DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

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Linearität Die Linearität des Assays wurde durch das Testen der Verdünnungswiederfindung einer Reihe von Ethylglucunorid-Proben im Assay bestimmt. Eine Urinprobe mit 2000 ng/ml Ethylglucuronid wurde mit EtGfreiem Urin aus Cutoff-Kalibratoren in 25%-Stufen seriell verdünnt. Diese Proben wurden im Assay sowohl im qualitativen als auch im semiquantitativen Modus getestet. Alle Proben wurden im semiquantitativen Modus innerhalb von ±20 % der erwarteten Werte und im qualitativen Modus innerhalb der erwarteten Rate (mA/min) wiedergefunden, was darauf hinweist, dass der Assay bis zu 2000 ng/ml linear verläuft. Genauigkeit Einhundertundvierundachtzig (184) Proben wurden mit dem DRI ® Ethylglucuronid-Assay sowohl im qualitativen als auch im semiquantitativen Modus analysiert und die Ergebnisse mit der LC/ MS/MS-Methode verglichen. Sowohl im qualitativen als auch im semiquantitativen Modus betrug die positive Probenübereinstimmung zwischen dem DRI ® EtG-Assay und LC/MS/MS 96 %. Die sowohl im qualitativen als auch im semiquantitativen Modus erzielten Ergebnisse sind nachstehend zusammengefasst. Qualitativ: Von 184 Proben wurden sowohl durch den Immunassay als auch durch LC/MS/MS bei einem Cutoff von 500 ng/ml 94 Proben als positiv und 85 Proben als negativ, und bei einem Cutoff von 1000 ng/ml 44 Proben als positiv und 138 Proben als negativ nachgewiesen. Die Gesamtkonkordanz zwischen dem Immunassay und LC/MS/MS betrug 97 %. Es gab fünf diskordante Proben bei einem Cutoff von 500 ng/ml und zwei diskordante Proben bei einem Cutoff von 1000 ng/ml. Cutoff 500 ng/ml Cutoff 1000 ng/ml DRI ® EtG-Assay DRI ® EtG-Assay + - + - + 94 3 * + 44 2 ♠ LC/MS/MS LC/MS/MS - 2 ¥ 85 - 0 138 * Zwei der drei Proben durch den Immunassay waren grenzwertig negativ. Eine Probe war durch LC/MS/MS grenzwertig positiv. ¥ Im Immunassay waren Proben grenzwertig positiv. ♠ Im Immunassay waren Proben grenzwertig negativ. LC/MS/MS-Werte lagen zwischen 1000 und 1250 ng/ml. Semiquantitativ: Im semiquantitativen Modus wurden Proben mit einer EtG-Konzentration von >500 ng/ml und 1000 ng/ml im Immunassay als positiv bewertet. Von 184 Proben wurden sowohl durch die Immunassay- als auch durch die LC/MS/MS-Methoden 94 Proben als positiv und 85 Proben als negativ nachgewiesen. LC/MS/MS DRI ® EtG-Assay + - + 94 3* - 2 ¥ 85 * Bei den Proben handelte es sich um dieselben Proben wie im qualitativen 500-ng/ml-Modus. ¥ Bei den Proben handelte es sich um dieselben Proben wie im qualitativen 500-ng/ml-Modus. 6 Literatur Hersteller: Microgenics Corporation 46360 Fremont Blvd. Fremont, CA 94538 USA Gebührenfreie Telefonnummer in den USA: 1-800-232-3342 Bevollmächtigter in der EU: Microgenics GmbH Spitalhofstrasse 94 D-94032 Passau Tel: 0851 886 89 0 Fax: 0851 886 89 10 Andere Länder: Bitte wenden Sie sich an die zuständige Vertretung von Microgenics. 1. Ethyl Glucuronide: An unusual Ethanol Metabolite in Humans.Synthesis, Analytical Data, and Determination in Serum and Urine. Schmitt G., et al. Journal of Analytical Toxicology. 1995, 19:91-94. 2. Comparison of Urinary Excretion Characteristics of Ethanol and Ethyl Glucuronide. Dahl H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:201-204. 3. Ethyl Glucuronide- the direct ethanol metabolite on the threshold from science to routine use. Wurst FM et al. Addiction. 2003, 98 (S2) 51-61. 4. Ethyl Glucuronide- A Biological Marker for recent alcohol consumption. Seidi S. et al. Addiction Biology. 2001, 6(3):205-212. 5. Ethyl Glucuronide: A Biomarker to identify Alcohol use by Health Professionals Recovering from Substance use Disorders. Skipper G.E et al. Alcohol and Alcoholism, 2004, 39(5):445- 449. 6. Ethyl Glucuronide- A marker of Recent Alcohol Consumption with Clinical and Forensic Implications. Wurst FM et al. Alcohol. 