Klonierung und Charakterisierung von reifungsassoziierten ...

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3 MATERIAL UND METHODEN 3.1 Materialien und Geräte 3.1.1 Geräte Material und Methoden Autoklav Technomara, Fernwald Beta-Counter Canberra-Packard, Frankfurt Blutzellseparator CS 3000 Baxter Healthcare, Derrfield, USA Brutschränke Heraeus, Hanau Chromatographie Anlage Pharmacia, Freiburg Densitometer Molecular Dynamics, Krefeld Elektrophoreseapparaturen Biometra, Göttingen; BioRad, München ELISA-Reader MWG-Biotech, Ebersberg; Dynatech, Denkendorf ELISA-Waschgerät Dynatech, Denkendorf Elutriator J6-MC Beckman, München FACScan Becton-Dickenson, San Jose, USA Fluoreszenz-Spektrophotometer Hitachi, Tokyo, Japan Hybridisierungsofen Biometra, Göttingen Mikroskope Leitz, Heidelberg Netzgeräte Biometra, Göttingen; Bachofer, Reutlingen PCR-Thermocycler Perkin Elmer, Überlingen pH-Meter Knick, Berlin Photokamera Polaroid, Cambridge, USA Pumpe, Masterflex 70 1600 Cole-Parmer, Chicago, USA Schweißgerät (Fermant 400) Josten & Kettenbaum, Bensberg Sequenziergerät ABI, Weiterstadt Speed Vac Christ, Osterode Spektrophotometer Perkin Elmer, Überlingen Sterilbänke Heraeus, Hanau Thermomixer Eppendorf, Hamburg Tischzentrifugen Heraeus, Hanau; Eppendorf, Hamburg Ultrazentrifuge Beckman, München Video-Dokumentationssystem Intas, Göttingen Wasseraufbereitungsanlage Millipore, Eschborn 3.1.2 Verbrauchsmaterialien und Plastikartikel Zellkulturflaschen Costar, Cambridge, USA Zellkulturplatten (6, 24, 96 Vertiefungen), Zellkulturschalen Falcon, Heidelberg ELISA-Platten (für MO-Kultivierung) Greiner, Nürtingen Einmalpipetten Costar, Cambridge, USA Zentrifugenröhrchen (15, 50, 225 ml) Falcon, Heidelberg Reaktionsgefäße Eppendorf, Hamburg Poystyrolröhrchen für Durchflußzytometer Falcon, Heidelberg Röntgenfilme X-Omat AR5 Kodak, Rochester, USA 15
Kryoröhrchen Nunc, Naperville Sterilfilter Millipore, Eschborn Nylon Transfermembranen MSI, Westboro, USA Nitrozellulosemembranen Schleicher & Schuell, Dassel 3.1.3 Chemikalien Material und Methoden Alle verwendeten Feinchemikalien waren, wenn nicht anders vermerkt, von Sigma (Deisenhofen) oder Merck (Darmstadt). Von Amersham (Braunschweig) wurden sämtliche verwendeten Radiochemikalien bezogen. Das synthetische Peptid Dansyl- Ala-Arg wurde von der Firma BioTeZ (Berlin) hergestellt, Oligonukleotide wurden von den Firmen MWG Biotech (Ebersberg) und TIB Molbiol (Berlin) synthetisiert. Die verwendeten Materialien für Chromatographie waren, wenn nicht anders vermerkt, von Pharmacia (Freiburg) 3.1.4 Antikörper und Kopplungsreagenzien monoklonale. LeuM5 (Anti CD11c) Dianova, Hamburg My4 (Anti CD14) Coulter, Krefeld MAX-Antikörper F. Emmrich, Leipzig 7A2, 8H8 eigene Arbeitsgruppe TaqStart-Antibody Clontech polyklonale: Schweineserum Dako, Hamburg Kaninchen-Anti-Maus Dako, Hamburg Ziege-Anti-Maus, Peroxidase-gekoppelt Dianova, Hamburg Ziege-Anti-Maus, FITC-gekoppelt Dianova, Hamburg Schwein-Anti-Kaninchen Dako, Hamburg Kaninchen-Peroxidase-Anti Peroxidase Dako, Hamburg Streptavidin-Peroxidase Dianova, Hamburg Streptavidin-Alkalische Phosphatase Dianova, Hamburg NHSS-Biotin Serva, Heidelberg 3.1.5 Enzyme, Inhibitoren und molekularbiologische Kits 5´-End Labeling Kit Amersham, Braunschweig Aprotinin Boehringer Mannheim DNAse I (RNAse-frei) Boehringer Mannheim Expand PCR Systeme Boehringer Mannheim Glykosidasen Boehringer Mannheim Leupeptin Boehringer Mannheim Marathon cDNA Amplification Kit Clontech, Palo Alto, USA pCRII-Cloning Kit Invitrogen, San Diego, CA, USA Phosphatidylinosit-Phospholipase C Boehringer Mannheim Plasmid Mini Kit Qiagen, Hilden PMSF Sigma, Deisenhofen 16
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Seite 39 und 40: 3.4.3 Präparative Methoden zur Pro
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Seite 43 und 44: Material und Methoden Die Protein G
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Seite 49 und 50: Kontrolle (ohne alles) Tabelle 3-5
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Seite 55 und 56: Material und Methoden erzeugten Del
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Seite 59 und 60: 3.5.4.5 Northern-Blotting - RNA-Tra
Seite 61 und 62: Material und Methoden 3.5.5 Phagens
Seite 63 und 64: Waschlösung A 50 ml (2x) SSC (20x)
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Seite 67 und 68: H HN H HN O S O S NH H NH H D-Bioti
Seite 69 und 70: MW (kDa) Abbildung 4-3 Immunpräzip
Seite 71 und 72: 4.1.4 Expression und enzymatische A
Seite 73 und 74: 4.1.5 7A2-Antigen Ergebnisse In Zus
Seite 75 und 76: Ergebnisse 4.1.6.2 Charakterisierun
Seite 77 und 78:
Ergebnisse Da bei der anfänglichen
Seite 79 und 80:
Ergebnisse 58-64 kDa wurde ausgesch
Seite 81 und 82:
Ergebnisse 4.3 Klonierung von reifu
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Ergebnisse Als nächstes wurden zur
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IV.a. V.a. IV.b. V.b. Ergebnisse Ab
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Ergebnisse Abbildung 4-19 Northern
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Ergebnisse Transkriptions-Startregi
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Ergebnisse Abbildung 4-22 Different
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1 GCACGAGCCAAGCCCATGAGGGCCGCGCGCCCG
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Zellmembran Ergebnisse Abbildung 4-
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5 DISKUSSION 5.1 Charakterisierung
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Diskussion dieser Antikörper siche
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Diskussion Endothelzell- oder Fibro
Seite 103 und 104:
Diskussion Wie in Tabelle 5-1 gezei
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Diskussion Peptidhormone sind an vi
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Diskussion (Bhoola et al., 1992). V
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Diskussion 5.1.1.2.3 Makrophagen un
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-Arg CPM NO iNOS L-Arg L-Arg L-Citr
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Diskussion Auch konnte keine Wechse
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5.2 Molekularbiologische Identifizi
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Diskussion arteriosklerotischen Pla
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Diskussion Es gelang die Klonierung
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Zusammenfassung Gegensatz zu dem an
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Literatur Auger, M.J., and Ross, J.
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Literatur Ganter, U., Bauer, J., Ma
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Literatur Marinkovic, D.M., Ward, D
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Literatur Rouis., M., Nigon, F., Eg
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Literatur Zaiss, M., Krause, S.W.,
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