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2. Methoden und Materialen 35
(OLV) der Pixel, die den Ncl. facialis repräsentieren, berechnet. Die zu markierenden
zellulären Cy3-Profile wurden anhand eines Schwellenwertes von MEAN + SD bestimmt.
Diese Profil-Maske wurde auf das korrigierte und ebenfalls geglättete FITC-Bild übertragen
und hier der Mittelwert der OLV aller Pixel im Ncl. facialis (MEAN-Ncl. facialis) und der
Mittelwert von den Pixeln innerhalb der Maske (MEAN-zelluläre Maske) berechnet. Daraus
ergab sich der relative Färbekoeffizienten (RISC), der sich wie folgt berechnet:
RISC = log (MEAN-zelluläre Maske : MEAN-Nucleus facialis)
Anschließend wurde die Differenz der relativen Färbekoeffizienten zwischen der jeweils
operierten Seite (RISC-Operiert) und der kontralateralen, gesunden Seite als endogene
Kontrolle (RISC-Kontrolle) bestimmt. Diese ist ein Maß für die Veränderung der
Immunreaktivität des jeweilig getesteten spezifischen Aktivierungsmarkers nach
Fazialisaxotomie.
DIFF-RISC = (RISC-Operiert) – (RISC-Kontrolle)
Die statistische Auswertung der zellulären Immunreaktivität der spezifischen
Aktivierungsmarker erfolgte an vier definierten Zeitpunkten nach Fazialisaxotomie (Tage
1, 3, 4, 14). Die relativen Färbekoeffizienten (RISC) der operierten und der kontralateralen
Ncl. faciales wurden bei 5 Schnitten von jeweils 3 bis 8 Tieren pro Gruppe nach dem RISC
Algorithmus bestimmt, wobei die jeweiligen Berechnungsschritte der Koeffizienten
teilautomatisiert durch Programmierung in OPTIMAS und EXCEL erfolgten. Dann wurden die
Mittelwerte der Färbeintensitäten getrennt für die operierten und die kontralateralen Seiten
errechnet, graphisch aufgetragen und mit einem gepaarten t-Test bei einem
Signifikanzniveau von 5% auf statistisch signifikante Unterschiede getestet.