DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

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Détermination qualitative (mA/min) Calibrateur/contrôle Seuil 1000 ng/ml N=120 Moyenne 750 1000 1250 461 494 524 Précision intra-série Précision totale Écarttype 2,4 2,7 2,7 Détermination semi-quantitative (ng/ml) CV (%) Moyenne 0,5 0,6 0,5 461 494 524 Calibrateur/contrôle Seuil 500 ng/ml N=120 Moyenne 375 500 625 373 502 623 Écarttype 3,4 3,4 3,8 Précision intra-série Précision totale Écarttype 11,3 10,5 13,2 Détermination semi-quantitative (ng/ml) CV (%) Moyenne 3,0 2,1 2,1 373 502 623 Calibrateur/contrôle Seuil 1000 ng/ml N=120 Moyenne 750 1000 1250 756 993 1232 Écarttype 18,1 19,4 22,3 Précision intra-série Précision totale Écarttype 16,9 21,1 23,0 CV (%) Moyenne 2,2 2,1 1,9 756 993 1232 Caractérisation du seuil – Détection d’échantillons enrichis Écarttype 31,2 34,3 43,5 CV (%) 0,7 0,7 0,7 CV (%) 4,9 3,9 3,6 CV (%) Des calibrateurs seuils, de 500 ng/ml et de 1000 ng/ml, et des contrôles de ±25 % ont été préparés en enrichissant avec de l’éthylglucuronide des échantillons d’urine ne contenant pas d’éthylglucuronide. Le calibrateur seuil et les contrôles ont été analysés (n=21) en mode qualitatif et en mode semi-quantitatif. Les données qualitatives ont été analysées pour déterminer la précision et l’exactitude de la détection des contrôles et les données semi-quantitatives ont été analysées pour déterminer la précision et la détection en %. Les résultats ont indiqué que les quatre contrôles ont été détectés avec exactitude en mode qualitatif, les contrôles négatifs produisant un résultat négatif (valeur inférieure à celle du calibrateur seuil) et les contrôles positifs produisant un résultat positif (valeur supérieure à celle du calibrateur seuil). En mode semi-quantitatif, les contrôles ont été détectés avec des valeurs de ±10 % des valeurs nominales. La précision a produit un CV de moins de 1,0 % en mode qualitatif et un CV de moins de 5,0 % en mode semi-quantitatif. Interférence avec les substances endogènes Les interférences potentielles du pH et de substances physiologiques endogènes sur la détection de l’éthylglucuronide avec le dosage DRI ® Éthylglucuronide ont été évaluées en ajoutant des quantités connues de substances potentiellement interférentes dans les contrôles de ±25 % pour les deux seuils (500 ng/ml et 1000 ng/ml), puis en analysant les échantillons pour déterminer la détection de l’éthylglucuronide. Aucune interférence n’a été observée lors de l’ajout des composés suivants jusqu’aux concentrations indiquées ci-dessous. Substance interférente Concentration finale mg/dl Acétone Acide acétylsalicylique Acide ascorbique Acide oxalique Albumine sérique humaine Caféine Chlorure de sodium Créatinine Éthanol Galactose Glucose Hémoglobine Ibuprofène Paracétamol Riboflavine Urée pH 1000 10 190 30 500 10 900 400 10 10 3000 300 10 10 3,75 1000 4,5-11,0 4,1 3,5 3,5 8 Spécificité La réactivité croisée de composés apparentés de l’éthanol et de composés glucuronides présents couramment dans l’urine a été analysée avec le dosage en utilisant le calibrateur seuil de 500 ng/ml. Les solutions pouvant produire des réactions croisées ont été préparées en ajoutant une quantité connue de chaque composé à de l’urine ne contenant pas d’éthylglucuronide. Tous les composés ont produit des résultats négatifs aux concentrations indiquées dans le tableau ci-dessous. Composé