Williams-Beureni sündroomi kromosoomi regiooni 22 valgu ...
Williams-Beureni sündroomi kromosoomi regiooni 22 valgu ...
Williams-Beureni sündroomi kromosoomi regiooni 22 valgu ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
IF II – WBSCR<strong>22</strong>CTD<br />
DAPI Anti-WBSCR<strong>22</strong> Ühendatud<br />
A)<br />
Propiidiumjodiid Anti-E2Tag Ühendatud<br />
B)<br />
Joonis 7. WBSCR<strong>22</strong>CTD <strong>valgu</strong> lokalisatsioon SiHa rakkudes. SiHa rakke transfekteeriti<br />
3000 ng WBSCR<strong>22</strong>CTD ekspressiooniplasmiidiga, järgmisel päeval rakud fikseeriti ning<br />
viidi läbi IF analüüs. A) Valgu detekteerimiseks kasutati polüklonaalset anti-WBSCR<strong>22</strong><br />
antikeha ning rakutuumad värviti DAPI-ga. B) Valgu detekteerimiseks kasutati anti-E2Tag<br />
antikeha 3F12 ning tuumade visualiseerimiseks propiidiumjodiidi. Sekundaarse antikehana<br />
kasutati IgG vastast antikeha anti-mouse Alexa-488 (roheline).<br />
WBSCR<strong>22</strong> puhul on ennustatud kaheosalise NLS-i järjestusega RKSRAWVLEKKERHRRQ<br />
(ah 246-262) olemasolu <strong>valgu</strong> C-terminuses. Kui vastavat järjestust sisaldav domeen<br />
eemaldada, lokaliseerub valk tsütoplasmas, kuid selleks, et kindlaks teha, kas tõepoolest<br />
ennustatud järjestus funktsioneerib NLS-ina tuleks läbi viia täiendavaid katseid. Edasisteks<br />
analüüsideks võiks olla NLS järjestuse liitmine mõne teise mitte suguluses oleva <strong>valgu</strong>ga<br />
nagu GFP ning uurida, kas sellest piisab GFP tuuma transpordiks. Samuti võiks NLS<br />
järjestust muteerida ning uurida selle mõju <strong>valgu</strong> lokalisatsioonile. Kui nende katsete käigus<br />
ilmneb, et NLS järjestus on vajalik tuuma transpordiks, peaks järgmisena uurima, kas<br />
WBSCR<strong>22</strong> valk interakteerub identifitseeritud NLS järjestuse kaudu otseselt oma oletatava<br />
impordiretseptoriga. Selleks tuleks puhastatud valkudega läbi viia in vitro seondumise katse<br />
RanGDP või RanGTP juuresolekul.<br />
<strong>22</strong>
Change language