La Vague N.4 - A3P
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CONFERENCES<br />
trer la capacité de micro-organismes à croître dans<br />
le produit cosmétique contrôlé.<br />
<strong>La</strong> première norme, la 21148 cd (committee draft),<br />
décrit les recommandations générales pour effectuer<br />
ces contrôles.<br />
<strong>La</strong> norme 21149 cd traite des méthodes de numération<br />
des bactéries aérobies mésophiles, en boîte<br />
de pétri, après incubation à 32°C, ainsi que d’une<br />
méthode de détection (présence-absence) après<br />
enrichissement sur milieu non sélectif. <strong>La</strong> validation<br />
du neutralisant est effectuée par mélange d’un<br />
inoculum calibré de Staphylococcus aureus et<br />
d’un inoculum calibré de Pseudomonas aeruginosa<br />
avec l’échantillon neutralisé. <strong>La</strong> validation<br />
est positive s’il y a mise en évidence d’une croissance<br />
supérieure ou égale à 50% par rapport à un<br />
témoin germe.<br />
<strong>La</strong> 16212 wd (working draft) traite des méthodes<br />
de numération des levures et moisissures, en boîte<br />
de pétri, après incubation à 25°C.<br />
Les normes 22717cd (Pseudomonas aeruginosa),22718cd<br />
(Staphylococcus aureus), 21150 cd<br />
(Escherichia coli), 18416 wd (Candida albicans)<br />
ont, pour principe, un enrichissement sur un<br />
bouillon non sélectif suivi d’un isolement sur une<br />
gélose sélective et d’une confirmation par des tests<br />
d’identification appropriés.<br />
<strong>La</strong> dernière norme travaillée est la 18415wd. Elle<br />
traite de la détection globale, dans le cas de faibles<br />
niveaux de contamination, des 4 micro-organismes<br />
spécifiés cités ci-dessus ainsi que de germes non<br />
spécifiés. Le principe consiste à faire un enrichissement<br />
en bouillon non sélectif suivi d’un isolement<br />
sur une gélose non sélective et d’une confirmation<br />
sur des kits d’identification appropriés. ■<br />
Eric A. Petat<br />
acm.epm@wanadoo.fr<br />
<strong>La</strong> sous-traitance<br />
en microbiologie<br />
Eric A. PETAT,<br />
ACM PHARMA<br />
<strong>La</strong> volonté de l’industrie<br />
pharmaceutique pour<br />
externaliser de nombreuses<br />
activités périphériques<br />
se poursuit depuis ces dernières<br />
années rejoignant<br />
en cela la politique des<br />
autres grands secteurs<br />
industriels tels que l’automobile, l’aéronautique ou<br />
l’électronique. Les opérations de contrôle analytique<br />
sont particulièrement concernées par cette<br />
tendance avec une spécificité toute particulière<br />
puisque le plus souvent ces contrôles contribuent à<br />
la libération d’un lot pharmaceutique.<br />
Le contrôle microbiologique sous-traité, qu’il<br />
concerne l’amont en production ou le contrôle<br />
libérateur final, n’échappe pas aux règles générales<br />
qui régissent les relations entre donneur d’ordre<br />
et sous-traitant. Les obligations réciproques<br />
relèvent du fonctionnement général des contrats<br />
d’entreprise où l’indépendance du prestataire est<br />
source de sa responsabilité, responsabilité qui<br />
s’exercera aux plans juridique, pénal, disciplinaire<br />
et naturellement pharmaceutique.<br />
Les attentes du donneur d’ordre en microbiologie<br />
sont très variables selon les activités sous-traitées :<br />
contrôles en amont ou pendant les phases de R&D,<br />
contrôles de matières premières ou en cours de<br />
process, contrôles des eaux et de l’environnement,<br />
contrôles libérateurs. Cette diversité exige de la<br />
part du sous-traitant un grand domaine d’expertise<br />
microbiologique et une réelle faculté d’adaptation.<br />
<strong>La</strong> nature biologique des analyses et le caractère<br />
intrinsèquement instable des échantillons renforcent<br />
l’exigence d’une réflexion approfondie (transport,<br />
stockage, méthode) préalable à la mise en<br />
place du partenariat pour garantir la qualité et la<br />
fiabilité des résultats.<br />
Les moyens mis en œuvre par le sous-traitant en<br />
termes d’équipement, d’assurance qualité, de relations<br />
humaines et de compétences seront le point<br />
de départ indispensable pour réussir un partenariat<br />
