Zellbiologie & Imaging - Laborwelt

laborwelt 

Nr. 3 / 2008 – 9. Jahrgang 

Zellbiologie & Imaging 

Hochdurchsatz-Two Hybrid- 

Screening von Protein-Protein 

Interaktionen mit Zellarrays 

Marktübersicht: 

Cell-based Assays 

iTRAQ-Analyse der Caspasevermittelten 

Proteinsekretion 

in Säugerzellen 

Ein neues System für das 

automatisierte Screening 

von Ionenkanälen

Normalized Normalized Cell Index Cell Index 

Cells in Real-Time! 

5 

Cells in Real-Time! 

Control 

4 

12.5 �M Etoposide 

5 

3 

Control 25 �M Etoposide 

4 

Treatment 

12.5 �M Etoposide 

2 

3 

1 

Seed 

Cells 

Treatment 

25 �M Etoposide 


2 

Seed 

0 

Cells 

1 0 20 40 60 


50 �M Etoposide 80 

0 

Time (hours) 


0 20 40 

Time (hours) 

60 80 

xCELLigence Real-Time 

Cell xCELLigence Analyzer Real-Time System 

Cell Analyzer System 

RTCA SP InstrumentNEW 

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Greater Insight, True Understanding 

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Figure 1: Real-time monitoring of cytotoxicity 

through DNA damage. Etoposide is a DNA damaging 

agent Figure which 1: Real-time induces apoptosis monitoring in high of cytotoxicity concentrations, 

while through at lower DNA concentrations damage. Etoposide it leads is a to DNA S-Phase damaging and/or 

G2 agent arrest. which induces apoptosis in high concentrations, 

while at lower concentrations it leads to S-Phase and/or 

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Immer näher an 

„in vivo“… 

Einen ungeahnten Aufschwung erleben derzeit Ganzzelluntersuchungen, 

sogenannte cell-based Assays. Sage und schreibe 51 (!) Anbieter aus 

aller Welt hatten, kurz nachdem wir auf die aktuelle Marktübersicht 

„cell-based Assays“ hingewiesen hatten, Kontakt zur Redaktion gesucht. 

Das Thema trifft derzeit offenbar den Nerv. Denn komplementär zum 

klassischen biochemischen Endpunktassay versprechen die zellbasierten 

Tests mehr „in vivo“ – quasi einen Realitätstest der in vitro-Daten in 

einem lebendigen biologischen Modellsystem. 

Einem Realitätstest möchte sich gerne auch die Redaktion von 

LABORWELT unterziehen, um die Zeitschrift möglichst nah an den 

Bedürfnissen von Ihnen, lieber Leser, zu orientieren: durch eine Leserumfrage. 

Für Ihre Anregungen gibt es natürlich auch eine kleine 

Belohnung. Gewinnen Sie einen iPOD Nano. Näheres erfahren Sie auf 

dem Fragebogen, der dieser Ausgabe von LABORWELT beiliegt. Sollte 

Ihnen dieser abhanden gekommen sein, mailen Sie uns einfach unter 

laborwelt@biocom.de – wir senden Ihnen die sechs Fragen dann rasch 

zu. Wir freuen uns, LABORWELT noch näher an „in vivo“-Bedingungen 

– nämlich Ihren Bedürfnissen – zu orientieren. 

„In vivo“ ist auch das Thema dieser Ausgabe. Angesichts des Auftauchens 

einer Nachfolgefirma der gescheiterten Würzburger TeGenero 

AG wirft der „Ex-Würzburger“ Prof. Dr. Holger Reichhardt einen Blick 

auf die Forschungsfortschritte seit dem gescheiterten Erstversuch am 

Menschen mit TGN1412, dem CD28-Superagonisten von TeGenero. Unternehmensschwerpunkt 

des Nachfolgers TheraMAB werden übrigens 

molekulardiagnostische Dienstleistungen sein. Die in ein universitäres 

Setting eingebettete Forschung an TGN1412 ist nur ein – wenn auch 

hochinteressanter – Nebenkriegsschauplatz. Daneben gibt es in dieser 

Themenausgabe Aktuelles aus Asssayentwicklung, Ionenkanalscreening, 

der klinischen Krebs-, Haut- und Atheroskleroseforschung etc., 

etc. – Viel Lesevergnügen! 

Thomas Gabrielczyk 

In diesem Heft 

Marktübersicht: Cell-based Assays 

Sie messen die Wirkung von si- und miRNAs, die Induktion 

der Apoptose, zytotoxische Wirkungen und viele andere 

biologische Phänomene an lebenden Zellen. Darin sehen viele 

einen Vorteil der zellbasierten Assays gegenüber biochemischen 

Endpunktbestimmungen. Der Markt für immer neue Testsysteme 

und die benötigte Hardware boomt, denn die Nutzer kommen 

sowohl aus der Academia als auch aus Firmen (ab Seite 43). 

Editorial | Inhalt 

Titel: Zellbiologie & Imaging 

Rasterelektronenmikroskopische Aufnahme gegen 

Krebsantigene aktivierter T-Lymphocyten (orange) bei 

der Attacke einer Krebszelle. 

Foto: © Steve Gschmeissner - Science Photo Library 

LABORWElT 9. Jahrgang | Nr. 3/2008 | 3 

Inhalt 

Leserforum Statement 

4 Wechselwirkung: Politik und Stammzellforschung 

Prof. Dr. Anthony Ho, Medizinische Klinik V, Universität Heidelberg 

Wissenschaft Translationale Medizin 

6 MIF: ein neuer Protagonist in der Atherosklerose 

Prof. Dr. Christian Weber et al., Klinikum der RWTH Aachen 

Blitzlicht In-vivo-Imaging 

10 Echtzeit-Tumoranalyse mit rot fluoreszierenden Proteinen 

Prof. Dr. Christian Petzelt, MARINPHARM GmbH, Luckenwalde 

Blitzlicht Zellkultur 

12 Serumfreie Langzeitkultur humaner Hepatozyten 

Dr. Dieter Runge et al., PRIMACYT Cell Culture Technology GmbH, Schwerin 

Report Tiermodelle 

14 Mausmodelle: Therapie-Entwicklung für Epidermolysis bullosa 

Dr. Anja Fritsch. Prof Dr. Leena Bruckner-Tuderman et al., 

Universitäts-Hautklinik Freiburg 

Report Immunbiologie 

18 Tregs, Autoimmunität und CD28-superagonistische Antikörper 

Prof. Dr. Holger M. Reichardt et al., Universitätsmedizin Göttingen 

Blitzlicht Zell-basierte Assays 

24 Gelbasierte Angiogenese-Assays 

Dr. Ulf Rädler et al., ibidi GmbH, Martinsried 

Blitzlicht Hochdurchsatzanalyse 

27 Zellarrays zur Hochdurchsatzanalyse von Proteininteraktionen 

Dr. Andrea Fiebitz et al., MPI für molekulare Genetik, Berlin 

Blitzlicht Proteomics/Zellbiologie 

34 iTRAQ: Identifikation unkonventionell sekretierter Proteine 

Dr. Martin Keller; Dr. Hans-Dietmar Beer, Institut für Zellbiologie, ETH Zürich 

Blitzlicht Krebs 

37 Verstärkung der Chemosensitivität von Tumorzellen 

Prof. Dr. Rudolf Fahrig, RESprotect GmbH, Dresden 

Blitzlicht Screening 

39 Ionenkanalscreening auf den Kopf gestellt 

Dr. Dirck Lassen et al., Flyion GmbH, Tübingen 

Service Marktübersicht 

43 Cell-based Assays 

59 Verbände 

60 Stellenmarkt 

66 Produktwelt 

69 Termine 

70 Ausblick/Impressum

Statement 

Wechselwirkung: Politik 

und Stammzellforschung 

Prof. Dr. Anthony Ho, Ärztlicher Direktor der Medizinischen Klinik V, Universität Heidelberg 

Mit Erleichterung nehmen viele deutsche 

Wissenschaftler das Abstimmungsergebnis im 

Bundestag vom 11.4.08 auf. 346 Abgeordnete des 

Bundestages stimmten für und 228 Abgeordnete 

gegen eine Verschiebung des Stichtages für den 

Import humaner embryonaler Stammzellen aus 

dem Ausland auf den 1. Mai 2007. Denjenigen 

Abgeordneten, die zugestimmt haben, gebührt 

unser Dank. Die Gegner der embryonalen 

Stammzellforschung verdienen allerdings genauso 

viel Respekt und Dank dafür, dass sie uns alle 

zum Nachdenken angeregt haben, insbesondere 

was die Wahrung des Lebensschutzes und die 

Menschenwürde anbelangt. 

