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CIENCIAmientras se mantienen en condiciones de pH,humedad y temperatura adecuadas para preservarsu viabilidad. Por su parte, la muestra desemen es procesada para seleccionar los espermatozoidesde mayor capacidad e inseminarcon ellos los óvulos obtenidos durante la punciónovárica. Entre 16 y 20 horas tras la inseminación sepuede ya comprobar cuántos óvulos de los inseminadoshan fecundado. A las 72 horas de lainseminación, los embriones habrán ido completandosucesivas divisiones mitóticas hasta tenerentre 6 y 8 células —o blastómeros—. En estemomento se puede extraer por biopsia 1 ó 2 célulasde cada embrión sin afectar significativamentea su desarrollo. Sobre cada una de las célulasobtenidas de cada embrión se realiza el análisisgenético que nos sirve para decidir qué embriónes afecto, portador o sano de la enfermedadgenética o anomalía cromosómica que necesitemosestudiar. Mientras tanto, los embriones quehan sido biopsiados continúan su desarrollo en losmedios de cultivo adecuados y, solo si su perfilgenético y/o cromosómico es el correcto, serántransferidos al útero materno, donde en interaccióncon la pared endometrial, podrán implantarsey dar lugar a una gestación evolutiva quellegue a término.Diagnóstico genéticoEl estudio genético al que podemossometer los blastómeros puede ser de dos tipos:citogenético si queremos estudiar posibles aneuploidíaso determinar el sexo del embrión omolecular, si queremos conocer la integridad deun gen o genes concretos. En ambos casos, esnecesario aislar el núcleo de cada blastómerorompiendo la membrana celular y digiriendotodo el material citoplasmático.Diagnóstico citogenéticoSe basa en el estudio del número cromosómicoy/o de la integridad estructural de loscromosomas. Se lleva a cabo medianteHibridación in Situ Fluorescente (FISH) y consisteen aislar y fijar el ADN nuclear sobre un portaobjetoshaciéndolo hibridar con secuencias denucleótidos (sondas de ADN) complementariasde regiones concretas y exclusivas de cada cromosomaa estudiar. Las sondas están marcadascon fluorocromos de diferente color para cadacromosoma. Posteriormente, en un microscopiode fluorescencia, se verán las señales coloreadasque se corresponden con cada par cromosómico.El estudio citogenético en la Hemofiliapermite, marcando con distintos colores cadauno de los cromosomas sexuales, saber si en elembrión hay una dotación sexual XX ó XY lo que,atendiendo a lo expuesto en el Cuadro I, será deutilidad para seleccionar los embriones dependiendode la situación de los padres respecto a laenfermedad.En la situación c), la mejor alternativa esrecurrir al DGP molecular aunque, ante lo elevadodel coste y la mayor complejidad de este último,hay parejas que deciden no hacerlo y recurriral diagnóstico citogenético asumiendo losinconvenientes que se han referido.Aunque la fiabilidad de esta técnica sesitúa por encima del 95%, puede haber algunoserrores de diagnóstico atribuibles principalmentea casos de mosaicismo embrionario y a fallos dehibridación imposibles de subsanar por falta detiempo, ya que los embriones han de ser transferidosen las 48 horas siguientes a la biopsia.Diagnóstico genético-molecularMientras las situaciones a) y c) no ofrecen dudas, la b) plantea dos problemasderivados de no poder distinguir las portadoras: Seleccionando para la transferencialos embriones XX, el 50% de ellos pueden ser portadoras y no se romperíala cadena de transmisión de la enfermedad; el 50% de los varones descartadospueden ser sanos.A diferencia de la citogenética, queanaliza el número y la estructura de los cromosomas,la genética molecular estudia la integridadde los genes mismos. Siempre que, como en elcaso de la Hemofilia, se conozca el gen involucradoen una genopatía, será posible el diagnós-Cuadro 1tico molecular de la misma, ya sea de formadirecta o indirecta.a) Diagnóstico molecular directo50 núm. 46 Junio 2008