Biochemie Praktikum I

Praktikumsskript Biochemie für Biologen-Bachelor SS2012
SDS-Elektrophorese
Durchführung
1. Zwei unterschiedliche Glasplatten werden mittels Abstandhalter (Spacer) zusammengesetzt.
2. Die Trenngellösung wird entsprechend oben stehendem Rezept angerührt und zwischen die
Glasplatten gegossen (bis 2 cm unter den Rand) und bis zur Polymerisation mit Isopropanol
oder Wasser überschichtet (vermeidet die Ausbildung von Blasen sowie das Austrocknung
des Gels, dadurch wird eine möglichst ebene Grenzfläche zum Sammelgel erhalten).
3. Nach der Polymerisation wird die überstehende Flüssigkeit entfernt.
4. Danach wird das Sammelgel aufgetragen und ein Plastikkamm in die Sammelgelschicht
eingesetzt. Dadurch bilden sich Taschen zum Auftragen der Proteinproben.
5. Nach der Polymerisation wird vorsichtig der Kamm herausgezogen und das Gel mit der
kompletten Halterung inklusive Elektroden in eine Pufferkammer eingesetzt.
6. Beide Pufferkammern (innen und außen) werden mit Elektrophoresepuffer befüllt.
7. Proteinproben und Proteinstandard in Probentaschen auftragen:
• Proben vor dem Auftragen 3 min bei 90°C denaturieren, anschließend 1 min bei 13000rpm
zentrifugieren.
• 2 µl Proteinstandard in die erste Geltasche einfüllen, in die folgenden Taschen die
vorbereiteten Proben (10 µl) geben.
8. Elektrophorese durch Anlegen einer Spannung von 150 V starten (Polung beachten).
9. Die Elektrophorese ist beendet, wenn die Bromphenolblau-Bande das untere Ende des Gels
erreicht hat (ca. 70 min).
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