Das Stammzellgesetz vom Juni 2002 hat 

deutschen Wissenschaftlern ermöglicht, humane 

embryonale Stammzellen für hochrangige 

Forschungsarbeiten aus dem Ausland zu importieren, 

sofern die Zelllinien vor dem 1. Januar 

2002 etabliert worden waren. Seitdem wurde 

allerdings die Technik der Stammzellgewinnung 

so erheblich verbessert, dass die vor dem Stichtag 

etablierten Zelllinien für die Spitzenforschung 

inzwischen nicht mehr ausreichen. 

Polarisierte Debatte 

„Für die Forschung an embryonalen Stammzellen 

muss ungeborenes, menschliches Leben 

getötet werden!“, behaupteten beharrlich die 

Gegner der Erforschung humaner embryonaler 

Stammzellen. Dabei haben sie vergessen, dass 

beim Prozess der künstlichen Befruchtung 

mehrere Eizellen gleichzeitig befruchtet 

werden müssen, da die Erfolgschance bei der 

Befruchtung und Implantation nur einer gesunden 

Eizelle ein gesundes Kind austragen zu 

können, etwa 25 bis 30% beträgt. Im Ausland, 

aber auch in der Bundesrepublik sind dadurch 

eine große Zahl überzähliger Embryonen 

entstanden – in den USA zum Beispiel gibt es 

mehr als 400.000 tiefgefrorene Embryonen 

–, die nach einer gewissen Zeit „entsorgt“ 

werden. Fast alle gebräuchlichen humanen 

embryonalen Stammzelllinien stammen aus 

eben solchen überzähligen Embryonen, die bei 

der künstlichen Befruchtung erzeugt wurden 

und die – statt sie zu „entsorgen“ – von den 

Eltern für die Forschung gespendet wurden, 

nachdem die künstliche Befruchtung erfolgreich 

abgeschlossen war. 

Das Ergebnis der Abstimmung im Bundestag 

Mitte April hat eine weitreichende Signalwirkung 

für die deutsche Wissenschaft: Es zeigt 

dass Spitzenforschung in Deutschland wieder 

möglich ist, dass Lebensforschung an Stellenwert 

gewonnen hat, dass die Wissenschaft das 

Vertrauen der Politik und der Gesellschaft wieder 

genießt und dass die Wissenschaftler dazu 

fähig sind, gute Forschung so verständlich in 

die Öffentlichkeit zu transportieren, dass am 

Ende Vernunft und Sachlichkeit walten. 

Verantwortungsbewusste Forschung 

Es herrscht auch Einigkeit darüber – sowohl 

bei den Befürwortern als auch den Gegnern 

der embryonalen Stammzellforschung –, dass 

Embry onen nur für das menschliche Leben 

erzeugt werden sollen und dass menschliches 

Leben nicht instrumentalisiert werden darf. 

Viele – sowohl Befürworter als auch Gegner – 

haben in dem Diskursprozess einen noch nie 

dagewesenen, tiefgreifenden Dialog geführt 

und ein gewisses Verständnis für die jeweils 

andere Position gewonnen. Auch das Ausland 

verfolgte mit enormer Spannung, ob man uns 

als „Land der Ideen und Innovationen“ ernst 

nehmen kann und will. Andere Länder wie Großbritannien, 

Frankreich, Schweden, Dänemark, 

Finnland, die Niederlande, Belgien, Spanien und 

Tschechien lassen die embryonale Stammzellforschung 

in großem Umfang zu und fassen 

deren Grenzen viel weiter als Deutschland. In 

diesen europäischen Staaten, die ebenfalls in 

der christlichen Tradition verwurzelt sind, ist 

eine sorgfältige ethische Wertung der Stammzellforschung 

erfolgt, von der sich Deutschland 

bisher abgekoppelt hat. Die Abstimmung vom 11. 

April hat verhindert, unser Land wissenschaftlich 

eine Insel in Europa werden zu lassen. 

Übertreibungen meiden 

Jedoch sollen wir uns davor hüten, verfrühte 

Hoffnungen auf Therapien mit embryonalen 

Stammzellen zu wecken – wie bereits vor einigen 

Jahren geschehen. Aktuelle Ergebnisse 

amerikanischer und japanischer Forschungsgruppen 

an tierischen und humanen embryonalen 

Stammzellen haben die vier genetischen 

Faktoren identifiziert, die für die „Verjüngung“ 

einer Körperzelle verantwortlich sind. Dieser 

Erfolg war nach Aussage der Forscher nur auf 

Grundlage der Parallelforschung an humanen 

embryonalen und adulten Stammzellen 

möglich. Durch Einschleusen dieser vier Gene 

in Fibroblasten (Reprogrammierung) wurden 

Zellen gewonnen, die teils Eigenschaften 

Vita... 

Prof. Dr. med. Anthony D. Ho ist seit 1998 

Ordinarius und Ärztlicher Direktor der 

Medizinischen Klinik V (Schwerpunkte: Hämatologie, 

Onkologie und Rheumatologie) 

der Universität Heidelberg. Mit Blutstammzellforschung 

befasst er sich seit 1990 und 

war als Abteilungsleiter an der University 

of Ottawa, Canada, und an der University 

of California, San Diego, USA, tätig. Im Juli 

2002 wurde er als Mitglied der Zentralen 

Ethikkommission für Stammzellforschung 

des Robert-Koch-Instituts in Berlin bestellt. 

Seine spezielle Expertise besteht in der 

Blutstammzelltransplantation und der 

Therapie bei Leukämien und Lymphomen. 

Die Mechanismen der Steuerung von 

Stammzelleigenschaften, Selbsterneuerung 

und Differenzierung sowie die Wechselwirkung 

zwischen Stammzellen und 

ihren Nischen stellen die Schwerpunkte 

seiner Laborforschung dar. 

embryonaler Stammzellen haben (induzierte 

pluripotente Stammzellen).Ob und wann diese 

reprogrammierten Zellen in der Medizin eingesetzt 

werden können, ist noch nicht abzusehen. 

Derzeit werden die erforderlichen Reprogrammierungsfaktoren 

über Viren eingeschleust, die 

genetische Störungen in den Zellen hervorrufen 

können. Zudem sind unter den verwendeten 

Faktoren auch Onkogene, die tumorauslösend 

wirken können. 

Gerade um diese Schlüsselprobleme zu überwinden, 

ist die Forschung an humanen embryonalen 

Stammzellen essentiell. Insbesondere 

müssen die molekularen Steuerungsmechanismen 

embryonaler Stammzellen verstanden und 

auf adulte Zellen übertragen werden. Insofern 

stellt die Forschung an embryonalen Stammzellen 

eine sehr wichtige Grundlage für die Weiterentwicklung 

der adulten Stammzellforschung 

dar. Auch bei adulten Stammzellen hat es 20 

Jahre gedauert, bis erste Forschungsergebnisse 

zu klinischen Erfolgen geführt haben. Das 

deutsche Stammzellgesetz wurde im Juli 2002 

verabschiedet. Nach nur fünf Jahren ist eine 

klinische Umsetzung von Forschungsergebnissen 

nicht denkbar. Es muss noch sehr viel mehr 

Grundlagenforschung betrieben werden, bevor 

eine Umsetzung der Erkenntnisse in Therapien 

für die Klinik münden. 

