Cryptococcal Antigen Latex Agglutination System (CALAS®)

PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
A. Liquido cefalorachidiano (Meridian non raccomanda il trattamento preliminare
dei campioni di liquor con la Pronase, tuttavia un recente studio 14 ha dimostrato
che il trattamento enzimatico del liquor può essere utile in alcuni casi).
1. Prelevare il campione di liquor mediante rachicentesi.
2. Centrifugare a 1000 xg per 15 minuti per eliminare tutti I leucociti ed altri
elementi figurati.
3. Prelevare con attenzione il sovranatante, trasferirlo in una provetta sterile e
sigillare l’imboccatura.
4. I campioni possono essere esaminati immediatamente, conservati in
frigorifero, congelati a -20 C oppure mediante aggiunta di timerosal ad una
concentrazione finale pari allo 0,01%.
5. Si raccomanda di inattivare I campioni di liquor facendoli bollire (100
C) per 5 minuti prima di sottoporli al test. 7 Questo trattamento termico
tende a limitare le interferenze aspecifiche.
6. Lasciar raffreddare il tutto per 3-4 minuti prima di iniziare il test.
B. Siero (Si raccomanda il trattamento preliminare di tutti i campioni di siero
mediante Pronase).
1. Prelevare sterilmente il sangue mediante tecniche standard. Non utilizzare
alcun tipo di anticoagulante, poiché questi ultimi possono invalidare il
risultato del test.
2. Lasciar coagulare il sangue a temperatura ambiente per almeno 10 minuti.
3. Centrifugare a 1000 xg per 15 minuti.
4. Prelevare con attenzione il siero, trasferirlo in una provetta sterile e sigillare
l’imboccatura.
5. I campioni possono essere esaminati immediatamente, conservati in
frigorifero, congelati a -20 C oppure mediante aggiunta di timerosal ad una
concentrazione finale pari allo 0,01%.
6. Aggiungere 200 µL di siero a 200 µL di Pronase.
7. Incubare il tutto in bagnetto termostatato a 56 C per 15 minuti.
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