DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

More documents

Recommendations

Info

Linealidad La linealidad del análisis se determinó analizando la recuperación de la dilución de una serie de muestras de etil-glucurónido en el análisis. Se realizó una dilución seriada de una muestra de orina que contenía 2000 ng/ml de etil-glucurónido con orina sin EtG en incrementos del 25% respecto a los calibradores de cut-off. Estas muestras se analizaron tanto en el modo cualitativo como en el modo semicuantitativo del análisis. Todas las muestras se recuperaron con un margen de ±20% respecto a los valores esperados en el modo semicuantitativo y con la velocidad esperada (mA/min) en el modo cualitativo, lo que indica que el análisis es lineal hasta los 2000 ng/ml. Exactitud Se analizaron 184 muestras con el análisis de etil-glucurónido DRI ® en los modos cualitativo y semicuantitativo, y se compararon los resultados con los obtenidos con el método de LC/MS/MS. En ambos modos, la concordancia de las muestras positivas con el análisis de EtG DRI ® y con el método de LC/MS/MS fue del 96%. Los resultados obtenidos con los modos cualitativo y semicuantitativo se resumen a continuación. Modo cualitativo: Con el cut-off de 500 ng/ml, 94 de las 184 muestras se detectaron como positivas y 85 como negativas; con el cut-off de 1000 ng/ml, se detectaron 44 muestras como positivas y 138 como negativas tanto con el inmunoanálisis como con el método de LC/MS/MS. La concordancia global entre el inmunoanálisis y el método de LC/MS/MS fue del 97%. Hubo cinco muestras discordantes con el cut-off de 500 ng/ml y dos con el cut-off de 1000 ng/ml. Cut-off 500 ng/ml Cut-off 1000 ng/ml Análisis de EtG DRI ® Análisis de EtG DRI ® + - + - + 94 3 * + 44 2 ♠ LC/MS/MS LC/MS/MS - 2 ¥ 85 - 0 138 * Dos de las tres muestras fueron negativas en el límite con el inmunoanálisis. Una de las muestras fue positiva en el límite con el método de LC/MS/MS. ¥ Las muestras fueron positivas en el límite con el inmunoanálisis. ♠ Las muestras fueron negativas en el límite con el inmunoanálisis. Los valores con el método de LC/MS/MS estuvieron entre 1000 y 1250 ng/ml. Semicuantitativo: En el modo semicuantitativo, las muestras con concentraciones de EtG >500 ng/ml y 1000 ng/ml se consideraron positivas en el inmunoanálisis. De las 184 muestras, 94 se detectaron como positivas y 85 como negativas tanto con el inmunoanálisis como con los métodos de LC/MS/MS. LC/MS/MS Análisis de EtG DRI ® + - + 94 3* - 2 ¥ 85 * Se utilizaron las mismas muestras que en el modo cualitativo con 500 ng/ml. ¥ Se utilizaron las mismas muestras que en el modo cualitativo con 500 ng/ml. 12 Bibliografía Fabricante: Microgenics Corporation 46360 Fremont Blvd. Fremont, CA 94538 EE.UU. Número gratuito en EE.UU.: 1-800-232-3342 Representante autorizado en la UE: Microgenics GmbH Spitalhofstrasse 94 D-94032 Passau - Alemania Tel: +49 (0) 851 886 89 0 Fax: +49 (0) 851 886 89 10 Otros países: Póngase en contacto con su representante local de Microgenics. 1. Ethyl Glucuronide: An unusual Ethanol Metabolite in Humans.Synthesis, Analytical Data, and Determination in Serum and Urine. Schmitt G., et al. Journal of Analytical Toxicology. 1995, 19:91-94. 2. Comparison of Urinary Excretion Characteristics of Ethanol and Ethyl Glucuronide. Dahl H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:201-204. 3. Ethyl Glucuronide- the direct ethanol metabolite on the threshold from science to routine use. Wurst FM et al. Addiction. 2003, 98 (S2) 51-61. 4. Ethyl Glucuronide- A Biological Marker for recent alcohol consumption. Seidi S. et al. Addiction Biology. 2001, 6(3):205-212. 5. Ethyl Glucuronide: A Biomarker to identify Alcohol use by Health Professionals Recovering from Substance use Disorders. Skipper G.E et al. Alcohol and Alcoholism, 2004, 39(5):445- 449. 6. Ethyl Glucuronide- A marker of Recent Alcohol Consumption with Clinical and Forensic Implications. Wurst FM et al. Alcohol. 2000, 20(2):111-116. 7. Ethyl Glucuronide (EtG): A new marker to detect Alcohol use in recovering physicians., Skipper G.E., et al. Journal of Medical Licensure and Discipline. 2004, 90(2): 14-17. 8. Production of urinary ethanol after sample collection. Saady, J.J., Poklis, A.and Dalton, H.P. (1993) Journal of Forensic Sciences 38, 1467-1471. 9. Preliminary immunochemical test for the determination of Ethyl Glucuronide in serum and urine: Comparison of screening method results with Gas Chromatography- Mass spectrometry. Zimmer H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:11-16. 10. Confirmatory Analysis of Ethyl Glucuronide in urine by liquid chromatography/Elctrospray Ionization/Tandem Mass Spectrometry according to forensic guidelines. Weinmann W. et al. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2004, 15(2):188-193.