4 | 9. Jahrgang | Nr. 3/2008 LABORWElT

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MIF – neuer Protagonist 

in der Atherosklerose 

Dipl.-Biol. Regina Krohn, Prof. Dr. rer. nat. Jürgen Bernhagen, Prof. Dr. med. Christian Weber, 

Institut für Molekulare Herz-Kreislaufforschung und Institut für Biochemie, 

Universitätsklinikum der RWTH Aachen 

Der Makrophagen-Migrations-Inhibitions-Faktor MIF spielt eine wichtige Rolle bei Entzündungserkrankungen 

wie der Atherogenese. Kürzlich wurden neben dem bekannten MIF-Rezeptor CD74 die 

beiden CXC-Chemokin-Rezeptoren CXCR2 und CXCR4 als funktionelle Rezeptoren für MIF identifiziert. 

Die MIF-vermittelte Adhäsion und Chemotaxis von Monozyten und T-Zellen erfolgt spezifisch 

durch CXCR2, CXCR4 und CD74. Dabei induzierte MIF eine schnelle Integrin aktivierung und Kalzium- 

Mobilisierung. Kompetitionsstudien mit bekannten CXCR2/CXCR4-Liganden bestätigten die Interaktion 

von MIF mit diesen Rezeptoren. Darüber hinaus wurden anhand von Co-Immunpräzipitationen 

und mittels konfokaler Mikroskopie die direkte Bindung von MIF an CXCR2 und das Vorhandensein 

eines CXCR2/CD74-Rezeptorkomplexes nachgewiesen. In Atherosklerose-anfälligen Mäusen verhinderte 

MIF-Defizienz den Monozytenarrest an der Aorta-/Arterienwand und CXCR2-Defizienz 

die MIF-induzierte Leukozytenadhäsion. MIF-Blockade in Mäusen mit fortgeschrittener Atherosklerose 

führte zu einer Regression der Plaquefläche und zu einem stabileren Plaquephänotypen. 

Die neu gewonnenen Erkenntnisse über MIF als Regulator der inflammatorischen Zellrekrutierung 

und Atherogenese machen das Protein zu einem vielversprechenden therapeutischen Ziel bei der 

Behandlung von Patienten mit manifester Atherosklerose. 

Die Systemkrankheit Atherosklerose und 

ihre klinischen Folgen – wie etwa die Koronare 

Herzkrankheit, Periphere Arterielle 

Verschlusskrankheit und Schlaganfall – ist 

derzeit die häufigste Erkrankung mit Todesfolge 

in den entwickelten Ländern 1 . Die 

Atherosklerose ist eine chronische Entzündungskrankheit 

der Arterienwand, in deren 

Verlauf sich immunkompetente Blutzellen 

unterhalb des Endothels der Arterienwand 

anlagern. Diese sezernieren Zytokine und 

spezifische Chemokine, welche wiederum 

Abb. 2: MIF-Signaltransduktion über einen funktionellen Rezeptorkomplex. Extrazelluläres 

MIF bindet an das Oberflächenprotein CD74 ohne intrazelluläre Signaldomäne, 

kann so über das Proteoglykan CD44 Rezeptorkinasen (RTK) der Src-Familie, MAPK/ 

ERK-Kinasen und den PI3K/Akt-Signalweg aktivieren oder p53-abhängig die Apoptose 

inhibieren. MIF bindet und aktiviert die G-Protein-gekoppelten Chemokinrezeptoren 

(GPCR) CXCR2 und CXCR4 und ihre Signalwege. Komplexbildung von 

CXCR2 mit CD74 kann die GPCR-Aktivierung und Bildung eines GPCR-RTK-artigen 

Signalkomplexes erleichtern, welcher einen Calcium-Influx und eine schnelle Integrinaktivierung 

vermittelt. Nach Endozytose kann MIF mit JAB-1 interagieren und so 

MAPK-Signale hemmen und die AP-1-Aktivität modulieren. 

Abb. 1: Dreidimensionale Darstellung des 

MIF-Trimers 

atherogene Leukozyten zum Entzündungsherd 

rekrutieren und durch Aktivierung von 

Integrinen deren Adhäsion an die Arterienwand 

bewirken. So entsteht nach und nach 

ein sogenannter Plaque, der hauptsächlich 

aus fettbeladenen Makrophagen, aus Leukozyten, 

aber auch glatten Muskelzellen 

besteht. Bei fortschreitender Erkrankung 

entsteht ein komplexes, fibröses Atherom, 

welches instabil werden und – durch noch 

nicht aufgeklärte Mechanismen – aufbrechen 

kann. Die nachfolgende Thrombusbildung 

resultiert in einem Arterienverschluss, der 

akute klinische Effekte, wie Herzinfarkt oder 

Schlaganfall, zur Folge hat 2 . 

MIF ist als Entzündungsmediator 

an der Atherogenese beteiligt 

Vor etwa 40 Jahren wurde das Zytokin MIF im 

Zusammenhang mit der Spättyp-Hypersensitivität 

als ein von aktivierten T-Zellen produzierter 

Inhibitor der ungerichteten Migration 

von Makrophagen entdeckt 3,4 . Später ergab 

eine genauere Untersuchung, dass vor allem 

Monozyten/Makrophagen MIF produzieren 5 . 

In den darauffolgenden Jahren belegten 

immer mehr Studien die proinflammatorischen 

Eigenschaften von MIF, zum Beispiel 

als Gegenspieler von Glucocorticoiden, und 

dessen Beteiligung an verschiedenen Autoimmunerkrankungen, 

wie etwa der Rheumatoiden 

Arthritis 6,7 . Zudem wurde anhand 

eines Ratten-Modells der immun induzierten 

Glomerulonephritis gezeigt, dass MIF, wie 

ein Chemokin, die Leukozytenrekrutierung 

stimuliert 8 . 

Neuere Forschungsergebnisse deuten 

auf eine wichtige Rolle von MIF in der 

Atherosklerose hin. Im hyperlipidemischen 

Mausmodell führte die Behandlung mit 

einem MIF-blockierenden Antikörper nach 

drahtvermittelter Denudation der Arteria 

carotis zu einer signifikanten Abnahme des 

Makrophagen- und Schaumzellengehaltes 

in den neointimalen Läsionen. Gleichzeitig 



Abb. 3: Konfokale Mikroskopie der Co-Lokalisation von CXCR2 und CD74 (Overlay: gelborange) 

in RAW264.7-CXCR2-Transfektanten. © Bernhagen et al. Nat. Med. 13, 587-596 

(2007) 

war der Gehalt an glatten Muskelzellen und 

fibrillärem Kollagen erhöht, was einem stabileren 

Plaque-Phänotypen entsprach. Als 

zugrundeliegenden Mechanismus entdeckten 

die Autoren die MIF-vermittelte Adhäsion von 

Monozyten an Endothelzellen 9 . Danach ist 

nach MIF-Blockade eine Reduktion der Makrophagenanzahl 

in der Aortawand von Apoe –/– - 

Mäusen zu beobachteten. Hinzu kommt eine 

Inhibition mehrerer Entzündungsmediatoren, 

darunter Matrixmetalloproteinase (MMP)-2 

und Tumornekrosefaktor (TNF) 10 . 

MIF-Effekte werden über einen 

Rezeptor-Kinase-Komplex ausgelöst 

Humanes MIF hat ein Molekulargewicht von 

12,34 kDa und weist eine 90%ige Homologie 

zu murinem MIF auf. Die Röntgenstrukturanalyse 

von MIF ergab ein Trimer. Die drei 

identischen Untereinheiten formen ein ringförmiges 

Protein mit einem hydrophoben 

Kanal, dessen Funktion allerdings noch nicht 

bekannt ist (Abb. 1). Einer Studie zufolge, in der 

Gelfiltration und ‚Cross-linking’-Experimente 

durchgeführt wurden, tritt MIF in physiologischer 

Lösung als Monomer und als Dimer 

auf, die trimere Form kommt dagegen eher 

seltener vor 11 . Für MIF wurden sowohl eine 

Tautomerase- als auch eine Thiolprotein- 

Oxidoreduktaseaktivität beschrieben. Allerdings 

konnte diesen enzymatischen Aktiviäten 

bisher keine physiologische Bedeutung 

zugeordnet werden. Abgesehen von seiner 

besonderen Struktur weist das MIF-Monomer 

eine auffällige Ähnlichkeit mit dem Dimer des 

CXC-Chemokins Interleukin 8 (IL-8) auf, einem 

Chemokin, das maßgeblich an der Progression 

der Atherosklerose beteiligt ist. 

