Mecanismos de transporte de nitrato, amonio y fosfato y ...

Lourdes Rubio III. Resultados
100 % F
Mg 2+
500 mM NaCl
50 % F
0 % F
1 min
250 mM NaCl
100 mM NaCl
50 mM Na 2 SO 4
20 mM NaCl
10 mM NaCl
1 mM NaCl
Figura 48. Efecto de la adición de Na + sobre el gradiente de H + en
vesículas de plasmalema. Se incubaron vesículas de plasmalema purificadas
de tejido foliar (30 µg prot) durante 10 min. Posteriormente, tras añadir 1,5
mM MgCl 2 , se detectó una disminución en la fluorescencia del medio (%F).
Una vez alcanzado un valor estable de fluorescencia, la flecha indica la
adición de diferentes concentraciones de NaCl o Na 2 SO 4 . Cada concentración
de Na + indicada corresponde a un experimento independiente (n = 3)
La disipación del gradiente de H + , expresado en porcentaje de recuperación
de la fluorescencia durante el primer minuto desde la adición de las diferentes
concentraciones de Na + , y referido a la cantidad de proteína presente en la
reacción, (%F mg -1 prot min -1 ) se saturó a partir de 40 mM Na + (Figura 49).
El ajuste de los valores de disipación del gradiente de H + al modelo de
Michaelis-Menten permitió calcular los parámetros del transporte de Na + en
vesículas de plasmalema obtenidas a partir de tejido foliar. El valor de K m fue 16,8
± 4,4 mM Na + y la actividad máxima de antiporte, expresada en unidades
arbitrarias de recuperación de fluorescencia, fue 71,8 ± 6,6 %F mg -1 prot min -1 .
El coeficiente de determinación del ajuste fue R 2 = 0,97.
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