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III Ergebnisse 3.1 Untersuchungen zum Neuritenwachstum Zur Quantifizierung des Neuritenwachstums wurden primäre Spinalganglienstücke aus Hühnerembryonen gewonnen und unter verschiedenen Bedingungen drei Tage lang kultiviert. Nach anschließender Fixierung und immunhistochemischer Markierung der Neurofilamente ließen sich deren Verteilung in den Neuronen über mehrere hundert µm verfolgen. Die morphometrische Auswertung erfolgte am CLSM (Zeiss LSM 510), wobei die Neuritenlänge in µm bestimmt wurde (Abb. 1). Abb. 3 Einflussnahme auf das Auswachsen von Neuriten Darstellung des Neuritenwachstums mit Hilfe immunhistochemischer Markierung von NFM‐FITC und Auswertung am CLSM. Nach Kultivierung über 72h in (a) Nährmedium ohne jegliche stimulierende Faktoren, (b) nach Addition von 50 ng/ml NGF, (c) 0,1 µg/ml VEGF, (d) VEGF + NGF, (e) 10 nM Progesteron und (f) Progesteron + NGF sind deutliche Alterationen in der (g) quantitativen Auswertung festzustellen. (** p
3.1.1 Untersuchungen zur Wirkung von VEGF In diesem Versuchsaufbau wurden die Wirkungen von NGF [50 ng/ml], VEGF [0,1 µg/ml] und VEGF + NGF sowie nach Blockade des VEGFR‐2 (durch Axitinib [58 µmol/ml]) mit Kontrollen verglichen. Rein deskriptiv ließen sich große Unterschiede feststellen. Während bei allen Proben ein radiäres Auswachsen nachzuweisen war, zeigte die alleinige Inkubation mit NGF (Abb. 1b) ein deutlich dichteres Neuritengeflecht und ein gesteigertes Auswachsen. Bereits nach alleiniger Inkubation mit VEGF waren diese Effekte nochmals sichtbar gesteigert (Abb. 1c). Bei einer kombinierten Applikation von VEGF + NGF (Abb. 1d) wuchsen die Neuriten noch weiter aus, und auch das Neuritengeflecht präsentierte sich dichter. Durch die Hinzugabe des VEGFR‐2‐Inhibitors Axitinib konnten die durch VEGF hervorgerufenen Wirkungen blockiert werden, so dass die so behandelten Proben mit den Kontrollen vergleichbare morphologische Eigenschaften aufwiesen, wobei toxische Wirkungen auf die Nervenzellen ausgeschlossen wurden. Für die morphometrischen Analysen wurden pro Bedingung 8 Spinalganglienstücke an jeweils 8 Punkten vermessen (n=8, 64 Neuriten pro Bedingung; Gesamtzahl 320). Die Ergebnisse bestätigten den ersten Eindruck (Abb. 1g), denn während die durchschnittliche Neuritenlänge in den Kontrollen 1271 ± 342 µm betrug, war eine Steigerung um 37% nach NGF‐ (1 721 ± 226 µm, p
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