Dosaggio DRI ® per glucuronide di etile N. di catalogo: 10011723 (kit da 18 ml) 10011297 (kit da 68 ml) 10011226 (kit da 500 ml) Uso previsto L’ immunodosaggio enzimatico DRI ® per glucuronide di etile deve essere usato per la determinazione qualitativa e semi quantitativa del glucuronide di etile nell’urina umana a valori limite di 500 e 1000 ng/ml. Questo dosaggio fornisce unicamente un risultato analitico preliminare. Per ottenere un risultato analitico di conferma, è necessario utilizzare un metodo alternativo più specifico. I metodi di conferma migliori sono la gascromatografia e cromatografia liquida accoppiata alla spettrometria di massa (GC/MS) e la cromatografia liquida accoppiata alla spettrometria di massa tandem (LC/MS/MS). Qualsiasi risultato di analisi riguardante sostanze stupefacenti, soprattutto nel caso di un risultato preliminare positivo, va trattato con la considerazione clinica e la discrezione professionale opportune. Sommario e spiegazione del test Il glucuronide di etile (EtG) è un metabolita diretto dell’etanolo che si forma tramite la coniugazione enzimatica di etanolo con l’acido glucuronico. 1,2 La presenza di alcol nelle urine normalmente viene rilevata solo per alcune ore mentre la presenza di EtG può essere rilevata fino a diversi giorni dall’eliminazione completa di alcol dal corpo. 3 Pertanto, l’EtG è un biomarcatore diagnostico utile per rilevare un uso recente di alcol e monitorare l’astinenza negli alcolizzati che partecipano a un programma di disintossicazione dall’alcol. 4-7 L’etanolo può essere prodotto in vitro a causa della fermentazione dei campioni di urina che contengono zucchero (in caso di diabetici), batteri o fermenti quando i campioni vengono esposti a temperature alte. 8 In tali casi, il test dell’EtG può essere usato come test di conferma per determinare se la presenza di alcol nel campione è dovuta a consumo di alcol o è il risultato della fermentazione in vitro. Attualmente l’EtG viene monitorato con GC/MS e LC/MS/MS. 9-10 Il dosaggio DRI ® per il glucuronide di etile viene fornito come immunodosaggio enzimatico omogeneo in forma liquida pronto per l’uso. Il dosaggio utilizza anticorpi specifici che sono in grado di rilevare il glucuronide di etile senza alcuna reattività crociata significativa con altri composti di glucuronide. Il dosaggio si basa sulla competizione della sostanza marcata con enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PDH) con la sostanza di interesse contenuta nel campione di urina per un numero fisso di siti di legame anticorpale specifico. In assenza di sostanza di interesse nel campione, l’anticorpo specifico si lega alla sostanza marcata con enzima G6PDH e provoca una riduzione dell’attività enzimatica. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della sostanza di interesse nel campione di urina e l’attività enzimatica. L’enzima attivo converte il NAD in NADH con una conseguente variazione di assorbanza che può essere misurata spettrofotometricamente a 340 nm. Reagenti Reagente anticorpo/substrato: Contiene anticorpi monoclonali murini anti-glucuronide di etile, glucosio-6-fosfato (G6P) e nicotinamide adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con sodio azide come conservante. Reagente coniugato enzimatico: Contiene derivato di glucuronide di etile marcato con glucosio-6fosfato deidrogenasi (G6PDH) in tampone Tris con sodio azide come conservante. Ulteriori materiali necessari (venduti separatamente) 10011207, Calibratore negativo DRI ® per glucuronide di etile, 25 ml 10011208, Calibratore DRI ® per glucuronide di etile, 100 ng/ml, 10 ml 10011210, Calibratore DRI ® per glucuronide di etile, 500 ng/ml, 10 ml 