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Absorption (450 nm) Kein Analyt Mittlere Konzentration an Analyt Trennung von gebundenen und ungebundenen Molekülen (Waschschritte) und Zugabe von Substrat für die Substratreaktion Maximale Konzentration an Analyt Analytkonzentration (µg/l) Analytkonzentration (µg/l) Analytkonzentration (µg/l) Antikörper Absorption (450 nm) Analyt Tracer (markierter Analyt) Abbildung 2: Schema des direkt-kompetitiven heterogenen ELISA Absorption (450 nm) Substrat Produkt Die Auswertung der Messung erfolgt anhand einer Standardkurve, die man bei logarithmischem Auftragen der Konzentration gegen die Absorptionswerte erhält. Sie zeigt einen sigmoidalen Verlauf, der mathematisch sehr gut durch die 4-Parameter- Funktion (de Lean et al., 1978; Rodbard, 1981) beschrieben wird: 18
A−D y = + D B x 1+ C y Absorption x Konzentration des Analyten A maximale Absorption, x = 0 (obere Asymptote) B Steigung am Mittelpunkt der Kurve C Konzentration am Mittelpunkt der Kurve D minimale Absorption, x = maximal (untere Asymptote) 19 Gleichung 1 Als Meßbereich eines Immunoassays wird im allgemeinen der lineare Bereich der Standardkurve verwendet. Zur Ermittlung des Meßbereiches und der Nachweisgrenze (Sensitivität) des Immunoassays werden in der Literatur verschiedene Methoden beschrieben, eine Übersicht gibt (Brady, 1995) Häufig wird die Nachweisgrenze aus dem Wert bei 80% oder 90% Inhibierung berechnet oder aus der dreifachen Standardabweichung der Absorption einer Blindprobe extrapoliert. Für die hier untersuchten kommerziellen Test-Kits wird in der Herstellerinformation der Wert bei 90% Inhibierung als Nachweisgrenze angegeben. 2.2.2.2 Kreuzreaktivitäten Mit dem Begriff Kreuzreaktivität wird die Fähigkeit eines Antikörpers beschrieben, neben dem Hauptanalyten noch weitere Substanzen zu binden. Ursache für dieses, insbesondere bei Antikörpern gegen niedermolekulare Verbindungen auftretende Phänomen, sind Affinitäten eines Antikörpers zu strukturell ähnlichen Verbindungen, z.B. Metaboliten des Hauptanalyten oder auch Verbindungen der gleichen Verbindungsklasse wie z.B. verschiedene PAH. Daneben treten bei polyklonalen Antikörpern Querempfindlichkeiten auf, die durch das Vorhandensein von Antikörper-Mischpopulationen bedingt sind (Hock, 1993). Die gebräuchlichste Methode zur Ermittlung der Kreuzreaktivitäten ist die Methode von Abraham (Abraham, 1969). Danach wird aus den entsprechenden Kalibrierkurven die Konzentration von Standard (Hauptanalyt) und Kreuzreaktant am Mittelpunkt der Kurven ermittelt. Die Kreuzreaktivität wird durch das prozentuale Verhältnis der Konzentrationen angegeben (Gleichung 2):
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Testergebnis [ppm] 14 12 10 8 6 4 2
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Tabelle 23: DTech PAH Test, Untersu
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Tabelle 24: Tabelle: Ris c Soil Tes
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des Methanolextraktes dieser Probe
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Dotierung mit 16 PAH Alle Proben, d
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wurde bei der Untersuchung des Bode
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(Dotierung 2.5 ppm) außerhalb des
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Im DTech PAH Test wurde der Boden K
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Die Testergebnisse und die entsprec
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Für den DTech PAH Test wurde auf d
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Testergebnis [ppm] 10 8 6 4 2 0 n.n
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Im Ris c Soil Test wurde die PAH-St
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Testergebnis [ppm] 14 12 10 8 6 4 2
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die niedermolekularen PAH (besonder
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Verbindungen häufig in höheren Au
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Für die dotierten Böden wurden Au
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Pipetten oder Extraktionsgefäße v
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Mit Ausnahme des DTech PAH Tests, d
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Tabelle 48: Ris c Soil Test, Übers
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Tabelle 49: PAH RaPID Assay, Übers
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Unterbefunde zu erwarten, da der Te
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In Abbildung 19 sind die Ergebnisse
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4.4 Ergebnisse der zweckspezifische
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Anteil [%] Summe 15 PAH 35% 30% 25%
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Vor den Untersuchungen im PAH RaPID
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Testergebnis [ppm] 600 500 400 300
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4.4.1.2 Felduntersuchungen In einer
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Anteil [%] Summe 15 PAH 35% 30% 25%
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Tabelle 57: Ris c Soil Test, Realpr
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Tabelle 58: PAH RaPID Assay, Realpr
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Inhomogenitäten, wie in den Proben
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Die Felduntersuchung der Proben von
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Tabelle 61: DTech PAH Test, Realpro
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Tabelle 62: Stadtallendorf, Referen
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(Methanolextrakt der Tests, Extrakt
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Entsprechend der PAH-Verteilung in
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4.5 Übersicht der zweckspezifische
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Dennoch wurden auch in der auf den
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die Konzentration der Proben mit >1
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Keepers, teilweise Verluste für di
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der PAH (jede Verbindung in gleiche
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Bei der Untersuchung von hochkontam
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Der Ris c Soil Test eignet sich fü
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Mit dem DTech PAH Test wurden mehrh
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7 Literaturverzeichnis Abraham, G.E
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Chen, G.S., Schramm, K.-W., Klimm,
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Chromatography Atmospheric Pressure
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Hock, B. (1993). Immunochemische Ve
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Martín-Esteban, A., Fernández, P.
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gaschromatographischer Analyse. GIT
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StLMU. (1997). Probenahme von Böde
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8 Anhang 8.1 Verwendete Geräte, Ch
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8.2 Statistische Kenngrößen Zur B
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8.3 Datenanhang Tabelle A 1: Refere
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Tabelle A 4: Risc Soil Test Standar
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Tabelle A 6: PAH RaPID Assay, Stand
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Tabelle A 37: DTech PAH Test, Feldu
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Tabelle A 39: Sanierungsgelände St
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