Concentration (ng/ml) Acétaldéhyde Acide glucuronique Alprazolam glucuronide Buprénorphine glucuronide Butanol D-glucose Éthanol Éthylène glycol Hydroxycoumarine glucuronide Isopropanol Lorazepam glucuronide Méthanol Méthylglucuronide Morphine-3-glucuronide Morphine-6-glucuronide Norbuprénorphine glucuronide n-propanol Oxazépam glucuronide p-nitrophényl glucuronide Témazépam glucuronide Testostérone Glucuronide 10000 10000 10000 10000 10000 10000 100000 10000 10000 10000 10000 10000 5000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 10000 La réactivité croisée de composés non structurellement apparentés a été analysée avec le dosage en utilisant le calibrateur seuil de 500 ng/ml. Tous les composés ont produit des résultats négatifs aux concentrations indiquées dans le tableau ci-dessous. Sensibilité 6 acétyl morphine Acide acétylsalicylique Amitryptiline Amoxicilline Amphétamine Benzoylecgonine Caféine Carbamazépine Chlorpromazine Cimétidine Clomipramine Codéine Désipramine Dextrométhorphane Dihydrocodéine Doxépine Éphédrine Fentanyl Fluoxéthine Fluphénazine Héroïne Hydrocodone Hydromorphone Ibuprofène Imipramine Lévorphanone Maprotiline Mépéridine Méthadone Métronidazole Morphine Morphine-3-glucuronide Nalbuphine Naltrexone Norcodéine Normorphine Nortryptiline Oxazépam Oxycodone Paracétamol Phencyclidine Phénobarbital Ranitidine Sécobarbital Talwin Thébaïne Thioridazine Tramadol Composé Concentration (µg/ml) 500 500 100 100 1000 1000 100 500 100 500 100 1000 1000 200 1000 200 2000 200 1000 500 1000 200 200 1000 1000 500 1000 1000 1000 500 1000 1000 1000 3000 1000 1000 500 500 500 500 1000 1000 500 1000 500 100 500 500 La sensibilité du dosage a été évaluée à 15,3 ng/ml par l’EP Evaluator 7.0.
Linéarité La linéarité du dosage a été déterminée en analysant la détection de dilution d’une série d’échantillons d’éthylglucuronide avec le dosage. Des dilutions sérielles d’un échantillon d’urine contenant 2000 ng/ml d’éthylglucuronide ont été réalisées avec de l’urine ne contenant pas d’éthylglucuronide à des incréments de 25 % des calibrateurs seuils. Ces échantillons ont été analysés avec le dosage en mode qualitatif et en mode semi-quantitatif. Tous les échantillons ont été détectés avec une valeur de ±20 % des valeurs attendues en mode semi-quantitatif et ±20 % des valeurs attendues (mA/min) en mode qualitatif, ce qui indique que le dosage est linéaire jusqu’à 2000 ng/ml. Exactitude Cent-quatre-vingt-quatre échantillons ont été analysés avec le dosage DRI ® Éthylglucuronide en mode qualitatif et en mode semi-quantitatif et les résultats ont été comparés à la méthode de CL-SM-SM. En mode qualitatif et en mode semi-quantitatif, la coïncidence des échantillons positifs entre le dosage DRI ® Éthylglucuronide et la méthode de CL-SM-SM était de 96 %. Les résultats obtenus en modes qualitatif et semi-quantitatif sont résumés ci-dessous. Détermination qualitative : Sur 184 échantillons, en utilisant un seuil de 500 ng/ml, 94 échantillons ont produit un résultat positif et 85 échantillons ont produit un résultat négatif et, avec un seuil de 1000 ng/ml, 44 échantillons ont produit un résultat positif et 138 échantillons ont produit un résultat négatif aussi bien avec le dosage immunologique qu’avec la CL-SM-SM. Le taux de coïncidence globale entre le dosage immunologique et la CL-SM-SM était de 97 %. Cinq échantillons étaient discordants avec le seuil de 500 ng/ml et deux l’étaient