10011212, Calibratore DRI ® per glucuronide di etile, 1000 ng/ml, 10 ml 10011213, Calibratore DRI ® per glucuronide di etile, 2000 ng/ml, 10 ml 10012135, Controllo DRI ® per glucuronide di etile, 375 ng/ml, 25 ml 10012136, Controllo DRI ® per glucuronide di etile, 625 ng/ml, 25 ml 10012137, Controllo DRI ® per glucuronide di etile, 750 ng/ml, 25 ml 10012138, Controllo DRI ® per glucuronide di etile, 1250 ng/ml, 25 ml Avvertenze e precauzioni 1. Il presente test è esclusivamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono nocivi se ingeriti. 2. I reagenti del dosaggio contengono sodio azide, che può reagire con il rame o il piombo delle tubature di scarico generando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Per lo smaltimento dei reagenti, usare abbondanti quantità di acqua per evitare l’accumulo di azidi metallici. 3. Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Preparazione e conservazione dei reagenti I reagenti sono pronti per l’uso: non è richiesta un’ulteriore preparazione. I reagenti vanno conservati in frigorifero a 2-8 °C. Tutti i componenti del dosaggio, chiusi o aperti, sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulle rispettive etichette. Non usare i reagenti scaduti. Raccolta e trattamento del campione Raccogliere i campioni di urina in recipienti di vetro o plastica. Sono preferibili campioni di urina fresca. Ai sensi del Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (direttive riguardanti i programmi per i test antidroga negli ambiti professionali federali), i campioni non analizzati entro 7 giorni dal loro arrivo al laboratorio vanno conservati in frigoriferi di sicurezza. Conservare sempre i campioni di urina in frigorifero. I campioni con un pH da 4,5 a 11 sono adatti per essere analizzati con questo dosaggio. 13 Per uso diagnostico in vitro È necessario fare il possibile per mantenere i campioni pipettati privi di residui solidi. Prima dell’analisi, i campioni eccessivamente torbidi vanno centrifugati. L’adulterazione dei campioni di urina può dare luogo a risultati errati. Se si sospetta adulterazione, ottenere un altro campione e inviare entrambi i campioni al laboratorio per l’analisi. Manipolare tutti i campioni di urina come se fossero potenzialmente infettivi. Procedura di analisi Per eseguire il presente immunodosaggio è possibile utilizzare gli analizzatori chimico-clinici in grado di mantenere una temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti, misurare i tassi enzimatici a 340 nm e regolare con precisione i tempi di reazione. Prima di eseguire l’analisi, consultare le istruzioni applicative specifiche di ciascun analizzatore per ottenere i parametri chimici. Controllo di qualità e calibrazione Una buona prassi di laboratorio prevede l’analisi di campioni di controllo allo scopo di garantire le corrette prestazioni del dosaggio. Accertarsi che i risultati dei controlli rientrino nel range stabilito, secondo quanto determinato dalle procedure di laboratorio e dalle linee guida. In caso contrario, i risultati del dosaggio non sono validi. Per le analisi qualitative, come riferimento per valore limite, usare il calibratore da 500 ng/ml o 1000 ng/ml. Per le analisi semiquantitative usare tutti i tipi di calibratore. Tutte le procedure di controllo della qualità devono essere svolte in ottemperanza alle norme in vigore o ai requisiti per l’accreditamento. Risultati e valori attesi Qualitativa Il calibratore da 500 ng/ml o quello da 1000 ng/ml può essere usato come riferimento per valore limite per distinguere i campioni “positivi” da quelli “negativi”. Un campione con una variazione del valore di assorbanza (∆A) uguale o maggiore rispetto a