34 Seiten als pdf - MedRSD - Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Doktorandenkongress der Medical Research School Düsseldorf 2011 3.5 GLEPP1 reduces endocytosis of nephrin and reorganizes the cytoskeleton Laura Gerbaulet, Senah Kabbany, Sarah Grabowski, Eva Königshausen, Ivo Quack, Magdalena Woznowski, L.C. Rump, Lorenz Sellin Klinik für experimentelle Nephrologie Introduction: GLEPP1 (glomerular epithelial protein phosphatase 1) is a receptor tyrosine phosphatase expressed in the apical membrane of foot processes. GLEPP1 expression is reduced in proteinuric kidney diseases. Previously we could show that the interaction of nephrin with podocin and ß-arrestin2 and endocytosis of nephrin is regulated by src family kinases. This observation led to the concept of the dynamic regulation of the glomerular slit diaphragm. Work by others implicated GLEPP1 to be a protective factor for the glomerular slit. We hypothesize a protective regulatory role for GLEPP1 in respect to nephrin endocytosis and a potential important role for the dynamics of the podocytes’ cytoskeleton. Methods: In our experiments we used cells expressing GLEPP1 and nephrin, podocin, src, fyn, FAK, ß-arrestin2 or paxillin. After cell lysis, coimmunoprecipitation with subsequent western blot analysis was performed. For immunofl uorescence, cells expressing GLEPP1 and paxillin.GFP were fi xed and permeabilized thereafter. GLEPP1 was visualized by immunofl uorescence. Results: GLEPP1 interacts with the slit diaphragm proteins nephrin and podocin as well as with the src family kinases src and fyn. Furthermore, GLEPP1 enhances the interaction of nephrin with podocin and reduces the interaction of nephrin with ß-arrestin2. GLEPP1 dephosphorylates src and fyn at their regulatory tyrosine residue 527. The interaction of src/fyn with a substrate trapping mutant of GLEPP1 is enhanced compared to the wildtype phosphatase which indicates that src and fyn are indeed substrates of GLEPP1. In addition, GLEPP1 expression induces cytoskeletal rearrangement. Conclusion: The integrity of the glomerular slit diaphragm is regulated by src kinase mediated tyrosine phosphorylation of the nephrin C-terminus. We hypothesize that GLEPP1 activates src family kinases through interaction and dephosphorylation of src family kinases at their regulatory domain. Activated src family kinases consequently increase nephrin tyrosine phosphorylation at its C-terminus. Additionally, GLEPP1 seems to force cytoskeletal changes which might be of importance maintaining the delicate shape of healthy foot processes. Via this mechanism, GLEPP1 may support the integrity of the slit diaphragm and play a role in protection against the development and progression of glomerular proteinuric kidney disease. 9 3.6 Auswirkungen einer kurzzeitigen Hyperkapnie auf die Immunmodulation im Sepsismodell der Ratte Jan Schulz, Charlotte Stübs, Christopher Beck, Inge Bauer, Olaf Picker Klinik für Anästhesiologie Einleitung: Eine Hyperkapnie steigert die Oxygenierung der Magenschleimhaut [1] und reduziert am in vitro Endotoxinmodell die Zytokinantwort [2]. Im Rahmen dieser Studie wurde nun untersucht, ob eine Hyperkapnie auch in vivo die Zytokinantwort bei einer polymikrobiellen Sepsis moduliert. Material/Methoden: Mit Genehmigung des Landesamts für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz wurden 40 männlichen Wistar-Ratten entweder ein Stent (18G) in das Colon implantiert (n=20) (colon ascendens stent peritonitis (CASP) [3]) oder eine sham Laparotomie durchgeführt (n=20). Nach 24 h wurden die Tiere narkotisiert, intubiert und kanüliert. Zur Zytokinbestimmung wurde 1ml arterielles Blut entnommen. Nach 60 Minuten normokapnischer Ventilation folgten 120 Minuten druckkontrollierter Beatmung mit entweder normokapnischen (etCO2 = 35-45mmHg) oder moderat hyperkapnischen (etCO2 = 65-70mmHg, exogene CO2-Zufuhr) Zielwerten, mit abschließender Blutentnahme. Die Serumkonzentrationen der Zytokine IL-6, -10 und TNF-a wurden mit Enzyme- Linked Immunosorbent Assays (ELISA) quantifi ziert. Statistik: Median (25 / 75% Perzentile); Kruskal-Wallis ANOVA; Mann-Whitney test; p
