Grundstudium Biologie Grundkurs V

Durchführung:
Stellen Sie sich wie folgt die Präparate für die mikroskopische Betrachtung aller vorgegebenen
Bakterien her: Geben Sie mit einer Pasteurpipette einen Tropfen Wasser auf den Objektträger.
Daneben geben Sie mit der Impföse wenig Bakterienmasse von den Plattenkulturen. Verreiben
Sie die Bakterien mit der Impföse homogen auf dem Objektträger. Ziehen Sie dann die Bakterien-
suspension homogen in den Wassertropfen hinein. Die Impföse ist nach jedem Gebrauch auszu-
glühen! Von den Flüssigkeitskulturen geben Sie 2-3 Impfösen direkt auf den Objektträger. Legen
Sie dann das Deckglas auf, und mikroskopieren Sie zunächst mit dem 40er und dann mit dem
100er Objektiv (mit Immersionsöl). Skizzieren Sie die jeweiligen Zellformen und notieren Sie die
Pigmentierung der Ausgangskolonie.
2. Cytologie
Viele Bakterien sind stäbchenförmig und wenig pigmentiert (siehe Beispiel 4). Hier kann man zur
Identifizierung zunächst zelluläre Strukturen nachweisen, indem man diese durch Färbung sichtbar
macht. Eine für diagnostische und taxonomische Zwecke wichtige Färbe-Methode ist die
"Gram-Färbung" (H. C. Gram war ein dänischer Mikrobiologe). Sie erfordert 4 Teilschritte, gefolgt
von einer Gegenfärbung: 1) strukturschonende Hitzeabtötung (Fixierung) der Zellen. Färbung
der gesamten Zelle in zwei Teilschritten (2 und 3) mit einem Kristallviolett-Jod Komplex als
dunkelviolettem Farblack. 4) Differenzierung, d.h. selektive Entfärbung der Zellen mit Ethanol. 5)
Gegenfärbung mit Fuchsin. Bei den Gram-positiven Bakterien wird durch den vielschichtigen, dickeren
Peptidoglycan-Sacculus der Farblack beim Differenzierungsschritt besser in der Zelle zurückgehalten
als bei den Gram-negativen Bakterien mit ihrer dünnen Peptidoglycanschicht. Grampositive
Bakterien bleiben bei der Differenzierung daher dunkelviolett. Gram-negative werden
entfärbt, sie werden bei einer anschließenden Gegenfärbung mit Fuchsin rot gefärbt. Damit kann
man Bakterien mit Hilfe der Gram-Färbung in zwei große Gruppen einteilen, die sich anhand der
Zellwandstruktur voneinander unterscheiden.
Vers. IV.2
Material:
- Platten-Kulturen von Escherichia coli und Bacillus sp..
- Färbelösung nach Gram: Kristallviolett (1:5 mit Aqua dest. verdünnt).
- Lugolsche Lösung (Iod-Kaliumiodid-Lösung): 1g Jod + 2g KJ in 300 ml Aq. dest.(unverd. 1%)
- Ethanol: 96%ig.
- Fuchsinlösung: gesättigte, filtrierte Fuchsinlösung mit Aqua dest. 1:10 verdünnt.
- Mikroskop (Hellfeldeinstellung), Objektträger, Immersionsöl, Impföse, Pasteurpipetten,
- Pipettenhütchen
Durchführung:
Führen Sie die Gram-Färbung mit (a) Escherichia coli und (b) Bacillus sp. sowie mit einer Mi-
schung von (a) und (b) wie folgt durch (die Reagenzien sind gebrauchsfertig vorgerichtet):
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