Cryptococcal Antigen Latex Agglutination System (CALAS®)

A tal fine si preparano diluizioni scalari in base 2 del campione seguendo queste
istruzioni:
1. Distribuire 0,25 mL di Diluente del campione in 5 provette contrassegnate con
numeri da 1 a 5.
2. Utilizzando una pipette pulita, distribuire 0,25 mL di campione nella provetta 1 e
mescolare bene il tutto.
3. Trasferire 0,25 mL di soluzione dalla provetta 1 alla provetta 2 e mescolare bene.
Continuare con questo metodo fino alla provetta 5. Trasferire 0,25 mL dalla
provetta 5 ad una provetta vuota e conservarli in caso sia necessario allestire
ulteriori diluizioni.
Nota:
Provetta 1 2 3 4 5
Campioni trattati con Pronase 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64
Campioni non trattati con Pronase 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
4. Contrassegnare gli anelli di una lastrina di reazione pulita ed asciutta per
eseguire la titolazione in doppio con il Lattice di ricerca ed il Lattice di
controllo.
5. Cominciando dalla provetta 4, distribuire 25 µL di campione nei due anelli di
reazione corrispondenti.
6. Fare la stessa cosa per le provette da 3 ad 1: questo metodo consente di
utilizzare un singolo puntale per le quattro diluizioni del campione.
7. Aggiungere una goccia di Lattice di ricerca a tutti gli anelli di reazione
corrispondenti.
8. Aggiungere una goccia di Lattice di controllo a tutti gli anelli di reazione
corrispondenti.
9. Utilizzando un pezzo di bastoncino di legno diverso per ciascun anello,
mescolare i reagenti.
10. Ruotare la lastrina manualmente o per mezzo di un agitatore orbitante (125 ± 25
rpm) per 5 minuti.
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