Doktorandenkongress der Medical Research School Düsseldorf 2011 3.7 Entwicklung eines in vitro-Modells zur Untersuchung der Eff ekte anästhetischer Präkonditionierung auf die Expression von microRNAs in Rattenkardiomyozyten Remo Siefke, Timo Brandenburger, Inge Bauer, Hilbert Grievink Klinik für Anästhesiologie Hintergrund: Die anästhetische Präkonditionierung (APC) mit volatilen Anästhetika ist eine eff ektive und wenig invasive Möglichkeit, Gewebeschäden am Herz bei ausgedehnten Ischämien zu reduzieren. Der zugrundeliegende Mechanismus wirkt bereits unmittelbar nach der Präkonditionierung und wird u.a. mit der verstärkten RNA-Transkription bestimmter Faktoren wie z.B. vascular endothelial growth factor (VEGF) in Verbindung gebracht. Bei der auf ähnlichen Mechanismen basierenden ischämischen Präkon-ditionierung (IPC) scheinen microRNAs (miR) eine große Rolle zu spielen. Es konnte gezeigt werden, dass nach IPC die Expression verschiedener miRs in Rattenkardiomyozyten (RKM) verändert ist. Interessanterweise liegt bisher keine Studie zu möglichen Eff ekten der APC auf die Expression und Regulation von miRs vor. Ziel: Ziel dieser Arbeit ist es, zunächst ein geeignetes Modell zu etablieren, mit dem adulte RKM gewonnen werden können und anschließend die Eff ekte einer APC auf das Expressionsmuster von miRs zu untersuchen. Methoden: In einer modifi zierten Langendorff apparatur wird der RKM-Verband männlicher Wistar-Ratten enzymatisch und mechanisch aufgelöst. Anschließend werden die RKM isoliert, kultiviert und in zwei Gruppen aufgeteilt: Kontrolle: RKM werden 2,5h unter Standardzellkulturbedingungen (ZKB) inkubiert. APC: RKM werden 30 min mit 1,5% Isofl uran behandelt, anschließend 2h unter ZKB inkubiert. Nach Extraktion der Gesamt-RNA werden mit PCR-basierten Methoden VEGF-spezifi sche mRNA-Abschnitte semiquantifi - ziert. Ergebnisse: Die Zellisolierung wurde etabliert und optimiert. Bisherige Ergebnisse weisen auf eine Erhöhung der VEGF-spezifi schen mRNA-Expression bei Isofl uran-behandelten RKM hin. Schlussfolgerung: Unter Verwendung des etablierten Modells lassen sich adulte RKM kultivieren und präkonditionieren. Über qPCRs und miR-Arrays können die miR-Expressionsmuster nach APC untersucht werden. Quellen: Cason BA et al. Anesthesiology. 1997 Nov; 87(5):1182-90. Thirunavukkarasu M et al. Free Radic Biol Med. 2007 May 15;42(10):1487-95. Venugospal V et. Eur J Cardiothorac Surg 2009, 35:977-987. Brandenburger et al: Ischämische Fernpräkonditionierung des Herzens und frühe myokardiale Ischämie reduzieren die Expression der microRNA-1 in der Ratte. Klinik für Anästhesiologie, UKD, Salloum FN et al. 2010 Oct 26 ebd. 10 3.8 Hypothermie verbessert die Sauerstoff versorgung der Magenmukosa im hämorrhagischen Schock Meike Swertz, Christian Vollmer, Ingo Schwartges, Inge Bauer, Olaf Picker Experimentelle Anästhesiologie Einleitung: Im Rahmen eines hämorrhagischen Schocks kommt es u. a. im Splanchnikusgebiet zur Minderperfusion mit Abfall der mikrovaskulären Hämoglobinoxygenation (μHbO2) [1]. Da in dieser Situation eine Hypothermie zur funktionellen Erholung in verschiedenen Geweben wie Herz und Gehirn beiträgt [2,3], untersuchten wir die Frage, ob und in wieweit eine Hypothermie im hämorrhagischen Schock auch die μHbO2 der Magen- Darm-Mukosa beeinfl ussen kann. Methoden: Chronisch instrumentierte Hunde (n=5) wurden mit Genehmigung des Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz wiederholt anästhesiert (Sevofl uran) und in folgende Versuchsgruppen randomisiert: 1.) Normothermie + Normovolämie, 2.) Normothermie + Hypovolämie (den Hunden wurde 20 % des Blutvolumens entnommen) 3.) Hypothermie (34°C) + Normovolämie, 4.) Hypothermie + Hypovolämie. Die μHbO2 in Mund und Magen (Refl exionsspektrophotometrie) und die systemische Hämodynamik wurden kontinuierlich aufgezeichnet sowie Blutgasanalysen intermittierend durchgeführt. Ergebnisse: Die μHbO2 fi el im hämorrhagischen Schock von 77,1±2,0 auf 52,9±8,3% ab, begleitet von einem Abfall des Blutdrucks von 64,3±1,1 auf 51,9±1,2mmHg und des systemischen Sauerstoff angebotes (DO2) von 14,4±1,0 auf 8,3±0,3ml/kg/min. Nach Retransfusion erreichten alle Parameter wieder ihre Ausgangswerte. Bei gleichzeitiger Hypothermie war der Abfall der μHbO2 im Schock deutlich geringer (von 71,2±2,2 auf 65,3±5,2%), obwohl DO2 und Blutdruck ähnlich stark abfi elen wie unter Normothermie. Eine alleinige Hypothermie hingegen hatte keinen Einfl uss auf μHbO2 und Hämodynamik. Schlussfolgerung: Eine Hypothermie reduziert den Abfall der μHbO2 im hämorrhagischen Schock und könnte somit eine neue, zusätzliche Therapieoption darstellen. Im Gegensatz dazu scheint eine Hypothermie unter physiologischen Bedingungen keinen Einfl uss auf die μHbO2 zu haben. Literatur: [1] Schwartges et al 2010, [2]F.C. Ping and L.C. Jenkins 1978,[3]Giuseppe Ristagro et al 2009.
Seite 1 und 2: Heinrich-Heine-Universität Düssel
Seite 3 und 4: Sehr geehrte Damen und Herren, herz
Seite 5 und 6: Programm 17. Juni 2011, Hörsaal 13
Seite 7 und 8: Doktorandenkongress der Medical Res
Seite 13: Doktorandenkongress der Medical Res
Seite 23 und 24: Session 5 - Poster Klinische Studie

34 Seiten als pdf - MedRSD - Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?