Als erster cytoplasmatischer Interaktionspartner 

von MIF wurde das Jab1 (C-Jun 

activation domain binding protein-1) mittels 

Yeast-Two-Hybrid-Screening entdeckt 12 , eine 

Untereinheit des COP-9-Signalosoms. Durch 

die Bindung von MIF an Jab1 wird die Aktivierung 

der AP-1-vermittelten Genexpression 

und die Degradation von p27kip1 verhindert 

und so die Zellwachstumsinduktion blockiert 

(Abb. 2). Andererseits inhibiert MIF die p53vermittelte 

Apoptose. Diese Inhibition ist 

Cyclooxygenase (Cox)-2-abhängig 13 , deren 

Expression wiederum von AP-1 induziert wird. 

MIF könnte hier also auch die AP-1-vermittelte 

Expression von Cox-2 fördern, indem es an 

Jab1 bindet. 

CD74, die MHC-Klasse-II-assoziierte invariante 

Kette, wurde als erster Zelloberflächen- 

Rezeptor für MIF identifiziert. Es wurde 

gezeigt, dass die MIF/CD74-Interaktion eine 

Aktivierung der ERK1/2/MAPK-Signaltransduktionskette 

zur Folge hat (Abb. 2). Die Studien 

der letzten zwei Jahre trugen wesentlich zur 

Aufklärung der MIF/CD74-Signalwege bei. Die 

Autoren schlugen einen MIF/CD74-Signalkomplex 

vor, der über die Kopplung an das Proteoglykan 

CD44 und eine Tyrosin-Kinase der Src- 

Familie die Induktion der Apoptose blockieren 

Abb. 4: Blockade von MIF führte zur Regression und Stabilisierung von fortgeschrittenen 

atherosklerotischen Plaques. Nach 12 Wochen fettreicher Diät wurden Apoe –|– -Mäuse 

zusätzliche vier Wochen mit blockierenden Antikörpern oder Puffer (Kontrolle) behandelt. 

A. Oil-Red-O-Färbung der Aortenwurzeln; B. Datenpunkte repräsentieren die 

Plaquefläche nach 12 bzw. 16 Wochen; © Bernhagen et al. Nat. Med. 13, 587-596 (2007) 

kann, indem der Phospho-Inositid-3-Kinase 

(PI3K)/Akt-Weg aktiviert wird oder auch p53 

inhibiert wird 14,15 . Es bedarf noch der Klärung, 

ob CD74 die MIF-Internalisierung und/oder 

die Interaktion mit Jab1 ermöglicht. 

Der CXC-Rezeptorligand MIF vermittelt 

inflammatorische Zellrekrutierung 

Da nicht alle Zellen, auf die MIF wirkt (z.B 

Neutrophile und Fibroblasten), CD74 auf ihrer 

Oberfläche exprimieren, lag die Annahme 

nahe, dass mindestens ein zusätzlicher Rezeptor 

am MIF-Wirkmechanismus beteiligt ist. 

Unter Berücksichtigung der chemokinartigen 

Wirkweise von MIF und seiner strukturellen 

Ähnlichkeit mit dem IL-8-Dimer wurde vermutet, 

dass es sich um einen Chemokin-Rezeptor 

handeln müsste. 

Tatsächlich konnten kürzlich die Rezeptoren 

für die CXC-Chemokine IL-8 und SDF-1a, 

CXCR2 und CXCR4 als funktionelle Rezeptoren 

für MIF identifiziert werden 16 . 

In vitro-Adhäsionsversuche in einer laminaren 

Flusskammer zeigten, dass MIF einen 

Integrin-abhängigen Leukozytenarrest auf 

Endothelzellen direkt durch CXCR2 und – zu einem 

geringeren Ausmaß – durch CXCR4 sowie 

durch den zuvor beschriebenen MIF-Rezeptor 

CD74 bewirkte. Durch Expressionsanalysen 

und die Anwendung blockierender Antikörper 

konnte eine Beteiligung der CXC-Chemokine 

IL-8 und SDF-1a ausgeschlossen werden. Auch 

die MIF-induzierte Leukozyten-Chemotaxis 

wurde durch CXCR2 und CXCR4 vermittelt, 

und Kompetitionsstudien mit radioaktiv 

markiertem IL-8 und SDF-1a zeigten die Interaktion 

von MIF mit diesen Rezeptoren. Letztendlich 

belegten Co-Immunpräzipitations- 

Experimente und konfokale Mikroskopie die 

Existenz eines CD74/CXCR2-Rezeptorkomplexes 

(Abb. 3) sowie die direkte Interaktion 

von MIF mit CXCR2. Erstaunlicherweise 

bewirkte MIF eine rapide CXCR2-abhängige 

Calcium-Mobilisierung in Neutrophilen. 

Dies bedeutet, dass die Ca 2+ -Mobilisierung 

nicht die Kooperation von CD74 erfordert, 

da Neutrophile dieses Zelloberflächenprotein 

nicht exprimieren. Des Weiteren konnte die 

direkte Aktivierung des Integrins aLb2 durch 

MIF auf der Monozytenzelllinie MonoMac6 

und auf primären Monozyten anhand eines 

Antikörpers gegen die aktive Konformation 

von aLb2 nachgewiesen werden. 

Anhand von Adhäsionsversuchen in explantierten 

Mauskarotiden wurden ex vivo 

Beweise für die Beteiligung von CXCR2 an 

der MIF-induzierten Zellrekrutierung erbracht. 

Die Applikation von blockierenden 

Antikörpern gegen CD74, CXCR2 oder MIF 

führte gleichermaßen zu einer Reduktion 

der adhärenten Monozyten. Mittels Intravitalmikroskopie 

wurde auch in vivo die Rolle 

von CXCR2 dokumentiert. Im Modell der induzierten 

Peritonitis wurden MIF-Wildtyp 


und MIF-Knock-out-Mäuse mit CXCR2-Knockout-Knochenmark 

rekonstituiert. Dies führte 

bei den Wildtyp-Mäusen zu einer starken 

Abnahme der inflammatorischen Neutrophileninfiltration, 

während Transplantation 

von Cxcr2 –/– -Knochenmark in MIF-defizienten 

Mäusen zu keiner weiteren Abnahme der 

Zellrekrutierung führte. 

MIF-Blockade führt zu Regression und 

stabilisiert fortgeschrittene Plaques 

Die Rolle von CXCR2 bei der Atherogenese 

wurde bereits beschrieben 17 . Die Autoren beobachteten 

bei CXCR2-Deletion eine stärkere 

Abnahme der Atherosklerose in LDL-Rezeptor- 

Knock-out-Mäusen als bei der Deletion des 

Liganden KC/Gro-a. Es musste also noch ein 

anderer Faktor, wenigstens teilweise für die 

CXCR2-vermittelte Plaquebildung verantwortlich 

sein. Versuche zur Atherosklerose- 

Regression belegten, dass MIF der gesuchte 

CXCR2-Ligand ist und einen erheblichen 

Einfluss auf die Plaquegröße und Komposition 

in der fortgeschrittenen Atherosklerose hat. 

Hierzu wurden Apoe –/– -Mäuse 12 Wochen lang 

auf eine fettreiche Diät gesetzt und anschließend 

weitere vier Wochen mit Antikörpern 

gegen die bekannten murinen CXCR2- und 

CXCR4-Liganden, KC- und SDF-1a sowie gegen 

den neuentdeckten Liganden MIF behandelt. 

