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Considerando os aspectos toxicológicos da P. juliflora e efeitos neurotóxicos em células gliais, em especial atribuídos aos alcaloides presentes nesta planta, torna importante investigar os efeitos e mecanismos de ação de componentes alcaloidais em sistemas mais complexos de interação de células SNC e determinação de alvos celulares. Nesse contexto, um estudo in vitro foi desenvolvido com o objetivo geral de determinar os mecanismos de citotoxicidade de extrato e fração de alcaloides extraídos de Prosopis juliflora sobre células gliais e neurais em sistema de co-cultivo. Neste estudo foram objetivos específicos: 1) estudar as propriedades citotóxicas através de modificações estruturais e ultraestruturais nas células do SNC induzidas in vitro em um sistema de co-cultura primária de neurônios/células gliais; 2) elucidar a resposta glial à neurotoxicidade induzida pelos alcaloides de P. juliflora determinando ativação de astrócitos e microglia; 3) caracterizar alvos celulares de alcaloides da P. juliflora através da análise de alterações funcionais e metabólicas. O desenvolvimento deste estudo e os resultados obtidos serão apresentados nos capítulos que se seguem. 13
3. ARTIGO CIENTÍFICO I Alcaloides piperidínicos da Prosopis juliflora induzem dano mitocondrial e vacuolização citoplasmática em co-cultura de células gliais e neurônios. Artigo Submetido à Revista Toxicologic Pathology (SCHOLARONE) (Vide anexo) RESUMO Prosopis juliflora é um arbusto muito utilizado para consumo animal e humano. No entanto, a ingestão de suas vagens por animais induz intoxicação, que se caracteriza por alterações neuromusculares induzidas por mecanismos que ainda não são bem compreendidos. Neste estudo, foi investigada a neurotoxicidade de um extrato alcaloidal (ETA) e uma fração de alcaloides (F32) obtidas de folhas da P. juliflora em neurônios corticais de ratos e células gliais. Por RMN, a F32 foi caracterizada como uma mistura dos alcaloides piperidínicos juliprosopina, como constituintes majoritários, e em menor quantidade o alcaloide juliprosina. ETA e F32, em concentrações entre 0,3 e 45 µg/ml foram testados por 24 h em co-culturas de neurônios/células gliais. O teste de MTT revelou que ETA e F32 foram citotóxicos e os valores de EC50 foram 31,07 µg/ml e 7,36 µg/ml, respectivamente. A exposição das células à concentrações subtóxicas (0,3-3µg/ml) induziu vacuolização, alterações fenotípicas e mudanças ultraestruturais, caracterizadas pela formação de vacúolos com dupla ou múltipla membranas e danos mitocondriais. Ainda nas culturas expostas a doses subtóxicas foi observada microgliose. Considerando que F32 foi mais citotóxica do que ETA e que esta reproduz in vitro as alterações morfológicas e ultraestruturais observadas após o consumo da planta por bovinos e caprinos, podemos sugerir que os alcaloides juliprosopina e juliprosina são os responsáveis primários pelos danos neurotóxicos observados em animais intoxicados pela P. juliflora. Palavras-chave: Prosopis juliflora; alcaloides piperidínicos; neurônios; células gliais; neurotoxicidade, mitocôndria. 14
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