1. Úvod
1. Úvod
1. Úvod
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Základy kapilární izotachoforézy<br />
Z rovnice vyplývá, že vysoké rozlišovací schopnosti IEF je dosaženo minimalizací<br />
d(<br />
pH )<br />
směrnice pH gradientu v separační části, aplikací vysokých intenzit<br />
dx<br />
elektrického pole (E), fokuzací látek s nízkým difúzním koeficientem (Di) nebo<br />
snížením difúze vlivem stabilizujícího prostředí (gel) a velkou změnou pohyblivostí v<br />
okolí svého izoelektrického bodu<br />
proteiny lišící se o 0,005 pI jednotek.<br />
2.<strong>1.</strong>4 Izotachoforéza<br />
dmi . Ve určitých případech je možné rozlišit<br />
d(<br />
pH )<br />
Při izotachoforéze se používají dva základní elektrolyty, vedoucí (leading) a koncový<br />
(terminating). Vedoucí elektrolyt obsahuje vedoucí ion, který má větší efektivní<br />
pohyblivost (v absolutní hodnotě) než všechny analyzované ionty vzorku. Koncový<br />
(zakončující) elektrolyt obsahuje koncový ion, který má menší efektivní pohyblivost<br />
než kterýkoliv ion vzorku. V jedné analýze je možné separovat pouze jeden druh<br />
iontů, tj. anionty nebo kationty. Při separaci aniontů je na začátku experimentu<br />
anodový a separační prostor vyplněn vedoucím elektrolytem (viz Obrázek 5). Tento<br />
elektrolyt obsahuje kromě vedoucího aniontu (bývá používán nejčastěji chloridový<br />
anion, pro kationické analýzy draselný či amonný kation) kation, tzv. protiion, který<br />
spolu s vedoucím aniontem tvoří pH tlumící směs. Katodová část je vyplněná<br />
roztokem zakončujícího elektrolytu. Roztok obsahující analyzovaný materiál se<br />
vkládá mezi vedoucí a koncový elektrolyt. Vložením stejnosměrného elektrického<br />
proudu se anionty začnou pohybovat k anodě. Vzhledem k tomu, že v době startu<br />
analýzy se nacházejí všechny anionty vzorku v oblasti shodné intenzity elektrického<br />
pole E pohybují se podle rovnice (1) různými rychlostmi, které jsou úměrné jejich<br />
efektivním pohyblivostem. Vedle rovnice (1) podmiňující separaci iontů A a B musí<br />
být v každém místě separačního prostoru splněny čtyři podmínky:<br />
<strong>1.</strong> Ohmův zákon<br />
E ⋅κ =<br />
i<br />
(rovnice 5)<br />
12 CITP v analýze potravin