PLATELIAâ„¢ CANDIDA Ag - Bio-Rad

8. Folie abnehmen. Den Inhalt aller Vertiefungen in einen Behälter für infektiöse
Abfälle (mit Natriumhypochlorit) absaugen. Die Platte fünfmal mit
mindestens 370 µL Arbeitswaschlösung waschen. Nach dem letzten
Waschgang die Mikrotiterplatte umdrehen und vorsichtig auf Saugpapier
ausklopfen, um die verbleibende Flüssigkeit zu entfernen.
9. Rasch 200 µL Substrat-Chromogen-Reaktionslösung (R8 + R9), abseits von
starker Lichteinwirkung, in jede Vertiefung pipettieren.
10. Die Mikrotiterplatte lichtgeschützt bei Raumtemperatur (18 - 25°C)
30 ± 5 Minuten lang inkubieren. Während diesem Inkubationsschritt keine
Klebefolie verwenden.
11. 100 µL Stopplösung (R10) in der gleichen Reihenfolge wie die Substrat-
Chromogen-Reaktionslösung zusetzen. Gründlich mischen.
12. Den Boden jeder Platte sorgfältig abwischen.
13. Die optische Dichte (OD) jeder Vertiefung bei 450 nm ablesen (Referenzfilter
620/630 nm). Die Mikrotiterplatten müssen innerhalb von 30 Minuten nach
Zugabe der Stopplösung abgelesen werden.
11- QUALITÄTSKONTROLLE (GÜLTIGKEITSKRITERIEN)
Quantitatives Verfahren
Für jeden Test auf jeder Mikrotiterplatte Kontrollseren und Bereichspunkte
verwenden. Für einen gültigen Test müssen folgende Kriterien erfüllt sein:
• Extinktionswert:
0,300 < OD des 0,5 ng/ml-Bereichspunktes < 1,100
• Verhältnis:
OD (2,0 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) > 2,1
OD (1,0 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) > 1,25
OD (0,25 ng/mL-Bereichspunkt) / OD (0,5 ng/mL-Bereichspunkt) < 0,85
OD (R3) / OD (0,25 ng/mL-Bereichspunkt) ≤ 0,80
• Mannan-Konzentration:
R5-Konzentration gleich der auf dem Fläschchen angegebenen
Konzentration ± 20%.
Qualitatives Verfahren
• Berechnung des Grenzwerts (GW)
Die Extinktionswerte jeder Vertiefung, die den 0,5 ng/mL-Bereichswert
enthält, addieren und durch 2 dividieren.
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