>der</strong> E.C. Nummer. © 2008 AppliChem • chem_is_try 57