DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

Dosage DRI ® Éthylglucuronide
Réf. 10011723 (Coffret de 18 ml)
10011297 (Coffret de 68 ml)
10011226 (Coffret de 500 ml)
Application
Le dosage immunoenzymatique DRI ® Éthylglucuronide est destiné à la détermination qualitative
et semi-quantitative de l’éthylglucuronide dans l’urine humaine avec des seuils de 500 ng/ml et de
1000 ng/ml.
Ce dosage ne fournit qu’un résultat analytique préliminaire. Tout résultat positif devra
être confirmé par une autre méthode plus spécifique. Les méthodes de validation par
chromatographie en phase gazeuse/liquide couplée à la spectrométrie de masse (CG-SM) et
par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (CL-
SM-SM) sont préférables. Les résultats d’un test de dépistage de toxicomanie doivent être
interprétés en tenant compte du tableau clinique et de l’avis d’un professionnel, en particulier
si des résultats positifs préliminaires sont utilisés.
Résumé et description du test
L’éthylglucuronide (EtG) est un métabolite direct de l’éthanol, qui est formé par conjugaison
enzymatique de l’éthanol avec l’acide glucuronique. 1,2
L’alcool dans l’urine n’est normalement détecté
que pendant quelques heures, alors que l’éthylglucuronide peut être détecté même jusqu’à plusieurs
jours après l’élimination complète de l’alcool par le corps. 3
Par conséquent, l’éthylglucuronide peut
être un biomarqueur diagnostique utile pour déterminer une consommation récente d’alcool et pour
contrôler l’abstinence des alcooliques dans les programmes de sevrage alcoolique. 4-7
L’éthanol
peut être produit in vitro par la fermentation des échantillons d’urine contenant du sucre (diabète),
des bactéries ou des levures lorsque les échantillons sont exposés à températures chaudes. 8
Dans
ces cas, le dosage de l’éthylglucuronide peut être utilisé comme analyse de confirmation afin de
déterminer si l’alcool présent dans l’échantillon est dû à une consommation d’alcool ou s’il s’est
formé in vitro suite à une fermentation. Actuellement, l’éthylglucuronide est déterminé par CG-SM
et par CL-SM-SM. 9-10
Le dosage DRI ® Éthylglucuronide est fourni sous forme de dosage immunoenzymatique en phase
homogène liquide et prêt à l’emploi. Le dosage utilise des anticorps spécifiques qui peuvent détecter
l’éthylglucuronide, sans réactivité croisée significative avec d’autres composés glucuronides.
Le dosage est basé sur la compétition entre un médicament marqué à la glucose-6-phosphate
déshydrogénase (G6PDH) et le médicament libre dans l’échantillon urinaire pour une quantité
déterminée de sites de liaison de l’anticorps spécifique du médicament. En l’absence de médicament
libre dans l’échantillon, l’anticorps spécifique lie le médicament marqué à la G6PDH et provoque
une diminution de l’activité enzymatique. Ce phénomène engendre une relation directe entre la
concentration du médicament présent dans l’échantillon urinaire et l’activité enzymatique. L’enzyme
active convertit le NAD en NADH, ce qui entraîne un changement d’absorbance pouvant être mesuré
par spectrophotométrie à 340 nm.
Réactifs
Réactif anticorps/substrat : Contient un anticorps monoclonal murin anti-éthylglucuronide, du
glucose-6 phosphate (G6P) et du nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) dans un tampon Tris
avec de l’azide de sodium comme conservateur.
Réactif conjugué enzymatique : Contient un dérivé de l’éthylglucuronide marqué à la glucose-
6-phosphate déshydrogénase (G6PDH) en tampon Tris avec de l’azide de sodium comme
conservateur.
Matériel supplémentaire requis (vendu individuellement) :
10011207, Calibrateur négatif DRI ® Éthylglucuronide, 25 ml
10011208, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (100 ng/ml), 10 ml
10011210, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (500 ng/ml), 10 ml
10011212, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (1000 ng/ml), 10 ml
10011213, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (2000 ng/ml), 10 ml
10012135, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (375 ng/ml), 25 ml
10012136, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (625 ng/ml), 25 ml
10012137, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (750 ng/ml), 25 ml
10012138, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (1250 ng/ml), 25 ml
Mises en garde et avertissements
1. Ce test est réservé à un usage diagnostique in vitro. Les réactifs sont nocifs par
ingestion.
2. Les réactifs utilisés dans ce dosage contiennent de l’azide de sodium, susceptible de
réagir dans les canalisations en plomb ou en cuivre et de former des azides métalliques
potentiellement explosifs. Lors de l’élimination de ces réactifs, toujours rincer à grande
eau pour éviter l’accumulation d’azide.
3. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.
Préparation et stockage des réactifs
Les réactifs sont prêts à l’emploi ; aucune préparation supplémentaire n’est nécessaire. Les réactifs
doivent être conservés réfrigérés (entre 2 °C et 8 °C). Tous les composants du dosage, ouverts ou
non ouverts, restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur leur étiquette. Ne pas utiliser
les réactifs au-delà de leur date de péremption.
Prélèvement et manipulation des échantillons
Collecter les échantillons urinaires dans des récipients en plastique ou en verre. Il est recommandé
d’effectuer le dosage sur des échantillons d’urine frais.