quello ottenuto dal calibratore per il valore limite è considerato positivo. Un campione con una variazione del valore di assorbanza (∆A) minore rispetto a quello ottenuto dal calibratore per valore limite è considerato negativo. Semiquantitativa Una stima approssimativa della concentrazione di glucuronide di etile nei campioni può essere ottenuta tracciando una curva standard con tutti i calibratori ed effettuando la quantitazione dei campioni su di essa. Quando la concentrazione di EtG nel campione è maggiore di quella del calibratore più alto, è possibile diluire il campione con il calibratore negativo e sottoporlo nuovamente ad analisi. Range refertabile Il dosaggio DRI ® per il glucuronide di etile è previsto per l’uso in analisi semiquantitative nel range tra 100 ng/ml, il calibratore più basso, e 2000 ng/ml, il valore del calibratore alto. Limitazioni 1. Un risultato positivo del dosaggio DRI ® per glucuronide di etile indica solo la presenza di glucuronide di etile e non si correla necessariamente alla portata degli effetti fisiologici e psicologici. 2. Le prestazioni del dosaggio DRI ® per il glucuronide di etile non sono state stabilite con fluidi corporei diversi dall’urina umana. 3. Il presente dosaggio DRI ® per il glucuronide di etile è stato convalidato su analizzatori dotati di una stazione di lavaggio cellulare incorporata. Se l’analizzatore in dotazione non dispone di una stazione di lavaggio cellulare incorporata, rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona. 4. Esercitare l’opportuna cautela nella refertazione dei risultati poiché molti sono i fattori che possono influire sul risultato di un’analisi dell’urina, come ad esempio la quantità di liquidi assunta e altri fattori di ordine biologico. 5. È possibile che altre sostanze diverse da quelle considerate nello studio di specificità possano interferire con l’analisi e dare luogo a risultati falsi. Caratteristiche di rendimento del test tipiche Le caratteristiche di rendimento del test tipiche ottenibili mediante l’analizzatore Hitachi 917 sono riportate qui di seguito. I valori ottenuti nei diversi laboratori possono essere differenti da quelli riportati in questa sede. Per ulteriori dati relativi alle prestazioni specifiche degli analizzatori, consultare il foglio delle applicazioni relativo all’analizzatore in questione. Precisione I controlli DRI ® per il glucuronide di etile (da 375, 625, 750 e 1250 ng/ml) e i calibratori per valore limite (da 500 e 1000 ng/ml) sono stati analizzati in modalità qualitativa (mA/min) e semiquantitativa (ng/ml) usando un protocollo NCCLS modificato. I risultati presentati di seguito sono stati generati testando tutti i campioni in replicati di 6, due volte al giorno per 10 giorni. Qualitativa (mA/min) Calibratore/controllo Valore limite di 500 ng/ml N=120 375 500 625 Precisione intra-analisi Precisione totale Media DS CV (%) Media DS CV (%) 392 417 439 2,1 2,1 2,0 0,5 0,5 0,5 392 417 439 2,9 3,1 2,7 0,7 0,7 0,6
Page 1 and 2: DRI ® Ethyl Glucuronide Assay Cata
Page 3 and 4: Linearity The assay linearity was d
Page 5 and 6: Qualitativ (mA/min) Kalibrator/ Kon
Page 7 and 8: Dosage DRI ® Éthylglucuronide Ré
Page 9 and 10: Linéarité La linéarité du dosag
Page 11: Cualitativo (mA/min) Calibrador/Con
Page 15 and 16: Linearità La linearità del dosagg
Page 17 and 18: Qualitativo (mA/min) Calibrador/Con
Page 19 and 20: DRI ® -analys för etylglukuronid
Page 21 and 22: Linjäritet Analysens linjäritet f
Page 23 and 24: Kvalitativ (mA/min) Kalibrator/kont
Page 25 and 26: DRI ® etylglukuronid-assay Katalog
Page 27 and 28: Linearitet Assay-lineariteten ble b

DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?