où les relations entre donneur d’ordres et soustraitant<br />
sont basées sur le respect des contraintes<br />
de chacun.<br />
Après l’élaboration du contrat, du cahier des charges,<br />
et la connaissance mutuelle des partenaires<br />
souvent initiée au cours d’un audit, une relation de<br />
confiance s’établit entre les partenaires. Au-delà<br />
des inévitables contraintes de mise en place<br />
(réglementaires, logistiques…), l’entreprise qui<br />
choisit l’externalisation retire un gain significatif<br />
en termes d’expertise, d’accessibilité à des méthodes<br />
spécifiques, de réactivité et de souplesse qui<br />
font de la microbiologie une activité de contrôle<br />
souvent sous-traitée. ■<br />
Joëlle Sobhane<br />
joelle.sobhane@eubiomerieux.com<br />
Perméabilité comparée<br />
des emballages<br />
des milieux de culture<br />
aux agents de<br />
bio-décontamination<br />
des isolateurs<br />
Joëlle Sobhane,<br />
bioMérieux<br />
L’Isotechnie est une technologie<br />
très répandue dans<br />
l’industrie pharmaceutique,<br />
en production, pour le contrôle de stérilité et la<br />
recherche et développement.<br />
L’évaluation de la contamination microbiologique<br />
des isolateurs est réalisée quotidiennement en utilisant<br />
des milieux de culture qui sont introduits<br />
directement dans l’isolateur et qui subissent le<br />
cycle de bio-décontamination.<br />
<strong>La</strong> qualité nutritive des milieux de culture doit être<br />
conservée afin d’écarter tout risque de faux négatifs.<br />
Pour garantir cette fertilité, il est important<br />
d’éviter tout contact entre les milieux de culture<br />
et les agents de bio-décontamination en utilisant<br />
un emballage imperméable.<br />
Une évaluation de la fertilité des géloses de<br />
contact a été effectuée après un traitement à l’acide<br />
peracétique ainsi qu’une comparaison de la<br />
fertilité obtenue entre les géloses de contact en triple<br />
ensachage cellophane et les géloses de contact<br />
en emballage spécifique imperméable (figure).<br />
Soudure<br />
étanche<br />
Dessicant<br />
Aluminium imperméable<br />
Cellophane<br />
Eclaté de<br />
l’emballage<br />
spécifique<br />
imperméable<br />
<strong>La</strong> société Aventis Pasteur (Marcy l’Etoile, France)<br />
a réalisé le traitement des géloses de contact à l’acide<br />
peracétique dans leur isolateur de contrôle<br />
qualité.<br />
Après avoir été ensemencées par étalement, dans<br />
un délai de 6 heures, à partir d’un inoculum de 10<br />
à 100 UFC, les géloses ont été incubées pendant 72<br />
heures à 28°C - 32°C. A la fin de l’incubation, une<br />
numération des colonies obtenues sur chaque<br />
boîte a été réalisée.<br />
Souches étudiées % de récupération % de récupération<br />
Irradiée ISOLATOR irradiée<br />
Aspergillus Niger<br />
ATCC 16404 121% 88%<br />
Bacillus subtilis<br />
ATCC 6633 106% 110%<br />
Pseudomonas aeruginosa<br />
ATCC 9027 33% 62%<br />
Candida albicans<br />
ATCC 10231 111% 96%<br />
Escherichia coli<br />
ATCC 8739 46% 94%<br />
% de récupération = Nombre moyen de colonies sur 12 boîtes<br />
ayant subi le cycle de décontamination / Nombre moyen<br />
de colonies sur 12 boîtes n’ayant pas subi le cycle de décontamination<br />
x 100.<br />
Selon les procédures qualité internes, le pourcentage<br />
de récupération doit être ≥ à 50%. Cette<br />
valeur tient compte d’un inoculum faible.<br />
Les pourcentages de récupération inférieurs à 50%<br />
obtenus pour les souches d’Escherichia coli et de<br />
Pseudomonas aeruginosa avec les géloses de<br />
contact en triple ensachage cellophane ont permis<br />
de mettre en évidence la perméabilité de la cellophane<br />
à l’acide peracétique ; perméabilité responsable<br />
de la diminution de la fertilité des géloses.<br />
Cette étude démontre que seul un emballage spécifique<br />
imperméable à l’acide peracétique permet<br />
de garantir un pourcentage de récupération<br />
conforme à la spécification attendue. Ainsi, cet<br />
emballage imperméable assure une fertilité optimale<br />
garantie jusqu’à l’intérieur de l’isolateur. Ce<br />
maintien de la fertilité des géloses permet d’éviter<br />
tout risque potentiel de faux négatif. ■<br />
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