Cryptococcal Antigen Latex Agglutination System (CALAS®)

B. Suero (Se recomienda que todas las muestras de suero sean tratadas con
pronasa tal como se describió anteriormente).
1. Recoja sangre total de manera aséptica según el procedimiento del centro.
La muestra no debe contener anticoagulantes ya que esta circunstancia
invalidaría el test.
2. Deje que la sangre coagule durante 10 minutos o más a temperatura
ambiente y dentro de un tubo de recogida.
3. Centrifugar a 1000 xg durante 15 minutos.
4. Aspire el suero cuidadosamente, colóquelo dentro de un contenedor estéril
y séllelo.
5. La muestra debe ser procesada de inmediato, refrigerada y conservada
congelada a -20 C o añadiendo timerosal a una concentración final del
0,01%.
6. Añada 200 µL de suero a 200 µL de la solución de pronasa.
7. Incube la solucióñ suero/pronasa a 56 C durante 15 minutos.
8. Inmediatamente después, hierva la solución suero/pronasa durante cinco
minutos para finalizar la digestión enzimática.
9. Deje que la solución se enfríe a temperatura ambiente.
10. La muestra está lista para ser procesada (vea PROCEDIMIENTO).
NOTA: Si se va a proceder con titulaciones, la muestra del paciente ha sido diluida 1:2
con la solución de pronasa.
C. Control Negativo – Inactive por calor el Control Negativo a 56 C durante 30
minutos. Debe ser inactivado por calor cada día que se utilice.
CONTROL DE LA ACTIVIDAD PRONASA
Cada solución suero/pronasa procesada actúa como control para determinar si la
Pronasa CALAS ha perdido actividad. Si se produciera gelatinización o coagulación
de la solución suero/pronasa, la Pronasa CALAS habría perdido una actividad
significativa y no debería entonces ser utilizada. Tenga en cuenta que la nubosidad
aparece habitualmente después de hervir y no es indicativa de un Reactivo de
Pronasa deficiente.
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