Die MIF-Antikörper-Behandlung führte zu 

einer signifikanten Reduktion der Läsionen im 

Vergleich zu unbehandelten Mäusen. Darüber 

hinaus war die Läsionenfläche im Vergleich 

mit den Kontrollmäusen 12 Wochen nach der 

Antikörperbehandlung signifikant reduziert 

(Abb. 4). Zudem waren der Makrophagen- und 

T-Zell-Gehalt erniedrigt, was für eine Stabilisierung 

des Atheroms spricht. 

Fazit 

MIF ist ein funktioneller Ligand von CXC- 

Chemokin-Rezeptoren und bindet direkt an 

den IL-8-Rezeptor CXCR2, der einen Rezeptor- 

Komplex mit CD74 bildet. Sobald MIF mit 

CXCR2 und/oder CXCR4 interagiert, wirkt es 

in einer chemokinartigen Weise und repräsentiert 

so eine neue Gruppe von Chemokinen, 

die CLF (Chemokine-like-funcion)-Chemokine. 

MIF fördert die inflammatorische Leukozytenrekrutierung 

durch CXCR2 und von T-Zellen 

durch CXCR4. Darüber hinaus konnte für den 

Krankheitsverlauf der Atherosklerose eine 

enge Kooperation von MIF und CXCR2 nachgewiesen 

werden. Die neuesten Erkenntnisse 

über MIF machen dieses Protein zu einem 

wichtigen neuen therapeutischen Ziel bei 

der Behandlung von Atherosklerose. Die Blockade 

des MIF-Effektes, zum Beispiel durch 

Peptid-Antagonisten, könnte bei Patienten 


mit manifester Atherosklerose zu einem 

Rückgang der Krankheit und zur Stabilisierung 

von Plaques führen. 

Literatur 

[1] Libby, P., Nature 420, 868-874 (2002). 

[2] Hansson, G.K. New Engl J Med 352, 1685-1695 (2005). 

[3] Bloom, B.R. & Bennett, B., Science 153, 80-82 (1966). 

[4] David, J.R., Proc Natl Acad Sci U S A 56, 72-77 (1966). 

[5] Bernhagen, J., et al., J Exp Med 183, 277-282 (1996). 

[6] Calandra, T. & Bucala, R., J Inflamm 47, 39-51 (1995). 

[7] Leech, M., et al. , Arthritis Rheum 42, 1601-1608 (1999). 

[8] Lan, H.Y., et al. J Exp Med 185, 1455-1465 (1997). 

[9] Schober, A., et al., Circulation 109, 380-385 (2004). 

[10] Burger-Kentischer, A., et al., Atherosclerosis 184, 28-38 (2006). 

[11] Mischke, R., et al., FEBS Lett 427, 85-90 (1998). 

[12] Kleemann, R., et al., Nature 408, 211-216 (2000). 

[13] Mitchell, R.A., et al., Proc Natl Acad Sci USA 99, 345-350 

(2002). 

[14] Shi, X., et al., Immunity 25, 595-606 (2006). 

[15] Lue, H., et al., Oncogene 26, 5046-5059 (2007). 

[16] Bernhagen, J., et al., Nat Med 13, 587-596 (2007). 

[17] Boisvert, W.A., et al., Am J Pathol 168, 1385-1395 (2006). 

Korrespondenzadresse 

Univ.-Prof. Dr. med. Christian Weber 

Inst. f. Molekulare Herz-Kreislaufforschung 

Universitätsklinikum Aachen 

Pauwelsstr. 30, 52074 Aachen 

Tel.: +49-(0)241-80-88692 

Fax: +49-(0)241-80-82716 

cweber@ukaachen.de 

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Blitzlicht In vivo-Imaging 

Rot fluoreszierende Zellen 

zur Echtzeit-Tumoranalyse 

in lebenden Tieren 

Prof. Dr. Christian Petzelt; MARINPHARM GmbH, Luckenwalde 

Um tieferliegende Tiergewebe visualisieren zu können, ist ein optisches Fenster im nahen Infrarot 

vorteilhaft. Ein neues, pH-stabiles, hell leuchtendes und langzeitstabiles, monomeres 

rot fluoreszierendes Protein, das mit einer Wellenlänge von 635 nm emittiert, wurde jetzt 

stabil in 20 Krebszelllinien transfiziert und eignet sich hervorragend für die Proteinlokalisierung 

im lebenden Tier sowie für Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer(FRET)-Experimente. 

Die lange Fluoreszenz-Lebenszeit des TagRFP, das durch gezielte Mutagenese der für die 

Dimerisierung von hellleuchtenden Protein-Sequenzen erhalten wurde, prädestiniert es 

für einen Einsatz in der präklinischen Medikamentenentwicklung. 

A B 

Rot fluoreszierende Melanom-Zellen (A) und rot fluoreszierende Mikrotubuli in Osteosarkom-Zellen 

(B) 

Lebende Zellen in einem Versuchstier zu 

erkennen und zu beobachten, war schon 

immer ein Traum und gleichzeitig eine Herausforderung 

für die Wissenschaft. Um zum 

Beispiel in präklinischen Versuchen neuartige 

Substanzen für die Tumortherapie zu testen, 

werden geeignete Tumore in den Versuchstieren 

erzeugt, indem Krebszellen in das Tier 

injiziert werden, die dann sich zu Tumoren 

entwickeln, welche zahlreiche Eigenschaften 

echter Tumore zeigen. In Mäusen mit einem 

supprimierten Immunsystem können sogar 

durch Injektion menschlicher Tumorzellen 

menschliche Tumore erzeugt werden. Aber wie 

werden mögliche therapeutische Effekte einer 

neuen Substanz analysiert? Heute werden 

meist noch die gleichen analytischen Methoden 

wie vor 50 Jahren eingesetzt: Entweder das 

Tumorwachstum wird visuell – der Tumor wird 

gemessen – oder mit histologischen Methoden 

verfolgt – wobei das Tier für die Analyse getötet 

werden muss. 

Die Entdeckung fluoreszierender Proteine und 

die Möglichkeit, ihre Gene in lebende Zellen einzuschleusen, 

haben unsere Analysemethoden 

komplett verändert. Das Grün Fluoreszierende 

Protein (GFP) wird jetzt vielfach eingesetzt, 

um lebende Zellen zu markieren. Wenn solche 

grün fluoreszierenden Zellen in ein Tier injiziert 

werden, sind sie direkt in Echtzeit zu „sehen“, 

vorausgesetzt die Zellen bleiben an der Oberfläche 

des Tieres. Diese extrem einengende 

Beschränkung beruht darauf, dass die Reichweite 

des emittierten Fluoreszenzsignals direkt 

proportional zu seiner Emissions-Wellenlänge 

ist – oder in anderen Worten: je länger die Wellenlänge 

des emittierten Lichtes, desto tiefer in 

das Tier lässt sich „blicken“. 

Vor wenigen Monaten gelang Wissenschaftlern 

der russischen Firma Evrogen JSC (Moskau) 

ein entscheidender Durchbruch. Sie entdeckten 

ein rot fluoreszierendes Protein mit einer Emission 

bei 635 nm, also beinahe im infraroten Bereich, 

das sich ideal zur Zellmarkierung eignet 1 . 

Marinpharm als der Lizenzpartner von Evrogen 

JSC (Moskau) ist seit einigen Jahren weltweit 

die einzige Firma, die die DNA solcher Proteine 

verwendet, um stabil transfizierte Zell-Linien zu 

generieren, die diese Fluoreszenzeigenschaften 

permanent aufweisen. 

Leuchtende Krebszelllinien 

Tatsächlich gelang es nur wenige Monate nach 

der Publikation 1 des neuen rot fluoreszierenden 

Proteins mehr als 20 menschliche Tumor-Zell- 

Linien herzustellen, die das Protein exprimieren. 

