DRI® Ethyl Glucuronide Assay - Fisher Scientific

Ensaio de EtG DRI ®
N.º de catálogo: 10011723 (kit de 18 ml)
10011297 (kit de 68 ml)
10011226 (kit de 500 ml)
Aplicação
O imunoensaio enzimático de etil-glucoronido DRI ® destina-se à determinação qualitativa e
semiquantitativa de etil-glucoronido na urina humana em cutoffs de 500 e 1000 ng/ml.
O ensaio permite apenas a obtenção de um resultado de teste analítico preliminar. É necessário
utilizar um método alternativo mais específico para obter um resultado analítico confirmado.
A cromatografia gasosa/cromatografia líquida - espectrometria de massa (GC/MS) e a
espectrometria líquida/espectrometria de massa em tandem (LC/MS/MS) são os métodos de
confirmação preferidos. Qualquer resultado de teste que envolva o uso de estupefacientes
deverá ser alvo de consideração clínica e de avaliação profissional, sobretudo quando são
usados resultados preliminares positivos.
Resumo e explicação do teste
O etil-glucoronido (EtG) é um metabolito directo do etanol, que se forma pela conjugação enzimática
de etanol com ácido glucurónico. 1,2 O álcool na urina é geralmente detectado durante apenas
algumas horas, enquanto o EtG pode ser detectado até vários dias, mesmo após a eliminação total
do álcool do organismo. 3 Por conseguinte, o EtG pode ser um útil biomarcador de diagnóstico para
a determinação de consumo recente de álcool e para a monitorização de abstinência em alcoólicos
sujeitos a programas de tratamento para a abstinência alcoólica. 4-7 O etanol pode ser produzido
in vitro pela fermentação de amostras de urina que contenham açúcares (diabetes), bactérias ou
leveduras, quando as amostras são expostas a temperaturas elevadas. 8
Nestes casos, o teste de
EtG pode ser utilizado como um teste de confirmação para determinar se o álcool da amostra se
deve a consumo de álcool ou se foi formado in vitro em resultado de fermentação. Actualmente, o
EtG é monitorizado pelos métodos GC/MS e LC/MS/MS. 9-10
O ensaio de etil-glucoronido DRI ® é fornecido como um imunoensaio enzimático homogéneo líquido
pronto a utilizar. O ensaio utiliza anticorpos específicos que podem detectar etil-glucoronido sem
qualquer reacção cruzada significativa com outros compostos de glucoronido. O ensaio baseiase
na competição entre um fármaco marcado com glucose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH) e
um fármaco livre da amostra de urina para uma quantidade fixa de locais de ligação a anticorpos
específicos. Na ausência de fármaco livre na amostra, o anticorpo específico liga-se ao fármaco
marcado com G6PDH e provoca uma diminuição da actividade enzimática. Este fenómeno estabelece
uma relação directa entre a concentração de fármaco na urina e a actividade enzimática. A enzima
activa converte o NAD em NADH, provocando uma alteração da absorvância que pode ser avaliada
espectrofotometricamente a 340 nm.
Reagentes
Reagente de anticorpo/substrato: Contém anticorpo anti-etil-glucoronido monoclonal de rato,
glucose-6-fosfato (G6P), e nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) em tampão Tris com azida de
sódio como conservante.
Reagente de conjugado enzimático: Contém derivado de etil-glucoronido marcado com glucose-
6-fosfato desidrogenase (G6PDH) em tampão Tris com azida de sódio como conservante.
Materiais adicionais necessários (vendidos separadamente):
10011207, calibrador negativo de etil-glucoronido DRI ® , 25 ml
10011208, calibrador de etil-glucoronido DRI ® 100 ng/ml, 10 ml
10011210, calibrador de etil-glucoronido DRI ® 500 ng/ml, 10 ml
10011212, calibrador de etil-glucoronido DRI ® 1000 ng/ml, 10 ml
10011213, calibrador de etil-glucoronido DRI ® 2000 ng/ml, 10 ml
10012135, controlo de etil-glucoronido DRI ® 375 ng/ml, 25 ml
10012136, controlo de etil-glucoronido DRI ® 625 ng/ml, 25 ml
10012137, controlo de etil-glucoronido DRI ® 750 ng/ml, 25 ml
10012138, controlo de etil-glucoronido DRI ® 1250 ng/ml, 25 ml
Precauções e advertências
1. Este teste destina-se exclusivamente a diagnóstico in vitro. Os reagentes são nocivos
por ingestão.
2. Os reagentes utilizados nos componentes do ensaio contêm azida de sódio, que
pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre, formando azidas metálicas
potencialmente explosivas. Quando eliminar estes reagentes, irrigue sempre com um
grande volume de água de forma a impedir a acumulação das azidas.
3. Não utilize reagentes depois da data de validade indicada.
Preparação e conservação dos reagentes
Os reagentes estão prontos a utilizar; não é necessária qualquer preparação adicional. Os reagentes
devem ser conservados entre 2 e 8 °C. Todos os componentes do ensaio, abertos ou por abrir, são
estáveis até à data de validade indicada nos respectivos rótulos. Não utilize os reagentes depois
da data de validade indicada.
Colheita e manipulação de amostras
Proceda à colheita de amostras de urina em recipientes de plástico ou de vidro. Recomendam-se
amostras de urina recentes.
As Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (normas federais norteamericanas
obrigatórias para programas de análises de drogas no local de trabalho) recomendam
que as amostras que não sejam testadas no prazo de 7 dias após a chegada ao laboratório sejam
conservadas em unidades de refrigeração acondicionadas. As amostras de urina devem ser
conservadas refrigeradas em todas as circunstâncias.
As amostras com um limite de pH entre 4,5 e 11 são adequadas para teste neste ensaio.
16
Para utilização em diagnóstico in vitro
Devem encetar-se todos os esforços para manter as amostras pipetadas sem resíduos grosseiros.
Centrifugue as amostras altamente turvas antes da análise. A adulteração das amostras de urina
pode provocar resultados errados. Caso haja suspeita de adulteração, obtenha outra amostra e
envie ambas as amostras para testar no laboratório. Trate todas as amostras de urina como
potencialmente infecciosas.
Procedimento do ensaio
Para a realização deste imunoensaio podem ser utilizados analisadores de química clínica que
permitam a manutenção de uma temperatura constante, a pipetagem de amostras, a mistura
dos reagentes, a medição das velocidades enzimáticas a 340 nm e a temporização rigorosa da
reacção.
Antes de realizar o ensaio, consulte as instruções específicas da aplicação de cada analisador para
conhecer os parâmetros químicos.
Controlo de qualidade e calibração
As boas práticas laboratoriais sugerem a utilização de amostras de controlo para garantir o
desempenho adequado do ensaio. Certifique-se de que os resultados de controlo se encontram
dentro do intervalo estabelecido, conforme determinado pelos procedimentos e directrizes do
laboratório. Se os resultados estiverem fora dos intervalos estabelecidos, os resultados do ensaio
são inválidos. Para a análise qualitativa, utilize um calibrador de 500 ng/ml ou 1000 ng/ml como
nível de cutoff. Para a análise semiquantitativa, utilize todos os calibradores. Todos os requisitos de
CQ devem ser realizados em conformidade com as regulamentações locais, estatais e/ou federais
ou os requisitos de acreditação.
Resultados e valores esperados
Qualitativo
Os calibradores de 500 ng/ml ou de 1000 ng/ml podem ser utilizados como referência de cutoff para
distinguir entre amostras “positivas” e “negativas”. Uma amostra que apresente uma alteração do
valor de absorvância (∆A) igual ou superior ao valor obtido com calibrador de cutoff é considerada
positiva. Uma amostra que apresente uma alteração do valor de absorvância (∆A) inferior ao valor
obtido com o calibrador de cutoff é considerada negativa.
Semiquantitativo
É possível obter-se uma estimativa aproximada da concentração de fármaco nas amostras através
da utilização de uma curva-padrão utilizando todos os calibradores e quantificando amostras
retiradas desta curva. Quando a concentração de EtG na amostra for superior ao calibrador mais
elevado, a amostra pode ser diluída com o calibrador negativo e testada novamente.
Intervalo reportável
O ensaio de etil-glucoronido DRI ® foi concebido para utilização semiquantitativa no intervalo entre
100 ng/ml, o calibrador mais baixo, e 2000 ng/ml, o valor do calibrador mais alto.
Limitações
1. Um resultado positivo utilizando o ensaio de etil-glucoronido DRI ® é indicativo
apenas da presença de etil-glucoronido e não se correlaciona necessariamente com
a extensão dos efeitos fisiológicos e psicológicos.
2. As características de desempenho do ensaio de etil-glucoronido DRI ® não foram
estabelecidas com fluidos corporais para além da urina humana.
3. Este ensaio de etil-glucoronido DRI ® foi validado em analisadores utilizando uma
lavagem de células integral. Se o seu analisador não dispuser de uma lavagem de
células integral, contacte o seu representante local da Thermo Fisher Scientific.
4. Deve ter cuidado ao apresentar resultados visto existirem vários factores, p. ex.,
ingestão de líquidos e outros efeitos biológicos, que podem influenciar o resultado
do teste de urina.
5. É possível que outras substâncias, para além das investigadas no estudo de
especificidade, possam interferir com o teste e provocar resultados falsos.
Características de desempenho típicas
Os dados do desempenho típico, obtidos no analisador Hitachi 917, são apresentados abaixo.
Os resultados obtidos no seu laboratório poderão ser diferentes. Para obter mais dados sobre o
desempenho específico do analisador, consulte a folha da aplicação específica do analisador.
Precisão
Os controlos de etil-glucoronido DRI ® (375, 625, 750 e 1250 ng/ml) e os calibradores de cutoff (500
e 1000 ng/ml) foram testados no modo qualitativo (mA/min) e semiquantitativo (ng/ml) utilizando um
protocolo do NCCLS modificado. Os resultados apresentados abaixo foram conseguidos através de
testes a todas as amostras em replicados de 6, duas vezes por dia, durante 10 dias.
Qualitativo (mA/min)
Calibrador/Controlo Cutoff de 500 ng/ml
N=120
375
500
625
Precisão no mesmo ciclo Precisão total
Média DP CV% Média DP CV%
392
417
439
2,1
2,1
2,0
0,5
0,5
0,5
392
417
439
2,9
3,1
2,7
0,7
0,7
0,6