2000, 20(2):111-116. 7. Ethyl Glucuronide (EtG): A new marker to detect Alcohol use in recovering physicians., Skipper G.E., et al. Journal of Medical Licensure and Discipline. 2004, 90(2): 14-17. 8. Production of urinary ethanol after sample collection. Saady, J.J., Poklis, A.and Dalton, H.P. (1993) Journal of Forensic Sciences 38, 1467-1471. 9. Preliminary immunochemical test for the determination of Ethyl Glucuronide in serum and urine: Comparison of screening method results with Gas Chromatography- Mass spectrometry. Zimmer H., et al. Journal of Analytical Toxicology. 2002, 26:11-16. 10. Confirmatory Analysis of Ethyl Glucuronide in urine by liquid chromatography/Elctrospray Ionization/Tandem Mass Spectrometry according to forensic guidelines. Weinmann W. et al. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2004, 15(2):188-193.
Dosage DRI ® Éthylglucuronide Réf. 10011723 (Coffret de 18 ml) 10011297 (Coffret de 68 ml) 10011226 (Coffret de 500 ml) Application Le dosage immunoenzymatique DRI ® Éthylglucuronide est destiné à la détermination qualitative et semi-quantitative de l’éthylglucuronide dans l’urine humaine avec des seuils de 500 ng/ml et de 1000 ng/ml. Ce dosage ne fournit qu’un résultat analytique préliminaire. Tout résultat positif devra être confirmé par une autre méthode plus spécifique. Les méthodes de validation par chromatographie en phase gazeuse/liquide couplée à la spectrométrie de masse (CG-SM) et par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (CL- SM-SM) sont préférables. Les résultats d’un test de dépistage de toxicomanie doivent être interprétés en tenant compte du tableau clinique et de l’avis d’un professionnel, en particulier si des résultats positifs préliminaires sont utilisés. Résumé et description du test L’éthylglucuronide (EtG) est un métabolite direct de l’éthanol, qui est formé par conjugaison enzymatique de l’éthanol avec l’acide glucuronique. 1,2 L’alcool dans l’urine n’est normalement détecté que pendant quelques heures, alors que l’éthylglucuronide peut être détecté même jusqu’à plusieurs jours après l’élimination complète de l’alcool par le corps. 3 Par conséquent, l’éthylglucuronide peut être un biomarqueur diagnostique utile pour déterminer une consommation récente d’alcool et pour contrôler l’abstinence des alcooliques dans les programmes de sevrage alcoolique. 4-7 L’éthanol peut être produit in vitro par la fermentation des échantillons d’urine contenant du sucre (diabète), des bactéries ou des levures lorsque les échantillons sont exposés à températures chaudes. 8 Dans ces cas, le dosage de l’éthylglucuronide peut être utilisé comme analyse de confirmation afin de déterminer si l’alcool présent dans l’échantillon est dû à une consommation d’alcool ou s’il s’est formé in vitro suite à une fermentation. Actuellement, l’éthylglucuronide est déterminé par CG-SM et par CL-SM-SM. 9-10 Le dosage DRI ® Éthylglucuronide est fourni sous forme de dosage immunoenzymatique en phase homogène liquide et prêt à l’emploi. Le dosage utilise des anticorps spécifiques qui peuvent détecter l’éthylglucuronide, sans réactivité croisée significative avec d’autres composés glucuronides. Le dosage est basé sur la compétition entre un médicament marqué à la glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PDH) et le médicament libre dans l’échantillon urinaire pour une quantité déterminée de sites de liaison de l’anticorps spécifique du médicament. En l’absence de médicament libre dans l’échantillon, l’anticorps spécifique lie le médicament marqué à la G6PDH et provoque une diminution de l’activité enzymatique. Ce phénomène engendre une relation directe entre la concentration du médicament présent dans l’échantillon urinaire et l’activité enzymatique. L’enzyme active convertit le NAD en