Les Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs recommandent que
tout échantillon qui n’est pas initialement testé dans les 7 jours suivant son arrivée au laboratoire
doit être conservé dans un réfrigérateur en milieu fermé. Les échantillons d’urine doivent être
continuellement réfrigérés.
Les échantillons dont la plage de pH se situe entre 4,5 et 11 conviennent pour ce dosage.
7
Pour usage diagnostique in vitro
Les échantillons prélevés à la pipette ne doivent pas contenir de gros débris. Centrifuger les
échantillons très troubles avant l’analyse. L’adultération des échantillons d’urine peut produire des
résultats erronés. Si l’on soupçonne une adultération, recueillir un autre échantillon et les envoyer
tous les deux au laboratoire aux fins d’analyse. Manipuler tous les échantillons urinaires comme
s’ils étaient potentiellement infectieux.
Procédure du dosage
Pour réaliser ce dosage immunologique, utiliser un analyseur de chimie clinique qui soit capable
de maintenir une température constante, de prélever des échantillons à la pipette, de mélanger les
réactifs, de mesurer les taux enzymatiques à 340 nm et de minuter la réaction avec précision.
Se référer aux directives d’utilisation spécifiques définissant les paramètres chimiques de l’analyseur
avant de réaliser le dosage.
Contrôle qualité et calibration
Les bonnes pratiques de laboratoire recommandent d’utiliser des échantillons de contrôle pour
garantir des performances correctes du dosage. S’assurer que les résultats des contrôles se situent
dans les plages établies définies par les procédures et les recommandations du laboratoire. Si les
résultats se situent en dehors de la plage de valeurs établie, les résultats du dosage ne sont pas
valides. Pour les analyses qualitatives, utiliser le calibrateur de 500 ng/ml ou de 1000 ng/ml comme
valeur seuil. Pour les analyses semi-quantitatives, utiliser tous les calibrateurs. Tous les contrôles
qualité doivent être réalisés conformément aux règlements locaux et nationaux ou aux exigences
d’agrément.
Résultats et valeurs attendues
Détermination qualitative
On peut utiliser le calibrateur de 500 ng/ml ou celui de 1000 ng/ml comme seuil de référence
pour différencier les échantillons positifs des échantillons négatifs. Un échantillon qui présente
un changement de valeur d’absorbance (∆A) égal ou supérieur à la valeur obtenue avec le
calibrateur seuil est considéré comme positif. Un échantillon qui présente un changement de valeur
d’absorbance (∆A) inférieur à la valeur obtenue avec le calibrateur seuil est considéré comme
négatif.
Détermination semi-quantitative
On peut obtenir une estimation approximative de la concentration d’éthylglucuronide dans les
échantillons en traçant une courbe de calibration avec tous les calibrateurs et en quantifiant
les échantillons à partir de la courbe de calibration. Si la concentration d’éthylglucuronide d’un
échantillon est supérieure à celle du calibrateur de concentration la plus élevée, il est possible de
diluer l’échantillon avec le calibrateur négatif et de le tester à nouveau.
Plage d’efficacité
Le dosage DRI ® Éthylglucuronide est conçu pour une détermination semi-quantitative sur la
plage allant de 100 ng/ml, le calibrateur de concentration la plus faible, à 2000 ng/ml, la valeur du
calibrateur de concentration élevée.
Limitations
1. Un résultat positif avec le dosage DRI ® Éthylglucuronide indique uniquement la
présence d’éthylglucuronide et n’est pas nécessairement en corrélation avec
l’importance des effets physiologiques et psychologiques.
2. Les performances du dosage DRI ® Éthylglucuronide n’ont pas été établies pour des
liquides corporels autres que l’urine humaine.
3. Le dosage DRI ® Éthylglucuronide a été validé sur les analyseurs comprenant un
lavage de cellules intégral. Si l’analyseur utilisé ne comprend pas de lavage de cellules
intégral, s’adresser au représentant local de Thermo Fisher Scientific.
4. Prendre toutes les précautions nécessaires lors de l’expression des résultats car
de nombreux facteurs tels que l’apport hydrique ou d’autres facteurs biologiques
peuvent influencer le résultat d’un test urinaire.
5. Il est possible que d’autres substances que celles recherchées dans l’étude de
spécificité interfèrent avec le test et faussent les résultats.
Performance caractéristique
Les résultats de performance caractéristiques indiqués ci-dessous ont été obtenus avec un analyseur
Hitachi 917. Les résultats obtenus dans votre laboratoire peuvent être différents de ces données.
Pour consulter d’autres données de performance spécifiques à l’analyseur, se reporter à la fiche
technique de ce dernier.
Précision
Les contrôles DRI ® Éthylglucuronide (375, 625, 750 et 1250 ng/ml) et les calibrateurs seuil (500 et
1000 ng/ml) ont été testés en modes qualitatif (mA/min) et semi-quantitatif (ng/ml) selon un protocole
modifié du NCCLS. Les résultats présentés ci-dessous ont été générés en analysant 6 répliques de
tous les échantillons, deux fois par jour, pendant 10 jours.
Détermination qualitative (mA/min)
Calibrateur/contrôle Seuil 500 ng/ml
N=120 Moyenne
375
500
625
392
417
439
Précision intra-série Précision totale
Écart-
type
2,1
2,1
2,0
CV (%) Moyenne
0,5
0,5
0,5
392
417
439
Écarttype
2,9
3,1
2,7
CV (%)
0,7
0,7
0,6