DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

DRI ® ethylglucuronid-analyse
Katalognr.: 10011723 (18 ml kit)
10011297 (68 ml kit)
10011226 (500 ml kit)
Tilsigtet anvendelse
DRI ® ethylglucuronid-enzymimmunanalyse er beregnet til kvalitativ og semi-kvantitativ bestemmelse
af ethylglucuronid i human urin ved cutoff-værdier på 500 og 1000 ng/ml.
Denne analyse giver kun et præliminært analytisk testresultat. Der skal anvendes en mere
specifik, alternativ metode for at opnå et dokumenteret, analytisk resultat. De foretrukne
konfirmatoriske metoder er gaskromatografi/flydende kromatografi-massespektometri (GC/MS)
og flydende kromatografi/tandem- massespektrometri (LC/MS/MS). Der skal udvises klinisk
omtanke og professionel vurdering ved ethvert testresultat til påvisning af misbrug af stoffet,
især når der anvendes præliminære positive resultater.
Opsummering og forklaring af testen
Ethylglucoronid (EtG) er en direkte metabolit af ethanol, som dannes ved den enzymatiske konjugation
af ethanol med glucuronsyre. 1,2
Alkohol i urin kan normalt kun påvises i et par timer, hvorimod EtG
kan påvises i op til flere dage, selv efter fuldstændig eliminering af alkohol fra kroppen. 3
EtG kan
derfor være nyttig som en diagnostisk biomarkør til bestemmelse af nylig alkoholindtagelse og til
monitorering af abstinens hos alkoholikere, der deltager i alkoholbehandlingsprogrammer. 4-7
Ethanol
kan produceres in vitro pga. fermentation af urinprøver, der indeholder sukker (diabetes), bakterier
eller gær, når prøverne eksponeres for varme temperaturer. 8
I sådanne tilfælde kan EtG-testen
anvendes som en konfirmatorisk test til at bestemme, om alkoholen i prøven skyldes indtagelse af
alkohol, eller den dannes in vitro som et resultat af fermentation. EtG monitoreres på det nuværende
tidspunkt af GC/MS og LC/MS/MS. 9-10
DRI ® ethylglucoronid-analysen leveres som en flydende, homogen, brugsklar enzymanalyse. Analysen
bruger specifikke antistoffer, som kan påvise ethylglucuronid uden nogen signifikant krydsreaktivitet
med andre glucuronidstoffer. Analysen er baseret på konkurrence mellem et medikament mærket
med glucose-6-fosfatdehydrogenase (G6PDH) og frit medikament fra urinprøven for en fast mængde
af specifikke antistofbindingssteder. Ved fraværet af frit medikament fra prøven binder det specifikke
antistof medikamentet mærket med G6PDH og forårsager et fald i enzymaktiviteten. Dette fænomen
skaber et direkte forhold mellem medikamentkoncentrationen i urin og enzymaktiviteten. Aktivt
enzym omdanner NAD til NADH, hvilket resulterer i en absorbansændring, som kan måles med
spektrofotometer ved 340 nm.
Reagenser
Antistof-/Substratreagens: Indeholder monoklonalt anti-ethylglucuronid-antistof fra mus,
glucose-6-fosfat (G6P) og nicotinamid-adenindinukleotid (NAD) i Tris-buffer med natriumazid som
konserveringsmiddel.
Enzymkonjugatreagens: Indeholder ethylglucuronid-derivat mærket med glucose-6fosfatdehydrogenase
(G6PDH) i Tris-buffer med natriumazid som konserveringsmiddel.
Nødvendige ekstra materialer (sælges separat):
10011207, DRI ® ethylglucuronid-negativ kalibrator, 25 ml
10011208, DRI ® ethylglucuronid-kalibrator 100 ng/ml, 10 ml
10011210, DRI ® ethylglucuronid-kalibrator 500 ng/ml, 10 ml
10011212, DRI ® ethylglucuronid-kalibrator 1000 ng/ml, 10 ml
10011213, DRI ® ethylglucuronid-kalibrator 2000 ng/ml, 10 ml
10012135, DRI ® ethylglucuronid 375 ng/ml kontrol, 25 ml
10012136, DRI ® ethylglucuronid 625 ng/ml kontrol, 25 ml
10012137, DRI ® ethylglucuronid 750 ng/ml kontrol, 25 ml
10012138, DRI ® ethylglucuronid 1250 ng/ml kontrol, 25 ml
Forholdsregler og advarsler
1. Denne test er kun til in vitro diagnostisk anvendelse. Reagenserne er skadelige ved
indtagelse.
2. Reagenserne anvendt i analysekomponenterne indeholder natriumazid, som kan reagere
med bly- og kobberrør og danne potentielt eksplosive metalazider. Ved bortskaffelse
af sådanne reagenser skylles med rigelige mængder vand for at undgå aflejring af
azider.
3. Reagenser må ikke anvendes efter udløbsdatoerne er overskredet.
Reagensforberedelse og opbevaring
Reagenserne er klar til brug. Ingen yderligere forberedelse er nødvendig. Reagenserne bør opbevares
i køleskab ved 2-8 °C. Alle analysekomponenter, i åben eller uåben stand, er holdbare indtil
udløbsdatoen, som er angivet på deres respektive etiketter. Reagenserne må ikke anvendes efter
deres udløbsdatoer er overskredet.
