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SILVA, Victor Diogenes Amaral da. Caracterização, através de métodos
bioquímicos e biofísicos, de danos mitocondriais e vacuolização autofágica
induzidos por alcaloides da Prosopis juliflora em células do sistema nervoso
central.. 2012. (91)p.Tese (Doutorado em Ciência Animal nos trópicos) - Escola de
Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2012.
RESUMO
As vagens da Prosopis juliflora são muito utilizadas para consumo animal e humano.
No entanto, a sua ingestão como base alimentar induz intoxicação em animais, que
se caracteriza por alterações neuromusculares cujos mecanismos ainda não são
bem esclarecidos. Nesta Tese são apresentados os resultados obtidos em estudos
sobre a caracterização in vitro de lesões celulares e ultraestruturais antes vistas em
animais intoxicados pelo consumo da P. juliflora e a investigação dos mecanismos
de neurotoxicidade de alcaloides piperidínicos desta planta em modelo de
co-culturas de neurônios/células gliais derivadas do córtex de ratos. Nos dois
capítulos apresentados, as células gliais e neurônios foram expostos a alcaloides
extraídos de folhas da P. juliflora testados na forma de extrato alcaloidal (ETA) e
uma fração de alcaloide (F32). No primeiro estudo a F32 foi caracterizada por RMN
como uma mistura dos alcaloides juliprosopina e juliprosina. ETA e F32
apresentaram atividade citotóxica e os valores de EC50 foram 31,07 µg/ml e 7,36
µg/ml, respectivamente. A exposição das células à concentrações subtóxicas induziu
vacuolização, alterações fenotípicas e mudanças ultraestruturais, caracterizadas
pela formação de vacúolos com dupla ou múltipla membranas e danos
mitocondriais. Ainda, nas culturas expostas a doses subtóxicas foi observada
microgliose. No segundo estudo foram utilizadas concentrações próximas à EC50 e
foi demonstrado que ETA e F32 induziram redução nos níveis de ATP, perturbação
do potencial de membrana mitocondrial e aumento significativo no número de
células LC3-positivas após 12 h de exposição, aumento na ativação da caspase-3,
após 16 h de exposição, e alteração drástica na morfologia de neurônios e de
células gliais e um aumento significativo na morte celular após 24 horas de
exposição. Curiosamente, pré-incubação com bafilomicina aumentou a morte celular
e alterações morfológicas induzidas pelo ETA, e privação de soro fetal bovino
reduziu a morte celular e alterações morfológicas induzidas por F32. Estes
resultados sugerem que os alcaloides juliprosopina e juliprosina são os responsáveis
primários pelos danos neurotóxicos observados em animais intoxicados pela P.
juliflora e que o mecanismo de morte neuronal e glial induzida por estes envolve
apoptose em resposta ao dano mitocondrial e inibição do fluxo da autofagia. Além
disso, a autofagia parece ser um mecanismo importante de proteção contra a morte
celular induzida por alcaloides da P. juliflora em co-cultura de neurônios/células
gliais.
Palavras-chave: Prosopis juliflora; alcaloides piperidínicos; neurônios; células gliais;
mitocôndria; vacúolos autofágicos.
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