avec le seuil de 1000 ng/ml. Seuil de 500 ng/ml Seuil de 1000 ng/ml Dosage DRI ® EtG Dosage DRI ® EtG + - + - + 94 3 * + 44 2 ♠ CL-SM-SM CL-SM-SM - 2 ¥ 85 - 0 138 * Deux des trois échantillons ont produit un résultat négatif limite avec le dosage immunologique. Un échantillon a produit un résultat positif limite avec la CL-SM-SM. ¥ Les échantillons ont produit un résultat positif limite avec le dosage immunologique. ♠ Les échantillons ont produit un résultat négatif limite avec le dosage immunologique. Les valeurs de la CL-SM-SM étaient entre 1000 et 1250 ng/ml. Détermination semi-quantitative : En mode semi-quantitatif, les échantillons ayant une concentration en éthylglucuronide supérieure à 500 ng/ml et à 1000 ng/ml ont été considérés comme positifs avec le dosage immunologique. Sur 184 échantillons, 94 échantillons ont produit un résultat positif et 85 échantillons ont produit un résultat négatif aussi bien avec le dosage immunologique qu’avec la CL-SM-SM. CL-SM-SM Dosage DRI ® EtG + - + 94 3* - 2 ¥ 85 * Les échantillons étaient les mêmes échantillons qu’en mode qualitatif avec un seuil de 500 ng/ml. ¥ Les échantillons étaient les mêmes échantillons qu’en mode qualitatif avec un seuil de 500 ng/ml. 9 Bibliographie Fabricant : Microgenics Corporation 46360 Fremont Blvd. Fremont, CA 94538 États-Unis Numéro gratuit depuis les États-Unis : +1-800-232-3342 Mandataire établi dans l’UE : Microgenics GmbH Spitalhofstrasse 94 D-94032 Passau, Allemagne Tél : +49 (0) 851 886 89 0 Fax : +49 (0) 851 886 89 10 Autres pays : Contacter le représentant local de Microgenics. 1. Ethyl Glucuronide: An unusual Ethanol Metabolite in Humans.Synthesis, Analytical Data, and Determination in Serum and Urine. Schmitt G., et al. Journal of Analytical Toxicology. 1995, 19:91-94. 2. Comparison of Urinary Excretion Characteristics of Ethanol and Ethyl Glucuronide. Dahl H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:201-204. 3. Ethyl Glucuronide- the direct ethanol metabolite on the threshold from science to routine use. Wurst FM et al. Addiction. 2003, 98 (S2) 51-61. 4. Ethyl Glucuronide- A Biological Marker for recent alcohol consumption. Seidi S. et al. Addiction Biology. 2001, 6(3):205-212. 5. Ethyl Glucuronide: A Biomarker to identify Alcohol use by Health Professionals Recovering from Substance use Disorders. Skipper G.E et al. Alcohol and Alcoholism, 2004, 39(5):445- 449. 6. Ethyl Glucuronide- A marker of Recent Alcohol Consumption with Clinical and Forensic Implications. Wurst FM et al. Alcohol. 2000, 20(2):111-116. 7. Ethyl Glucuronide (EtG): A new marker to detect Alcohol use in recovering physicians., Skipper G.E., et al. Journal of Medical Licensure and Discipline. 2004, 90(2): 14-17. 8. Production of urinary ethanol after sample collection. Saady, J.J., Poklis, A.and Dalton, H.P. (1993) Journal of Forensic Sciences 38, 1467-1471. 9. Preliminary immunochemical test for the determination of Ethyl Glucuronide in serum and urine: Comparison of screening method results with Gas Chromatography- Mass spectrometry. Zimmer H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:11-16. 10. Confirmatory Analysis of Ethyl Glucuronide in urine by liquid chromatography/Elctrospray Ionization/Tandem Mass Spectrometry according to forensic guidelines. Weinmann W. et al. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2004, 15(2):188-193.
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