Prøvetagning og -håndtering
Indsaml urinprøver i plast- eller glasbeholdere. Det foreslås at anvende friske urinprøver.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Obligatoriske retningslinjer
for stoftest på offentlige arbejdspladser) anbefaler, at prøver, der ikke testes inden for 7 dage efter
modtagelse på laboratoriet, bør placeres i sikrede køleskabe. Urinprøver skal altid opbevares i
køleskabet.
Prøver, hvor pH-værdien er inden for 4,5 og 11, er egnede til testning med denne analyse.
22
Til in vitro diagnostisk anvendelse
Der skal tages tiltag til at holde de pipetterede prøver fri for groft snavs. Centrifuger stærkt uklare
prøver før analysen. Forfalskning af urinprøverne kan give fejlagtige resultater. Hvis der er mistanke
om forfalskning, skal der opnås en anden prøve, og begge prøver skal fremsendes til laboratoriet
mhp. testning. Håndter alle urinprøver, som om de var smitsomme.
Analyseprocedure
Til denne immunanalyse kan der anvendes kliniske kemianalysatorer, der er i stand til at bibeholde en
konstant temperatur, pipettere prøver, blande reagenser, måle hastigheden af enzymatiske reaktioner
ved 340 nm og indstille reaktionerne præcist.
Se de specifikke anvendelsesinstruktioner for hver analysator vedrørende kemiparametrene, inden
analysen foretages.
Kvalitetskontrol og kalibrering
God laboratoriepraksis foreslår brug af kontrolprøver til at sikre korrekt analysepræstation. Sørg for,
at kontrolresultaterne er inden for det fastlagte værdiområde, som fastlagt af laboratorieprocedurer
og retningslinjer. Hvis resultaterne falder uden for de fastlagte værdiområder, er analyseresultaterne
ugyldige. Brug 500 ng/ml eller 1000 ng/ml kalibrator som cutoff-niveau ved kvalitativ analyse. Brug
alle kalibratorer ved semi-kvantitativ analyse. Alle kvalitetskontrolkrav bør udføres i overensstemmelse
med lokale og/eller nationale regler eller akkrediteringskrav.
Resultater og forventede værdier
Kvalitative analyser
Der kan anvendes enten 500 ng/ml eller 1000 ng/ml kalibratorer som en cutoff-reference til at skelne
“positive” prøver fra “negative” prøver. En prøve, som viser en ændring i absorbansværdi (∆A), der
er lig med eller større end den værdi, der blev opnået med cutoff-kalibratoren, anses som positiv.
En prøve, som viser en ændring i absorbansværdi (∆A), der er lavere end den værdi, der blev opnået
med cutoff-kalibratoren, anses som negativ.
Semi-kvantitative analyser
Der kan opnås en grov vurdering af ethylglucuronid-koncentrationen i prøverne ved at køre en
standardkurve med alle kalibratorer og ved at mængdebestemme prøverne fra standardkurven. Når
koncentrationen af EtG i prøven er større end den højeste kalibrator, kan prøven fortyndes med den
negative kalibrator og testes igen.
Rapporterbart område
DRI ® ethyl glucuronid-analysen er beregnet til semi-kvantitativ anvendelse i området mellem
100 ng/ml, den laveste kalibrator, og 2000 ng/ml, værdien af den højeste kalibrator.
Begrænsninger
1. Et positivt resultat med anvendelse af DRI ® ethylglucuronid-analysen angiver kun
tilstedeværelsen af ethylglucuronid, og korrelerer ikke nødvendigvis med omfanget
af fysiologiske og psykologiske virkninger.
2. Præstationskarakteristika for DRI ® ethylglucuronid-analysen er ikke fastlagt med
andre legemsvæsker end human urin.
3. Denne DRI ® ethylglucuronid-analyse blev valideret på analysatorer, der anvender en
integreret celleskylning. Hvis din analysator ikke har en integreret celleskylning, skal
du kontakte den lokale repræsentant for Thermo Fischer Scientific.
4. Der skal udvises forsigtighed ved rapportering af resultater, da der er mange faktorer,
fx væskeindtagelse og andre biologiske faktorer, som kan påvirke resultatet af en
urinprøve.
5. Det er muligt, at andre stoffer end dem, der undersøges i den specifikke undersøgelse,
kan påvirke testen og give falske resultater.
Typiske præstationskarakteristika
Typiske præstationsresultater opnået på Hitachi 917-analysatoren er angivet nedenfor. De resultater,
der opnås på de enkelte laboratorier, kan afvige fra disse data. Der henvises til det analysatorspecifikke
anvendelsesskema for yderligere præstatationsdata specifikke for analysatoren.
Præcision
DRI ® ethylglucuronid-kontrollerne (375, 625, 750 og 1250 ng/ml) og cutoff-kalibratorerne (500 og
1000 ng/ml) blev testet i kvalitativ (mA/min) og semi-kvantitativ (ng/ml) tilstand vha. en modificeret
NCCLS-protokol. Resultaterne, der præsenteres herunder, blev genereret ved testning af alle prøver
i replikater på 6, to gange dagligt i 10 dage.
Kvalitativ (mA/min)
Kalibrator/kontrol 500 ng/ml cutoff
N=120
375
500
625
Præcision inden for analyse Total præcision
Gennemsnitsværdi
392
417
439
SD % CV
2,1
2,1
2,0
0,5
0,5
0,5
Gennemsnitsværdi
392
417
439
SD % CV
2,9
3,1
2,7
0,7
0,7
0,6