DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

DRI ® etylglukuronid-assay
Katalognr.: 10011723 (18 ml sett)
10011297 (68 ml sett)
10011226 (500 ml sett)
Tiltenkt bruk
DRI ® etylglukuronidenzym-immunoassayet er beregnet for kvalitativ og semikvantitativ bestemmelse
av etylglukuronid i human urin ved grenseverdier på 500 og 1000 ng/ml.
Dette assayet gir kun et foreløpig analytisk testresultat. Det må anvendes en mer
spesifikk alternativ metode for å oppnå et bekreftet analytisk resultat. Gasskromatografi/
væskekromatografi-massespektrometri (GC/MS) og væskekromatografi/tandem
massespektrometri (LC/MS/MS) er de foretrukne bekreftelsesmetodene. Klinisk vurdering og
profesjonell dømmekraft bør anvendes ved ethvert resultat av tester for misbruk av narkotika,
spesielt når foreløpige positive resultater blir brukt.
Sammendrag og forklaring av testen
Etylglukuronid (EtG) er en direkte metabolitt av etanol, som dannes ved enzymatisk konjugasjon av
etanol med glukuronidsyre. 1,2 Alkohol i urinen detekteres vanligvis bare i noen få timer, mens EtG
kan detekteres i opp til flere dager, til og med etter at alkoholen har blitt fullstendig eliminert fra
kroppen. 3
EtG kan derfor være en nyttig diagnostisk biomarkør for å fastslå nylig bruk av alkohol
og for å overvåke avholdenhet hos alkoholikere som gjennomgår behandlingsprogrammer for
alkoholabstinens. 4-7
Etanol kan produseres in vitro på grunn av fermentering av urinprøver som
inneholder sukker (diabetes), bakterier eller gjær når prøvene eksponeres i varme temperaturer. 8
EtG-testen kan i slike tilfeller brukes som en bekreftelsestest for å fastslå om alkoholen i prøven er
grunnet alkoholforbruk eller om det har dannet seg in vitro som et resultat av fermentering. For tiden
kontrolleres EtG via GC/MS og LC/MS/MS. 9-10
DRI ® etylglukuronid-assayet leveres som et klar-til-bruk, flytende homogent enzym-immunoassay.
Assayet bruker spesifikke antistoffer som kan detektere etylglukuronid uten signifikant kryssreaktivitet
med andre glukuronidforbindelser. Assayet er basert på konkurranse mellom et legemiddel merket
med glukose-6-fosfatdehydrogenase (G6PDH) og fritt (ubundet) legemiddel fra urinprøven for en
fast mengde med spesifikke antistoff-bindingssteder. Ved fravær av fritt legemiddel fra prøven,
bindes det spesifikke antistoffet med legemiddelet merket med G6PDH og forårsaker en reduksjon
i enzymaktiviteten. Dette fenomenet skaper et direkte forhold mellom legemiddelkonsentrasjonen
i urinen og enzymaktiviteten. Det aktive enzymet forvandler NAD til NADH og dette resulterer i en
absorbansendring som kan måles spektrofotometrisk ved 340 nm.
Reagenser
Antistoff/substratreagens: Inneholder musmonoklonalt anti-etylglukuronid-antistoff, glukose-
6-fosfat (G6P) og nikotinamid adenin dinukleotid (NAD) i Tris-buffer med natriumazid som
konserveringsmiddel.
Enzymkonjugat-reagens: Inneholder etylglukuronid-derivat merket med glukose-6fosfatdehydrogenase
(G6PDH) i Tris-buffer med natriumazid som konserveringsmiddel.
Ytterligere nødvendige materialer (solgt separat):
10011207, DRI ® etylglukuronid negativ-kalibrator, 25 ml
10011208, DRI ® etylglukuronid-kalibrator 100 ng/ml, 10 ml
10011210, DRI ® etylglukuronid-kalibrator 500 ng/ml, 10 ml
10011212, DRI ® etylglukuronid-kalibrator 1000 ng/ml, 10 ml
10011213, DRI ® etylglukuronid-kalibrator 2000 ng/ml, 10 ml
10012135, DRI ® etylglukuronid 375 ng/ml-kontroll, 25 ml
10012136, DRI ® etylglukuronid 625 ng/ml-kontroll, 25 ml
10012137, DRI ® etylglukuronid 750 ng/ml-kontroll, 25 ml
10012138, DRI ® etylglukuronid 1250 ng/ml-kontroll, 25 ml
Forholdsregler og advarsler
1. Denne testen er kun for in vitro-diagnostisk bruk. Reagensene er skadelige ved
svelging.
2. Reagensene anvendt i assayets komponenter inneholder natriumazid, noe som kan
reagere med bly- eller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Skyll
alltid med store mengder vann for å unngå oppsamling av azid når du kaster slike
reagenser.
3. Ikke bruk reagensene etter utløpsdatoen.
Forberedelse og oppbevaring av reagens
Reagensene er klare til bruk; det kreves ingen ytterligere tilberedelse. Reagensene bør oppbevares
avkjølt ved 2 °C til 8 °C. Alle assaykomponenter, åpnet eller uåpnet, er stabile inntil utløpsdatoen
angitt på deres etiketter. Ikke bruk reagensene etter utløpsdatoen.
