1. Úvod

More documents

Recommendations

Info

Základy kapilární izotachoforézy v gradientu komplexotvorného činidla c , které nenabylo širšího analytického uplatnění, je významnou zejména izoelektrická fokuzace (IEF) amfolytů v gradientu pH. V průběhu IEF se vytváří gradient pH a jednotlivé separandy (nejčastěji bílkoviny či peptidy) se v gradientu pH umístí do polohy odpovídající jejich izoelektrickému bodu pI. I + - II Obrázek 4 S A C C B X, Y, Z + - S A C X C Y C Z C B 4 6 8 Izoelektrická fokuzace směsi amfolytů X, Y a Z o izoelektrickém bodě pI 4, 6 a 8 v gradientu pH (S je místo dávkování vzorku). Anodová část je naplněna kyselým a katodová část alkalickým elektrolytem. Separační část je naplněna nosným amfolytem zajišťujícím gradient pH. (I) počáteční stav analýzy (II) je situace po rozdělení směsi. c Gradient se realizuje umístěním alkalického roztoku komplexotvorného činidla do katodového a minerální kyseliny do anodového prostoru. Po určité době od zapnutí elektrického proudu se vytvoří gradient pH a tím díky rostoucí protonizaci i gradient koncentrace ligandu. 10 CITP v analýze potravin pH
Základy kapilární izotachoforézy Zde je jejich efektivní pohyblivost nulová, a proto se s časem nemění jejich poloha. Princip ilustruje Obrázek 4. Šířka zóny je úzká, neboť proteiny, které oddifundovaly, se vracejí elektromigrací zpět. Je několik způsobů, jak vytvořit pH gradient. Nejčastěji se používá směsi amfolytů, jejichž izoelektrické body se v daném intervalu pH kontinuálně mění. Migrací v elektrickém poli mezi alkalickou katodou a kyselou anodou doputují všechny amfolyty do místa svého izoelektrického bodu, a tak vytvoří pH gradient. Tato technika se realizuje na tenké vrstvě gelu (polyakrylamid, agarosa) s následnou imunochemickou nebo chemickou detekcí rozdělené směsi s fotometrickém vyhodnocením. V kapilárním uspořádání 14 s on-line detekcí je nedílnou součástí separace mobilizace. Cílem mobilizace je průchod fokuzovaných amfolytů detektorem. Lze toho dosáhnout např. aplikací tlaku, který vytlačí amfolyty ven z kapiláry přes detektor. Pokud to použité instrumentace dovolují, provádí se tato mobilizace za současné aplikace napětí na kapiláru, což zaručuje, že amfolyty zůstanou fokuzovány a nedojde k případnému difúznímu rozmytí fokuzovaných zón. Jiným způsobem je tzv. chemická mobilizace, která se může provádět dvěma způsoby. Záměnou báze v elektrodové nádobce katody za kyselinu nebo záměnou kyseliny v elektrolytové nádobce anody za bázi. Druhým způsobem chemické mobilizace je pak záměna jedné z elektrolytových nádobek za roztok soli (např. NaCl). Pokud se roztokem soli nahradí anolyt, probíhá mobilizace směrem k anodě a naopak. Celá metoda kapilární IEF má tedy dvě fáze, a sice fázi vlastní fokuzace a fázi detekce, která je v tomto případě vlastně synonymem mobilizace. Existují i postupy, kdy se celý proces provádí v jednom kroku. Jedná se o současné vložení napětí a tlaku na kapiláru, případně se využívá elektroosmotické mobilizace. Vzájemná separovatelnost dvou látek je dána minimálním rozdílem jejich pI (∆pH) hodnot vedoucí k rozlišení R=<strong>1.</strong> ∆pI = 4⋅ ( pH ) d Di dx dm d ( ) E i ⋅ pH (rovnice 4) CITP v analýze potravin 11
