Biosynthese von 4-Hydroxy-2 5-dimethyl-3 - Bina

Inhaltsverzeichnis VII
3.5.2.1 Enzymassays.......................................................................................... 146
3.5.2.2 Gewinnung des geklärten Extraktes ...................................................... 148
3.5.2.3 Chromatographie an Q-Sepharose Fast Flow........................................ 148
3.5.3 Heterologe Expression und biochemische Charakterisierung einer
Alkohol-Dehydrogenase aus Erdbeeren........................................................ 148
3.5.3.1 Bakterienwachstum ............................................................................... 148
3.5.3.2 Genexpression ....................................................................................... 149
3.5.3.3 Isolierung und Reinigung der ADH ...................................................... 149
3.5.3.4 Enzymassay ........................................................................................... 149
3.6 UNTERSUCHUNGEN ZUR BILDUNG VON HDMF IN PROTEINEXTRAKTEN
REIFENDER ERDBEERFRÜCHTE............................................................................ 150
3.6.1 Extraktgewinnung.......................................................................................... 150
3.6.2 Inkubation...................................................................................................... 150
3.6.3 Extraktion und Analyse.................................................................................. 151
3.7 ENANTIOSELEKTIVE ANALYSE VON HDMF ....................................................... 151
3.7.1 Darstellung von einantiomerenangereichertem HDMF................................ 151
3.7.2 Extraktion von HDMF aus Erdbeerfrüchten................................................. 151
3.7.3 HDMF durch Inkubation mit Erdbeerproteinextrakt .................................... 152
3.7.4 Bestimmung des optischen Drehwinkels der HDMF-Enantiomere............... 152
3.8 CHARAKTERISIERUNG DER ENZYMKATALYSIERTEN BILDUNG VON HDMF
AUS D-FRUCTOSE-1,6-DIPHOSPHAT.................................................................... 153
3.8.1 Variation des pH-Wertes ............................................................................... 153
3.8.2 Einfluss der Temperatur ................................................................................ 153
3.8.3 Einsatz unterschiedlicher Substratmengen - Michaelis-Menten-Kinetiken... 153
3.8.4 Einfluss des Reifegrades der Erdbeerfrüchte auf die Menge an
gebildetem HDMF ......................................................................................... 154
3.8.5 Variation der Substrate ................................................................................. 154
3.9 AUFREINIGUNG DER HDMF-BILDENDEN ENZYMATISCHEN AKTIVITÄT.............. 155
3.9.1 Grundlegende Aufreinigungsschritte............................................................. 155
3.9.1.1 Herstellung des geklärten Extraktes ...................................................... 155
3.9.1.2 Ultrafiltration......................................................................................... 155