Innsamling og håndtering av prøver
Samle inn urinprøver i plast- eller glassbeholdere. Det oppfordres til å bruke friske urinprøver.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Påbudte retningslinjer for
føderal narkotikatestingsprogrammer på arbeidsplassen) anbefaler at prøver som ikke får en første
test innen 7 dager etter ankomst til laboratoriet, bør plasseres i sikre kjøleenheter. Urinprøver må
oppbevares avkjølt til enhver tid.
Prøver innenfor et pH-område mellom 4,5 og 11 er egnet for testing med dette assayet.
Bestreb deg på å holde pipetterte prøver fri for rusk. Sentrifugér meget grumsete prøver før
analysering. Oppblandete urinprøver kan forårsake feilaktige resultater. Hvis det er mistanke om
oppblanding, skaff en ny prøve og send begge prøvene til laboratoriet for testing. Håndter alle
urinprøver som potensielt smittefarlige.
25
Assayprosedyre
Til in vitro-diagnostisk bruk
Kliniske kjemianalysatorer som er i stand til å opprettholde en konstant temperatur, pipettere prøver,
blande reagenser, måle enzymatiske hastigheter ved 340 nm og tidsberegne reaksjonen nøyaktig
kan brukes til å utføre dette immunoassayet.
Se spesifikke anvendelsesanvisninger for hver analysator for kjemiparametrer før assayet utføres.
Kvalitetskontroll og kalibrering
I henhold til god laboratoriepraksis bør det brukes kontrollprøver for å sikre tilfredsstillende assayytelse.
Sørg for at kontrollresultatene er innen etablert verdiområde, i henhold til laboratorieprosedyrer
og -retningslinjer. Hvis resultatene faller utenfor de etablerte verdiområdene, er assayresultatene
ugyldige. For kvalitativ analyse, bruk en 500 ng/ml eller 1000 ng/ml-kalibrator som grenseverdinivå.
For semikvantitativ analyse, bruk alle kalibratorene. Alle kvalitetskontrollkrav (QC) bør utføres
i samsvar med lokale og/eller nasjonale forskrifter eller godkjennelseskrav.
Resultater og forventede verdier
Kvalitativ
Kalibratorene for enten 500 ng/ml eller 1000 ng/ml, kan brukes som grenseverdi-referanse
for å skjelne “positive” fra “negative” prøver. En prøve som viser en endring i absorbansverdi
(∆A) tilsvarende eller større enn verdien oppnådd med grenseverdikalibratoren vurderes som
positiv. En prøve som viser en endring i absorbansverdi (∆A) lavere enn verdien oppnådd med
grenseverdikalibratoren vurderes som negativ.
Semikvantitativ
Det kan oppnås et omtrentlig estimat av etylglukuronidkonsentrasjon i prøvene ved å kjøre en
standardkurve med alle kalibratorer og kvantitere prøvene fra verdiene på standardkurven. Når
EtG-konsentrasjonen i prøven er større enn den høyeste kalibratoren, kan den fortynnes med den
negative kalibratoren og testes på nytt.
Rapporterbart verdiområde
DRI ® etylglukuronid-assayet er fremstilt for semikvantitativt bruk i verdiområdet mellom 100 ng/ml,
den laveste kalibratoren, og 2000 ng/ml, verdien for den høyeste kalibratoren.
Begrensninger
1. Et positivt resultat ved bruk av DRI ® etylglukuronid-assayet angir bare tilstedeværelse
av etylglukuronid og korrelerer ikke nødvendigvis med graden av fysiologiske og
psykologiske effekter.
2. Ytelsesegenskaper for DRI ® etylglukuronid-assayet har ikke blitt etablert med andre
kroppsvæsker enn human urin.
3. Dette DRI ® etylglukuronid-assayet ble validert på analysatorer som benytter en integral
cellevask. Hvis din analysator ikke har en integral cellevask, ta kontakt med din lokale
Thermo Fisher Scientific-representant.
4. Utvis forsiktighet når resultatene rapporteres, da det er mange faktorer,
f.eks. væskeinntak og andre biologiske faktorer som kan ha innflytelse på et
urintestresultat.
5. Det er mulig at andre stoffer enn de som forskes i spesifisitetsstudien kan interferere
med testen og forårsake falske resultater.
Typiske ytelsesegenskaper
Typiske ytelsesresultater oppnådd på Hitachi 917-analysatoren vises nedenfor. Resultatene som ble
oppnådd i ditt laboratorium kan være forskjellige fra disse data. For ytterligere ytelsesdata for den
spesifikke analysatoren, se den spesifikke analysatorens anvendelsesark.
Presisjon
DRI ® etylglukuronid-kontrollene (375, 625, 750 og 1250 ng/ml) og grenseverdikalibratorene (500 og
1000 ng/ml) ble testet i kvalitativ (mA/min) og semikvantitativ (ng/ml) modus ved bruk av en modifisert
NCCLS-protokoll. Resultatene oppført nedenfor ble generert ved å teste alle prøvene i 6 replikater
to ganger daglig i 10 dager.
Kvalitativ (mA/min)
Kalibrator/
kontroll
N=120
375
500
625
Gjennomsnittlig
392
417
439
500 ng/ml-grenseverdi
Intraassay-presisjon Totalpresisjon
SD % CV
2,1
2,1
2,0
0,5
0,5
0,5
Gjennomsnittlig
392
417
439
SD % CV
2,9
3,1
2,7
0,7
0,7
0,6