DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

DRI ® -analys för etylglukuronid
Beställningsnr: 10011723 (18 mL sats)
10011297 (68 mL sats)
10011226 (500 mL sats)
Avsedd användning
DRI ® -enzymimmunoanalysen för etylglukuronid är avsedd för kvalitativt och semikvantitativt
fastställande av etylglukuronid i humanurin vid brytpunkterna 500 samt 1000 ng/mL.
Analysen ger endast ett preliminärt analytiskt testresultat. En mer specifik alternativ metod
måste användas för att få ett bekräftat analytiskt resultat. Gaskromatografi-/vätskekromatografimasspektrometri
(GC/MS) och vätskekromatografi/tandemmasspektrometri (LC/MS/MS)
föredras som bekräftelsemetoder. Kliniska beaktanden och professionell bedömning ska
användas vid alla drogmissbrukstestresultat, särskilt vid användning av preliminärt positiva
resultat.
Sammanfattning och förklaring av testet
Etylglukuronid (EtG) är en direkt metabolit från etanol som bildas via enzymatisk konjugation av etanol
med glukuronsyra. 1,2
Alkohol i urinen detekteras vanligtvis bara under några timmar, medan EtG kan
detekteras upp till flera dagar efter det att alkoholen t.o.m. eliminerats helt från kroppen. 3
Därför kan
EtG vara en användbar diagnostisk biomarkör för att fastställa nyligt alkoholintag samt för att övervaka
alkoholisters avhållsamhet vid behandling för alkoholavvänjning. 4-7
Etanol kan framställas in vitro via
jäsning av urinprover som innehåller socker (diabetes), bakterier eller jäst när proverna exponeras
för varma temperaturer. 8
I sådana fall kan EtG-testet användas för att bekräfta om alkoholen i provet
kommer från alkoholkonsumtion eller har bildats in vitro som resultat av jäsning. EtG övervakas för
närvarande med GC/MS och LC/MS/MS. 9-10
DRI ® -analysen för etylglukuronid levereras som en flytande homogen enzymimmunoanalys som är
färdig att användas. Analysen använder specifika antikroppar som kan detektera etylglukuronid utan
betydande korsreaktivitet med andra glukuronidföreningar. Analysen baseras på konkurrens mellan
en drog som märkts med glukos-6-fosfat-dehydrogenas (G6PDH) samt fria droger från urinprovet för
en bestämd mängd bindningsområden med specifika antikroppar. Vid brist på fria droger från provet
binder den specifika antikroppen den G6PDH-märkta drogen och orsakar därmed en minskning
i enzymaktivitet. Detta fenomen skapar en direkt relation mellan urinens drogkoncentration och
enzymaktiviteten. Aktiva enzymer omvandlar NAD till NADH, vilket resulterar i en absorbansförändring
som kan mätas med spektrofotometri vid 340 nm.
Reagens
Antikropps-/substratreagens: Innehåller monoklonala musantikroppar mot etylglukuronid, glukos-
6-fosfat (G6P) samt nikotin-amidadenin-dinukleotid (NAD) i Tris-buffert, med natriumazid som
konserveringsmedel.
Enzymkonjugatreagens: Innehåller derivat av etylglukuronid som märkts med glukos-6-fosfatdehydrogenas
(G6PDH) i Tris-buffert, med natriumazid som konserveringsmedel.
Ytterligare material som krävs (säljs separat):
10011207, DRI ® negativ kalibrator för etylglukuronid, 25 mL
10011208, DRI ® 100 ng/mL kalibrator för etylglukuronid, 10 mL
10011210, DRI ® 500 ng/mL kalibrator för etylglukuronid, 10 mL
10011212, DRI ® 1 000 ng/mL kalibrator för etylglukuronid, 10 mL
10011213, DRI ® 2 000 ng/mL kalibrator för etylglukuronid, 10 mL
10012135, DRI ® 375 ng/mL kontroll för etylglukuronid, 25 mL
10012136, DRI ® 625 ng/mL kontroll för etylglukuronid, 25 mL
10012137, DRI ® 750 ng/mL kontroll för etylglukuronid, 25 mL
10012138, DRI ® 1 250 ng/mL kontroll för etylglukuronid, 25 mL
Försiktighetsåtgärder och varningar
1. Detta test är endast för diagnostisk användning in vitro. Reagenserna är farliga vid
förtäring.
2. Reagenserna som används i analyskomponenterna innehåller natriumazid, vilket kan
reagera med bly- och kopparrör så att eventuellt explosiva metallazider bildas. Spola
alltid med rikliga mängder vatten vid kassering av sådana reagenser för att förhindra
att azid ansamlas.
3. Använd inte reagenserna efter respektive utgångsdatum.
Beredning och lagring av reagens
Reagenserna är färdiga att användas; ingen ytterligare beredning krävs. Reagenserna ska förvaras
i kylskåp, i 2 till 8 °C. Samtliga analyskomponenter, oavsett om de har öppnats eller inte, förblir
stabila fram till det utgångsdatum som står på respektive etikett. Använd inte reagenserna efter
respektive utgångsdatum.
