Maria Kammerer - Universitätsklinikum Carl Gustav Carus

3.2.1.3. Schnitte
Am Mikrotom (Leica Jung RM 2065) erfolgte eine frontale Schnittführung mit 20µm dicken
Schnitten von caudal bis zum beginnenden OB. Wir kontrollierten dies regelmäßig mit dem
Mikroskop (Leitz-Biomed-Mikroskop). Im Zielgebiet fertigten wir zwischen 120 und 180
Serienschnitte von je 10µm Dicke. Diese wurden auf ein 55°C heißes Wasserbad
übertragen. Nach der Glättung zogen wir sie auf silanisierte Objektträger (Anhang:
Silanisierung) auf. Auf zwei folgende Objektträger (OT) kamen jeweils acht Serienschnitte für
die Immunmarkierung und auf den dritten OT zogen wir einen Kontrollschnitt für die
Hämalaunfärbung auf.
3.2.2. Färbung
3.2.2.1. Hämatoxylinfärbung
Jeder dritte OT mit einem Serienschnitt wurde mit Hämatoxylinfärbung (Anhang:
Hämalaunherstellung) gefärbt. Dies diente zur Sicherstellung der Qualität, so dass alle
quantitativ auszuwertenden Serienschnitte denselben Startpunkt hatten.
Zur Entparaffinierung tauchten wir die Schnitte dreimal je fünf Minuten in Xylol [C6H4(CH3)2].
Danach folgten Spülungen in der absteigenden Alkoholreihe bis zum Aqua dest. (dreimal
absoluter Alkohol, dreimal 96%iger Alkohol, einmal 70%iger und einmal 40%iger Alkohol, je
zwei Minuten). Nach einer nochmaligen Spülung in Aqua dest., wurden die OT in das
Hämatoxylin für zehn Minuten getaucht. Anschließend kamen sie für zehn Minuten in
Leitungswasser zum „bläuen“ und wurden durch Spülungen in der aufsteigenden
Alkoholreihe (1x 40%iger, 1x 70%iger, 3x 96%iger und 3x absolute Alkohol) entwässert.
Danach deckelten wir sie mit Depex (Serva Electrophorese GmbH; Heidelberg, Deutschland)
ein.
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