Damit sind ideale Werkzeuge für das in-vivo- 

Imaging geschaffen. Unter ihnen sind mehrere 

metastasierende und nicht-metastasierende 

Melanom-Zell-Linien besonders attraktiv für 

präklinische Tests (Abb. 1 A). Diese ermöglichen 

es erstmals, im lebenden Tier nicht nur die 

fluoreszierenden Zellen an der Oberfläche zu 

verfolgen, sondern sogar in Organen kleine 

Gruppen von Tumorzellen zu lokalisieren, die 

deren Invasion erfolgreich durchgeführt haben. 

Niemals zuvor war dies mit einer so hohen Auflösung 

und Genauigkeit möglich. Dadurch wird 

jetzt sowohl die Invasion eines Tumors als auch 

die Bildung von Metastasen in Echtzeit im Tier 

verfolgbar. Zudem können mögliche Therapieeffekte 

verfolgt werden. Eine weitere attraktive 

Anwendung: Die DNA-Information für das 

neue rot fluoreszierende Protein lässt sich an 

die DNA von intrazellulären Proteinen koppeln, 

die unentbehrlich für die Zellen sind, um ihren 

Zellzyklus zu durchlaufen, zum Beispiel Tubulin 

oder Actin. Solche Konstrukte wurden von 

Marinpharm erfolgreich benutzt, um humane 

Tumor-Zell-Linien zu generieren, die die Tubulin- 

und Aktin-Strukturen in brillant-tiefroter 

Fluoreszenz zeigen (Abb. 1 B), Zellen, die man 

wegen der emittierten langen Wellenlänge als 

solche wieder im Tier „sehen“ kann. 

Es kann als sicher gelten, dass diese neuen 

Werzeuge die präklinische Testung in vielerlei 

Hinsicht beschleunigen und verbessern können 

und damit dazu beitragen, Zeit und Kosten für 

die Entwicklung neuer therapeutischer Substanzen 

zu sparen. 

Literatur 

[1] Merzlyak EM, Goedhart J, Shcherbo D, Bulina ME, Scheglov 

AS, Fradkov AF, Gaintzeva A, Lukyanov KA, Lukyanov S, 

Gadella TW, Chudakov DM.; Bright monomeric red fluorescent 

protein with an extended fluorescence lifetime. Nat 

Methods. 2007 Jul;4(7):555-7. 


Prof. Dr. Christian Petzelt 

MARINPHARM GmbH 

Im Biotechnologiezentrum TGZ2 

14943 Luckenwalde 

cpetzelt@marinpharm.com 

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Blitzlicht Zellkultur 

Serumfreie Langzeitkultur 

humaner Hepatozyten in 

lumox TM -Slide-Flasks 

Anett Ullrich, Dr. Dieter Runge, PRIMACYT Cell Culture Technology GmbH, Schwerin 

Mit HEPAC 2 hat die Primacyt GmbH ein serumfreies Langzeitzellkultursystem mit humanen 

Hepatozyten entwickelt, das auch für pharmakologisch-toxikologische Studien im Rahmen 

der Arzneimittelentwicklung eingesetzt wird. Dieses System wurde auf ein neues Kultivierungssystem, 

der Objektträgerflasche mit dem gasdurchlässigen Folienboden übertragen, 

der lumox TM slide flask. Die Harnstofffreisetzung als Parameter für die hepatozelluläre Funktionalität 

der Zellen zeigte sich hierbei gegenüber der Kultivierung in einer konventionellen 

6-well-Platte deutlich erhöht. Die sehr guten optischen Eigenschaften (geringe Autofluoreszenz, 

hohe Transparenz) des lumox TM -Folienbodens stellten zudem eine hervorragende Basis 

für zellspezifische Färbungen dar. 

Abb. 1: Vergleich der Funktion und Vitalität humaner Hepatozyten in lumox TM slide flask- 

(rote Kurve) und 6-well-Kulturplatten (blaue Kurve) eines exemplarischen Experiments: 

Freisetzen von Harnstoff in das Zellkulturmedium jeweils innerhalb von 24 Stunden bei 

einer Kulturdauer von 26 Tagen. 

Die Primacyt Cell Culture Technology GmbH 

hat in den vergangenen Jahren ein humanes 

Leberzellkultursystem entwickelt. Mit HEPAC 2 

werden primäre humane Hepatozyten in einem 

chemisch definierten Medium serumfrei über 

mehrere Wochen kultiviert, wobei die Zellen 

ihre Funktionalität über diesen Zeitraum beibehalten. 

Die tägliche Qualitätskontrolle der 

Kulturen erfolgt lichtmikroskopisch und über 

die Analyse der Vitalität mittels Messung der 

Freisetzung des cytoplasmatischen Enzyms 

Lactatdehydrogenase sowie der Funktionsparameter 

Albumin und Harnstoff 1 . Das System 

wird in Wirkstoffprüfungen eingesetzt, die 

Übertragbarkeit der gewonnenen Daten auf 

die in-vivo-Situation konnte bereits durch eine 

klinische Phase II-Studie validiert werden 2 . 

In unserem Labor wurde das in einer 6-well- 

Kulturplatte entwickelte HEPAC 2 -Langzeitkultursystem 

für menschliche Leberzellen auf 

die von der In Vitro Systems & Services GmbH 

entwickelte lumox TM slide flask übertragen. Die 

Hepatozyten wurden in MEM alpha-Medium 

ausplattiert. Nach Anheftung wurden die Zellen 

in Human Hepatocyte Maintenance-Medium 

(HHMM) mit den Wachstumsfaktoren HGF 

(Hepatocyte Growth Factor) und EGF (Epidermal 

Growth Factor) serumfrei kultiviert. Parallel 

dazu wurden die Experimente auf handelsüblichen 

6-well-Zellkulturplatten durchgeführt. 

Der Zellkulturüberstand wurde täglich komplett 

geerntet und zur Analyse der Funktion und 

Vitalität der Leberzellen eingesetzt. Zwei Experimente 

bestätigten, dass die Abgabe von Harnstoff 

durch die Hepatozyten bei der Kultivierung 

in lumox TM slide flasks gegenüber der üblichen 

6-well-Platte deutlich erhöht ist (Abb. 1). Daher 

ist anzunehmen, dass die Zellen in der lumox TM 

slide flask einen höheren Differenzierungsgrad 

beibehalten können. Die Freisetzung der Lac- 

Abb. 2: H+E-Färbung an Tag 26 der Kultur 

in lumox TM slide flask, 40-fache Vergrößerung. 

tatdehydrogenase zeigte keine signifikanten 

Unterschiede zwischen beiden Kulturmethoden 

und war über den Kultivierungszeitraum von 

fast vier Wochen durchweg niedrig. 

Neben der täglichen lichtmikroskopischen 

Kontrolle wurde am Ende der Kultivierung eine 

Hämatoxylin/Eosin-Färbung durchgeführt. 

Hierbei brachte der lumox TM -Folienobjektträger 

deutliche Vorteile in der Handhabung 

gegenüber den bisher für die Färbung von 

Monolayerkulturen verwendeten dünnen 

Deckgläschen. Im Anschluss an die Kultur lässt 

sich der lumox TM -Objektträger abziehen und 

die spezifischen Färbungen direkt auf dem 

Objektträger durchführen. Die Morphologie 

der Zellen unterschied sich in beiden Kulturmethoden 

nicht, soweit dies lichtmikroskopisch 

beurteilt werden konnte (Abb. 2). 

In weiteren Experimenten ist nun zu untersuchen, 

ob die Kultivierung der Leberzellen in 

der gasdurchlässigen Objektträgerflasche auch 

zur wiederholten Testung von körperfremden 

Stoffen eingesetzt werden kann, wie dies mit 

HEPAC 2 der Fall ist. Dieses Langzeitzellkultursystem 

korreliert mit Ergebnissen aus Phase 

II-Studien und stellt ein wichtiges Werkzeug 

für die Untersuchung zur Wirkung von Xenobiotika 

auf den Menschen dar. 