Provtagning och -hantering
Urinprover ska tas i plast- eller glasbehållare. Vi rekommenderar att färska urinprover används.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Obligatoriska riktlinjer för
federala drogtestningsprogram för arbetsplatser) rekommenderar att prover som inte underkastas
ett initialt test inom 7 dagar efter ankomsten till laboratoriet ska placeras i säkra kylenheter.
Urinprover bör alltid förvaras i kylskåp.
Prover med 4,5-11 i pH-värde är lämpade för test med denna analys.
Försök hålla pipettprover fria från grovt skräp. Prover som är mycket grumliga ska centrifugeras före
analys. Utspädda urinprover kan orsaka felaktiga resultat. Om ni misstänker att provet har spätts
ut ska ett annat prov användas. Skicka båda proverna till laboratoriet för analys. Hantera alla
urinprover som potentiellt smittsamma substanser.
19
Analysprocedur
För diagnostisk användning in vitro
Kemianalysatorer, som klarar att hålla en konstant temperatur, pipettprover, reagensblandningar,
mätning av enzymatiska värden vid 340 nm och exakt tidsbestämning av reaktionen, kan användas
till att genomföra denna analys.
Se de särskilda tillämpningsanvisningarna för varje analysator för kemiparametrar innan analysen
utförs.
Kvalitetskontroll och kalibrering
Enligt god laboratoriepraxis ska kontrollprover användas för att säkerställa lämplig analysprestanda.
Säkerställ att kontrollresultaten ligger inom etablerat område, som har fastställts med laboratoriets
procedurer och riktlinjer. Om resultaten ligger utanför etablerat område är analysresultaten ogiltiga.
För kvalitativ analys ska 500 ng/mL- eller 1 000 ng/mL-kalibratorn användas som brytpunkt. För
semikvantitativ analys ska samtliga kalibratorer användas. Alla kvalitetskontrollkrav bör uppfyllas i
enlighet med lokala, regionala och/eller nationella föreskrifter eller auktoriseringskrav.
Resultat och förväntade värden
Kvalitativ
Använd antingen 500 ng/mL- eller 1 000 ng/mL-kalibratorn som brytpunktsreferens för att särskilja
”positiva” och ”negativa” prover. Ett prov som uppvisar en förändring i absorbansvärde (∆A) som
är lika med eller överstiger vad som erhålls med brytpunktskalibratorn anses vara positivt. Ett
prov som uppvisar en förändring i absorbansvärde (∆A) som understiger vad som erhålls med
brytpunktskalibratorn anses vara negativt.
Semikvantitativ
Du kan få en ungefärlig beräkning av etylglukuronidkoncentrationen i proverna genom att köra
en standardkurva med alla kalibratorer, och kvantifiera proverna med standardkurvan som
utgångspunkt. När EtG-koncentrationen överstiger koncentrationen för den högsta kalibratorn kan
provet spädas ut med negativ kalibrator och testas om.
Rapporterbart område
DRI ® -analysen för etylglukuronid har utformats för semikvantitativ användning i området mellan
100 ng/mL (lägsta kalibratorn) och 2 000 ng/mL (värdet för högsta kalibratorn).
Begränsningar
1. Ett positivt resultat med DRI ® -analysen för etylglukuronid indikerar endast förekomst
av etylglukuronid, och medför inte nödvändigtvis någon korrelation med omfattningen
av fysiologiska och psykologiska effekter.
2. Prestandaegenskaperna för DRI ® -analysen för etylglukuronid har inte etablerats för
andra kroppsvätskor än humanurin.
3. Denna DRI ® -analys för etylglukuronid har bekräftats på analysatorer med integrerad
celltvätt. Om den analysator som du använder inte omfattar integrerad celltvätt ska
du kontakta en lokal Thermo Fisher Scientific-representant.
4. Var försiktig vid rapport av resultat, eftersom många faktorer, t.ex. vätskeintag och
övriga biologiska faktorer, kan påverka ett urinprovsresultat.
5. Det kan hända att andra substanser än de som undersöks i specificitetsanalysen stör
testet och orsakar falska resultat.
Typiska prestandaegenskaper
Typiska prestandadata som erhållits med analysatorn Hitachi 917 visas nedan. De resultat som erhålls
i ditt laboratorium kan skilja sig från dessa data. Se tillämpningsbladet för den särskilda analysatorn
för ytterligare analysatorspecifika prestandadata.
Precision
DRI ® -kontrollerna (375, 625, 750 och 1 250 ng/mL) samt -brytpunktskalibratorerna (500 and
1000 ng/mL) för etylglukuronid har testats i kvalitativt (mA/min) och semikvantitativt (ng/mL) läge
med modifierat NCCLS-protokoll. Nedanstående resultat framställdes genom test av samtliga prover
i 6 replikat två gånger om dagen i 10 dagar.
Kvalitativ (mA/min)
Kalibrator/
kontroll
N=120
375
500
625
Medelvärde
392
417
439
500 ng/mL brytpunkt
Inomserieprecision Total precision
Standardavvikelse
(SD)
2,1
2,1
2,0
% variationskoefficient
(CV)
0,5
0,5
0,5
Medelvärde
392
417
439
Standardavvikelse
(SD)
2,9
3,1
2,7
% variationskoefficient
(CV)
0,7
0,7
0,6