Grundstudium Biologie Grundkurs V

4. Isolierung von Bakterien und Pilzen aus Wasserproben
Auch im Wasser kommen freilebende Bakterien und Pilze vor. Je nach Reinheitsgrad des Wassers
kommen zahlen- und formenmäßig mehr oder weniger viele Mikroorganismen vor. Um einen
Eindruck darüber zu gewinnen, werden Wasserproben von verschiedenen Standorten überprüft.
Dazu werden die Proben durch Filtration angereichert.
Versuch I. 4
Material: Wasserproben (gerade Tisch-Reihen: Trinkwasser ; ungerade Reihen : Teichwasser
GPH-Agarplatten, Filtrationsgerät ( je 1 für Trink- und für Teichwasser ), Filter, Pinzette.
Durchführung:
Die Wasserproben (jeweils 100 ml/Gruppe) werden durch Bakterien-dichte Membranfilter filtriert.
Anschließend werden die Membranfilter mit einer sterilen Pinzette mit der Unterseite nach
unten auf eine GPH-Agarplatte gelegt. Die Agarplatten werden bei 30°C im Brutraum bebrütet.
Isolierung von Sporenbildnern
Die Bildung hitzeresistenter Endosporen ist ein charakteristisches Merkmal der Gattungen Bacillus
(aerob) und Clostridium (anaerob). Bacillen und Clostridien sind Gram-positive Eubakterien,
die verschiedene organische C-Quellen (wie z.B. Zucker) verwerten können. Ihre sonstigen Nährstoffansprüche
können durch ein mineralisches Nährmedium gedeckt werden. Im Gegensatz zu
vegetativen Zellen überdauern Endosporen das Pasteurisieren (10 min feuchte Hitze bei 80°C).
Bacillus subtilis ist zur Hydrolyse von Stärke befähigt. Die Hitzeresistenz der Sporen, die Fähigkeit
zur Stärkehydrolyse sowie Wachstum in Gegenwart von 7% NaCl werden als selektive
Merkmale zur Anreicherung von B. subtilis ausgenützt.
Für die Anreicherung saccharolytischer Clostridien ist die Einstellung anaerober Bedingungen
sowie eine Versorgung der Organismen mit Stärke ausreichend.
5. Aerobe Sporenbildner (Bacillus-Arten)
Vers. I. 5
Material: Gartenerde, Aqua dest., Reagenzglas, Kappe, Pasteurpipette, Drigalski-Spatel, Petrischale
mit Stärkeagar
Anreicherungsprinzip : aerob, Stärke, Selektion von Sporenbildnern
Durchführung: In einem Reagenzglas wird eine Spatelspitze Gartenerde mit etwa 5 ml Aqua dest.
aufgeschwemmt; das Reagenzglas wird mit einer Kappe verschlossen und im Wasserbad 10 min
bei 80°C erhitzt. Anschließend wird mit einer Pasteurpipette ein Tropfen der Erdaufschwemmung
auf den Stärkeagar gegeben und mit dem Drigalski-Spatel ausgestrichen. Die Agarplatten werden
bei 30°C bebrütet (3-4 Tage).
6. Anaerobe Sporenbildner (Clostridien-Arten)
Vers. I. 6
Material: Gartenerde, Kartoffel, Schraubdeckelröhrchen mit Verschlusskappe, Korkbohrer
Anreicherungsprinzip : anaerob, Stärke
Durchführung :
Eine Spatelspitze Gartenerde wird in das Röhrchen gegeben; darüber werden Kartoffelstückchen
geschichtet, die mit einem Korkbohrer aus einer Kartoffel gebohrt wurden. Anschließend wird das
Röhrchen vorsichtig (Vermeidung von Turbulenzen!) mit Leitungswasser nicht ganz voll ( ca. 2
cm bis zum Rand ) aufgefüllt und mit der Kappe zugeschraubt. Bebrütung bei 30 °C im Brutraum.
6