Literatur 

[1] Ullrich, A. et al.: Use of a standardized and validated longterm 

human hepatocyte culture system for repetitive analyses 

of drugs: Repeated administrations of acetaminophen reduces 

albumin and urea secretion. ALTEX 2007; 24 (1): 35-40. 

[2] Dickens, H. et al.: Anticancer drug cis-4-hydroxy-L-proline: correlation 

of preclinical toxicology with clinical parameters of liver 

function. Molecular Medicine Reports, accepted for publication 


Dr. Dieter Runge 

PRIMACYT GmbH 

Hagenower Str. 73, 19061 Schwerin 

Tel.: +49-(0)385-3993-600 

Fax: +49-(0)385-3993-602 

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Mausmodelle: Pathogenese 

und Therapie-Entwicklung 

für Epidermolysis bullosa 

Dr. Anja Fritsch, Dr. Johannes Kern, Dr. Stefan Löckermann, Prof. Dr. Leena Bruckner-Tuderman, 


Epidermolysis bullosa (EB) ist eine Gruppe seltener, genetisch bedingter Hauterkrankungen, 

die durch Blasenbildung und Erosionen an Haut und Schleimhäuten gekennzeichnet sind. Die 

zugrundeliegenden Mutationen betreffen Gene, deren Genprodukte wesentlich an der Verankerung 

der Epidermis an der darunterliegenden Dermis beteiligt sind. Für viele dieser Gene 

existieren bereits Mausmodelle, in denen die Genexpression vollständig inaktiviert wurde. 

Diese sind allerdings überwiegend früh nach Geburt letal, was in der humanen Situation nur 

bei wenigen EB-Formen der Fall ist. Daher sind sie für eine Analyse der Pathogenese sowie 

vor allem für eine Entwicklung kausaler Therapien nur eingeschränkt geeignet. Aus diesem 

Grund werden durch konditionelle Inaktivierung der Zielgene durch die Cre-loxP-Technik oder 

die Generierung von hypomorphen Allelen neue Mausmodelle etabliert, bei denen die frühe 

Letalität des vollständigen Genverlustes vermieden werden kann. Diese stellen gute Modelle der 

humanen Erkrankung dar und können zur Analyse der Symptomentwicklung und zur Testung 

neuartiger Therapien herangezogen werden. 

Abb. 1: Darstellung des Aufbaus des Verankerungskomplexes und der in den verschiedenen 

EB-Subtypen auftretenden Mutationen der Keratin-Filamente, Plectin, BP230, Integrina 

6 b 4 , Collagen XVII, Laminin-332 und des Kollagen VII als Hauptbestandteil der Verankerungsfibrillen. 

Modifiziert nach [1] 

Epidermolysis bullosa (EB) bezeichnet eine 

Gruppe erblicher Hauterkrankungen, die 

durch Fragilität von Haut und Schleimhäuten 

und daraus resultierenden Blasen und 

Erosionen gekennzeichnet ist. Das Spektrum 

der im Allgemeinen schon kurz nach Geburt 

auftretenden Symptome reicht von einer 

erhöhten Tendenz zu Blasenbildung bei geringer 

mechanischer Beanspruchung bis hin 

zu schwersten Erkrankungen, die bereits im 

Kindesalter tödlich verlaufen. Der EB liegen 

Mutationen zugrunde, die die Funktionen 

des epidermalen Adhäsionskomplexes – ei- 

nes Protein-Netzwerkes an der Basalmembranzone 

– beeinträchtigen 1 . 

Die Integrität und Funktionalität der Haut 

als äußerster Barriere des Körpers ist von Zell- 

Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen abhängig, 

die die sich ständig erneuernde Epidermis stabilisieren 

und fest an der darunterliegenden 

Dermis verankern, die dem Gewebe mechanische 

Stabilität verleiht. Intermediärfilamente 

im Zytoskelett der Keratinozyten bilden über 

Desmosomen feste Kontakte innerhalb der 

Epidermis und werden über hemidesmosomale 

Proteine mit der extrazellulären Matrix 

verbunden. Wie in Abbildung 1 dargestellt, 

fixiert in den Hemidesmosomen ein Proteinkomplex 

aus Plektin, Kollagen XVII, BP230 und 

Integrin-a 6 b 4 die Intermediärfilamente an der 

Plasmamembran der Keratinozyten. Proteine 

der extrazellulären Matrix wie Laminin 332 

binden an Integrin-a 6 b 4 und werden ihrerseits 

durch Verankerungsfibrillen gebunden, die 

den Komplex fest an der Dermis verankern 2 . 

Die EB wird anhand der Blasenbildungsebene 

in drei Gruppen klassifiziert 3 (Abb. 1): 

EB simplex (EBS) ist charakterisiert durch 

Blasenbildung innerhalb der basalen Keratinozyten 

und wird hauptsächlich verursacht 

durch Mutationen in den Genen, die für die 

Zytoskelett-Proteine Keratin 5 und Keratin 14 

kodieren (KRT5, KRT14). Bei der EB junctionalis 

(EBJ) bilden sich Blasen unterhalb der basalen 

Keratinozyten, entlang der Basalmembran. 

Diese Form kann durch eine Vielzahl unterschiedlicher 

Mutationen hervorgerufen werden, 

zum Beispiel in den Genen für Integrina 

6 b 4 (ITGA6, ITGB4), Collagen XVII (COL17A1), 

Plektin (PLEC1) sowie den Untereinheiten 

von Laminin 332 (LAMA3, LAMB3, LAMC2). 

Ursächlich für die EB dystrophica (EBD) sind 

Mutationen im Gen für Kollagen VII (COL7A1). 

Die Spaltbildung erfolgt unterhalb der Basalmembran, 

und die entstehenden Blasen führen 

zu Narbenbildung. Das klinische Spektrum 

der EBD kann außerdem Pseudosyndaktylie 

und die Bildung von Plattenepithelkarzinomen 

umfassen 1,4,5 . 

EB-Mausmodelle mit konventioneller 

Gen-Inaktivierung 

Die essentielle Bedeutung vieler Komponenten 

des dermal-epidermalen Verankerungskomplexes 

wurde in der Vergangenheit durch 

Inaktivierung mehrerer beteiligter Gene im 

Mausmodell gezeigt. Eine Auswahl der bisher 

beschriebenen transgenen Mauslinien 

ist in Tabelle 1 zusammengefasst. Auffällig 

hierbei ist, dass die murinen Phänotypen 

häufig viel stärker ausgeprägt sind und 

meist durch Blasenbildung und Erosionen 

am ganzen Körper der Tiere gekennzeichnet 

sind. Auch die Inaktivierung von Genen, die 

beim Patienten keine oder nur eine geringe 

Beeinträchtigung der Lebenserwartung mit 

sich bringen, ist im Mausmodell in verhältnismäßig 

kurzer Zeit nach Geburt letal. Dieser 

Unterschied ist höchstwahrscheinlich unter 

anderem auch auf die gute medizinische 

Versorgung der Neugeborenen im Gegensatz 

zu den Versuchstieren zurückzuführen, bedeutet 

allerdings, dass die transgenen Tiere 

mit konventioneller Gen-Inaktivierung nur 

eingeschränkt zur Analyse der Pathogenese 

und Symptomentwicklung und zur Therapie- 

Testung herangezogen werden können. 

Aufgrund dieser Tatsache wurden für einige 

EB-Subtypen konditionale Knock-out-Linien 

oder Linien mit stark verringerter Genexpres- 


Abb. 2: In vivo-Modell für dominante EBS unter Nutzung der inhibitorischen 

Effekte der PGK-Neo-Kassette und der Cre-loxP- 

Technik (loxP-Sequenzen: rote Dreiecke). Die Verwendung 

Hormonrezeptor-gekoppelter Cre-Rekombinasen ermöglicht die 

Umgehung des letalen Effektes der Krt14-Inaktivierung (Abb. 

modifiziert nach 19). 

sion – sogenannte hypomorphe Linien – entwickelt, die eine bessere 

Abbildung der humanen Erkrankung erlauben. 