NADH, ce qui entraîne un changement d’absorbance pouvant être mesuré par spectrophotométrie à 340 nm. Réactifs Réactif anticorps/substrat : Contient un anticorps monoclonal murin anti-éthylglucuronide, du glucose-6 phosphate (G6P) et du nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) dans un tampon Tris avec de l’azide de sodium comme conservateur. Réactif conjugué enzymatique : Contient un dérivé de l’éthylglucuronide marqué à la glucose- 6-phosphate déshydrogénase (G6PDH) en tampon Tris avec de l’azide de sodium comme conservateur. Matériel supplémentaire requis (vendu individuellement) : 10011207, Calibrateur négatif DRI ® Éthylglucuronide, 25 ml 10011208, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (100 ng/ml), 10 ml 10011210, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (500 ng/ml), 10 ml 10011212, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (1000 ng/ml), 10 ml 10011213, Calibrateur DRI ® Éthylglucuronide (2000 ng/ml), 10 ml 10012135, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (375 ng/ml), 25 ml 10012136, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (625 ng/ml), 25 ml 10012137, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (750 ng/ml), 25 ml 10012138, Contrôle DRI ® Éthylglucuronide (1250 ng/ml), 25 ml Mises en garde et avertissements 1. Ce test est réservé à un usage diagnostique in vitro. Les réactifs sont nocifs par ingestion. 2. Les réactifs utilisés dans ce dosage contiennent de l’azide de sodium, susceptible de réagir dans les canalisations en plomb ou en cuivre et de former des azides métalliques potentiellement explosifs. Lors de l’élimination de ces réactifs, toujours rincer à grande eau pour éviter l’accumulation d’azide. 3. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption. Préparation et stockage des réactifs Les réactifs sont prêts à l’emploi ; aucune préparation supplémentaire n’est nécessaire. Les réactifs doivent être conservés réfrigérés (entre 2 °C et 8 °C). Tous les composants du dosage, ouverts ou non ouverts, restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur leur étiquette. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption. Prélèvement et manipulation des échantillons Collecter les échantillons urinaires dans des récipients en plastique ou en verre. Il est recommandé d’effectuer le dosage sur des échantillons d’urine frais. Les Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs recommandent que tout échantillon qui n’est pas initialement testé dans les 7 jours suivant son arrivée au laboratoire doit être conservé dans un réfrigérateur en milieu fermé. Les échantillons d’urine doivent être continuellement réfrigérés. Les échantillons dont la plage de pH se situe entre 4,5 et 11 conviennent pour ce dosage. 7 Pour usage diagnostique in vitro Les échantillons prélevés à la pipette ne doivent pas contenir de gros débris. Centrifuger les échantillons très troubles avant l’analyse. L’adultération des échantillons d’urine peut produire des résultats erronés. Si l’on soupçonne une adultération, recueillir un autre échantillon et les envoyer tous les deux au laboratoire aux fins d’analyse. Manipuler tous les échantillons urinaires comme s’ils étaient potentiellement infectieux. Procédure du dosage Pour réaliser ce dosage immunologique, utiliser un analyseur de chimie clinique qui soit capable de maintenir une température constante, de prélever des échantillons à la pipette, de mélanger les réactifs, de mesurer les taux enzymatiques à 340 nm et de minuter la réaction avec précision. Se référer aux directives d’utilisation spécifiques définissant les paramètres chimiques de l’analyseur avant de réaliser le dosage. Contrôle qualité et calibration Les bonnes pratiques de laboratoire recommandent d’utiliser des échantillons de contrôle pour garantir des performances correctes du