Page 1 and 2: 1. Úvod Úvod Od poloviny 19. stol
Page 3 and 4: Úvod K významným zahraničním p
Page 5 and 6: 2. Základy kapilární izotachofor
Page 7 and 8: 2.1.1 Zónová elektroforéza Zákl
Page 9: Základy kapilární izotachoforéz
Page 13 and 14: Základy kapilární izotachoforéz
Page 23 and 24: Λ = Λ 0 ⎡ 5 3 8, 204 ⋅10 8, 2
Page 29 and 30: Výpočet vedoucí zóny Základy k
Page 31 and 32: Výpočet parametrů zóny vzorku Z
Page 33 and 34: c t S − c ⎧ ⎪⎡ nB ⎛ i /
Page 47 and 48: Izotachoforetická analýza zařadi
Page 49 and 50: Separační proces Izotachoforetick
Page 51 and 52: TABULKA 5 Izotachoforetická analý
Page 53 and 54: S A = F I ∂n ⋅ ∂t A ⎛ k ⎜
Page 55 and 56: Izotachoforetická analýza Napří
Page 57 and 58: R L l X X h X - hL čas l St St h S
Page 59 and 60: RSH X = h h X T − h − h L L Izo
Page 61 and 62:
Izotachoforetická analýza V izota
Page 63 and 64:
Izotachoforetická analýza kontinu
Page 65 and 66:
Izotachoforetická analýza Separac
Page 67 and 68:
Izotachoforetická analýza zaveden
Page 69 and 70:
Ostatní techniky Izotachoforetick
Page 71 and 72:
4. Volba pracovních elektrolytů V
Page 73 and 74:
Volba pracovních elektrolytů akce
Page 75 and 76:
TABULKA 7 Základní doporučené o
Page 77 and 78:
Volba pracovních elektrolytů kov
Page 79 and 80:
Volba pracovních elektrolytů náz
Page 81 and 82:
Volba pracovních elektrolytů Tato
Page 83 and 84:
Volba pracovních elektrolytů př
Page 85 and 86:
Volba pracovních elektrolytů �
Page 87 and 88:
Volba pracovních elektrolytů kyse
Page 89 and 90:
Instrumentace pro kapilární izota
Page 91 and 92:
Page 93 and 94:
Page 95 and 96:
Page 97 and 98:
Page 99 and 100:
5.4 Řídící a vyhodnocovací č
Page 101 and 102:
5.5.1 IONOSEP 900.1 Instrumentace p
Page 103 and 104:
Page 105 and 106:
6. Aplikace CITP v analýze potravi
Page 107 and 108:
Aplikace CITP v analýze potravin V
Page 109 and 110:
Aplikace CITP v analýze potravin S
Page 111 and 112:
6.1.2 Anorganické anionty Aplikace
Page 113 and 114:
Aplikace CITP v analýze potravin t
Page 115 and 116:
Aplikace CITP v analýze potravin S
Page 117 and 118:
Aplikace CITP v analýze potravin i
Page 119 and 120:
Aplikace CITP v analýze potravin b
Page 121 and 122:
Aplikace CITP v analýze potravin k
Page 123 and 124:
Aplikace CITP v analýze potravin a
Page 125 and 126:
Aplikace CITP v analýze potravin f
Page 127 and 128:
Aplikace CITP v analýze potravin c
Page 129 and 130:
6.2.4 Regulátory kyselosti Aplikac
Page 131 and 132:
6.2.6 Látky chuťové a povzbuzuj
Page 133 and 134:
Aplikace CITP v analýze potravin P
Page 135 and 136:
Aplikace CITP v analýze potravin p
Page 137 and 138:
6.3.3 Ostatní kontaminanty Aplikac
Page 139 and 140:
Použitá literatura 16 Hirokawa T.
Page 141 and 142:
Použitá literatura 48 Blatný P.,
Page 143 and 144:
Použitá literatura 77 Fanali S.,
Page 145 and 146:
Použitá literatura 105 Blatný P.
Page 147 and 148:
Použitá literatura 138 Stover F.S
Page 149:
Použitá literatura 167 Stránský
show all

1. Úvod

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?