Klonierung und Charakterisierung von reifungsassoziierten ...

Ergebnisse
Wie in Abbildung 4-12 demonstriert, konnte frisch präpariertes MAX.3-Antigen
vollständig an WGL-Agarose gebunden werden. ConA-Sepharose zeigte eine
niedrigere Affinität für das Antigen.
Abbildung 4-12 Bindung von MAX.3-Antigen an Lektine. Über Affinitätschromatographie
gereinigtes MAX.3 Antigen (Bahn A) wurde mit
WGL-Agarose (Bahn B) oder ConA-Sepharose (Bahn C) gefällt und
nach SDS-PAGE Silber-gefärbt. Auf Bahn D und E wurden die
jeweiligen Überstände (Restprotein nach der Fällung) aufgetragen.
Abbildung 4-13
MW
(kDa)
Präparation von MAX.3-Antigen für die
Mikrosequenzanalyse. Über Immunaffinität und
Lectinaffinität gereinigtes Antigen wurde nach
SDS-Page und Western-Blot auf PVDF-Membran
mit Coomassie Blue angefärbt.
Das Antigen wurde von S. Heinz, im Rahmen seiner Diplomarbeit in unserer
Arbeitsgruppe, aus mehreren Thrombozytenlysaten angereichert. Insgesamt fünf
Antigen-enthaltende Fraktionen wurden über WGL-Agarose auf 600 µl Volumen
eingeengt und in vier Portionen mit Chloroform extrahiert. Das gefällte Protein wurde
über ein 10%iges SDS-Gel aufgetrennt und nach dem Blotten auf PVDF-Membran
mit Coomassie angefärbt (s. Abbildung 4-13). Die deutlich gefärbte Proteinbande bei
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