dosage. S’assurer que les résultats des contrôles se situent dans les plages établies définies par les procédures et les recommandations du laboratoire. Si les résultats se situent en dehors de la plage de valeurs établie, les résultats du dosage ne sont pas valides. Pour les analyses qualitatives, utiliser le calibrateur de 500 ng/ml ou de 1000 ng/ml comme valeur seuil. Pour les analyses semi-quantitatives, utiliser tous les calibrateurs. Tous les contrôles qualité doivent être réalisés conformément aux règlements locaux et nationaux ou aux exigences d’agrément. Résultats et valeurs attendues Détermination qualitative On peut utiliser le calibrateur de 500 ng/ml ou celui de 1000 ng/ml comme seuil de référence pour différencier les échantillons positifs des échantillons négatifs. Un échantillon qui présente un changement de valeur d’absorbance (∆A) égal ou supérieur à la valeur obtenue avec le calibrateur seuil est considéré comme positif. Un échantillon qui présente un changement de valeur d’absorbance (∆A) inférieur à la valeur obtenue avec le calibrateur seuil est considéré comme négatif. Détermination semi-quantitative On peut obtenir une estimation approximative de la concentration d’éthylglucuronide dans les échantillons en traçant une courbe de calibration avec tous les calibrateurs et en quantifiant les échantillons à partir de la courbe de calibration. Si la concentration d’éthylglucuronide d’un échantillon est supérieure à celle du calibrateur de concentration la plus élevée, il est possible de diluer l’échantillon avec le calibrateur négatif et de le tester à nouveau. Plage d’efficacité Le dosage DRI ® Éthylglucuronide est conçu pour une détermination semi-quantitative sur la plage allant de 100 ng/ml, le calibrateur de concentration la plus faible, à 2000 ng/ml, la valeur du calibrateur de concentration élevée. Limitations 1. Un résultat positif avec le dosage DRI ® Éthylglucuronide indique uniquement la présence d’éthylglucuronide et n’est pas nécessairement en corrélation avec l’importance des effets physiologiques et psychologiques. 2. Les performances du dosage DRI ® Éthylglucuronide n’ont pas été établies pour des liquides corporels autres que l’urine humaine. 3. Le dosage DRI ® Éthylglucuronide a été validé sur les analyseurs comprenant un lavage de cellules intégral. Si l’analyseur utilisé ne comprend pas de lavage de cellules intégral, s’adresser au représentant local de Thermo Fisher Scientific. 4. Prendre toutes les précautions nécessaires lors de l’expression des résultats car de nombreux facteurs tels que l’apport hydrique ou d’autres facteurs biologiques peuvent influencer le résultat d’un test urinaire. 5. Il est possible que d’autres substances que celles recherchées dans l’étude de spécificité interfèrent avec le test et faussent les résultats. Performance caractéristique Les résultats de performance caractéristiques indiqués ci-dessous ont été obtenus avec un analyseur Hitachi 917. Les résultats obtenus dans votre laboratoire peuvent être différents de ces données. Pour consulter d’autres données de performance spécifiques à l’analyseur, se reporter à la fiche technique de ce dernier. Précision Les contrôles DRI ® Éthylglucuronide (375, 625, 750 et 1250 ng/ml) et les calibrateurs seuil (500 et 1000 ng/ml) ont été testés en modes qualitatif (mA/min) et semi-quantitatif (ng/ml) selon un protocole modifié du NCCLS. Les résultats présentés ci-dessous ont été générés en analysant 6 répliques de tous les échantillons, deux fois par jour, pendant 10 jours. Détermination qualitative (mA/min) Calibrateur/contrôle Seuil 500 ng/ml N=120 Moyenne 375 500 625 392 417 439 Précision intra-série Précision totale Écart- type 2,1 2,1 2,0 CV (%) Moyenne 0,5 0,5 0,5 392 417 439 Écarttype 2,9 3,1 2,7 CV (%) 0,7 0,7 0,6
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