In vivo-Modell der dominanten EBS 

EBS wird durch Mutationen in den Genen für Keratin 5 und Keratin 14 

verursacht. Keratine bilden über ihre zentrale Rod-Domäne Heterodimere, 

die dann zu Keratin-Filamenten assembliert werden. Mutationen 

innerhalb und insbesondere an den Enden der Rod-Domäne 

können über eine Störung der Keratin-Assemblierung dominant 

negative Effekte auf die Filament-Stabilität ausüben. Dieser Effekt 

wurde in einem eleganten in vivo-Modell nachgestellt 19 , welches sowohl 

die Technik der induzierbaren Rekombinase-vermittelten Gen- 

Inaktivierung (Cre-loxP-System) als auch die negativen Effekte einer 

Selektionskassette auf die Expression des Zielgens nutzt (Abb. 2). 

Zunächst wurde die transgene Linie mtK14Neo generiert, bei 

der in einem Allel des Keratin 14-Gens eine Punktmutation eingeführt 

wurde. Darüberhinaus wurde in Intron 1 eine Kassette zur 

Expression der Neomycin-Phosphotransferase unter Kontrolle des 

Phosphoglyceratkinase-Promotors (PGK-Neo-Kassette) eingeführt, 

die zur Selektion der embryonalen Stammzellen (ES-Zellen) nach 

erfolgter homologer Rekombination und Einführung des Transgens 

dienen sollte und deren Cre-Rekombinase-vermittelte Exzision über 

flankierende loxP-Sequenzen ermöglicht wurde (Abb. 2). Diese PGK- 

Neo-Kassette interferierte allerdings stark mit der Expression des 

mutierten Allels von Keratin 14. Wurde diese in den transfizierten ES- 

Zellen durch die Aktivität der Cre-Rekombinase entfernt, so zeigten 

die resultierenden Mäuse einen dominant vererbten, EBS-ähnlichen 

Phänotyp mit schwerer Blasenbildung und starben innerhalb der 

ersten Lebenswoche. Damit konnte gezeigt werden, dass die Expression 

eines mutierten Keratin 14-Allels dieselben Folgen hat wie eine 

vollständige Geninaktivierung, allerdings dominant vererbt wird und 

damit die humane Situation widerspiegelt. 

Die transgene mtK14Neo-Linie bot jedoch auch die Möglichkeit, 

die Exzision der PGK-Neo-Kassette nicht in ES-Zellen vorzunehmen, 

sondern die Tiere mit einer Mauslinie zu kreuzen, die ein Fusionsprotein 

aus Cre-Rekombinase und einem Hormonrezeptor exprimiert. In 

diesem Fall wurde eine Linie verwendet, die eine Cre-Rekombinase- 

Progesteron-Rezeptor-Fusion trägt, die unter Kontrolle des Keratin 

5-Promotors steht und damit in den basalen Keratinozyten produziert 

wird. Die topische Applikation des Hormons auf die Pfoten der doppelt 

transgenen Tiere führte zur Translokation des Fusionsproteins 


LABORWElT 9. Jahrgang | Nr. 3/2008 | 15


vom Zytoplasma in den Zellkern, und dort 

wurde die PGK-Neo-Kassette entfernt und 

die Expression des mutierten Keratin 14 

ermöglicht. Dies führte zu Blasenbildung 

ausschließlich in den Hormon-behandelten 

Arealen, was ein Überleben der Tiere erlaubte. 

Folgestudien zeigten unter anderem, dass 

die Blasen nach Ende der Hormon-Behandlung 

schnell abheilten, was wahrscheinlich 

auf eine Einwanderung von epidermalen 

Stammzellen in die betroffenen Areale zurückzuführen 

ist. 

Mit diesem in vivo-Modell der dominanten 

EBS steht nun ein überlebensfähiges Tiermodell 

der Erkrankung zur Verfügung, welches 

die Analyse der Symptompathogenese und 

eine Therapieentwicklung ermöglicht. 

Der Kollagen VII-Hypomorph als 

Modell für EBD 

Die Möglichkeit, mit Hilfe einer intronischen 

PGK-Neo-Kassette die Expression eines Gens 

stark zu verringern, haben wir vor kurzem 

auch zur Generierung eines in vivo-Modells 

für EBD genutzt 20 . Diese EB-Form kann – abhängig 

von der zugrundeliegenden Mutation 

im Gen für Kollagen VII (COL7A1) – dominant 

oder rezessiv vererbt werden. Kollagen VII als 

Hauptbestandteil der Verankerungsfibrillen 

ist ein 290 kDa großes Protein mit einer sehr 

langen zentralen Tripelhelix, die von zwei 

globulären Domänen flankiert wird. Die 

schwerwiegendsten klinischen Symptome 

werden durch rezessive Mutationen hervorgerufen, 

die zu einer starken Reduktion der 

Kollagen VII-Synthese bis hin zum vollständigen 

Fehlen des Proteins in der Haut führen. 

Die betroffenen Patienten leiden nicht nur 

unter einer stark erhöhten Tendenz zu Blasenbildung, 

sondern entwickeln auch bereits 

im Kindesalter starke Narben und schwerwiegende 

Mutilationen an den Händen und 

Füßen. Außerdem zeigen sie eine erhöhte 

Inzidenz von Plattenepithelkarzinomen, die 

sich bevorzugt an stark von Blasenbildung 

betroffenen Arealen entwickeln und deren 

Metastasen die häufigste Todesursache 

darstellen 1 . 

Zur Generierung eines langlebigen in 

vivo-Modells der rezessiven EBD wurde eine 

konditionale Inaktivierung des Col7a1-Gens 

angestrebt und Exon 2 mit zwei loxP-Sequenzen 

flankiert. Diese erlauben die Cre- 

Rekombinase-vermittelte Exzision dieses 

Exons, was zu einer Leserasterverschiebung 

und Generierung von Stop-Codons führt, 

die die Proteinsynthese abbrechen. Gleichzeitig 

wurde auch eine PGK-Neo-Kassette 

Abb. 3: In vivo-Modell der rezessiven EBD. Die Einführung der PGK-Neo-Kassette führt zu stark 

verringerter Expression von Kollagen VII (Immunofärbung im Panel „Phänotyp“), was 

Blasenbildung verursacht (gekennzeichnet mit Sternchen). Die intradermale Injektion 

von Wild-Typ-Fibroblasten kann diesen Phänotyp teilweise revertieren. 

zur Selektion der ES-Zellen in Intron 2 

eingeführt (Abb. 3). Nach Etablierung der 

entsprechenden transgenen Linie konnte 

gezeigt werden, dass die PGK-Neo-Kassette 

einen starken Einfluß auf die Prozessierung 

der Kollagen VII-mRNA hat und die Proteinexpression 

auf ca. 10% des Wildtypniveaus 

senkt. Die Kollagen VII-hypomorphe Maus 

zeigte Blasenbildung der Haut und der 

Schleimhäute als klinische Symptome. Die 

verbliebenen Kollagen VII-Mengen reichten 

aber aus, um die Lebenserwartung der Tiere 

gegenüber der Situation bei konventioneller 

Gen-Inaktivierung 19 wesentlich zu erhöhen, 

auf bis zu sechs Monate. Innerhalb dieses 

Zeitraums konnte auch die Entstehung anderer 

Symptome der EBD beobachtet und 

analysiert werden, vor allem die Bildung von 

Mutilationen an den Extremitäten. Es konnte 

gezeigt werden, dass die Entwicklung der 

Mutilationen auf entzündlichen und darauf 

folgenden fibrotischen Prozessen beruht 20 . 

Dies ermöglicht es nun, therapeutische Maßnahmen, 

wie etwa anti-inflammatorische 

oder anti-fibrotische Behandlung der Extremitäten, 

in diesem Tiermodell zu testen. 

Außerdem eignen sich diese hypomorphen 

Mäuse auch für die Testung der Anfälligkeit 

für Tumorentstehung, da die fibrotisch veränderten 

Pfoten im Zeitverlauf beobachtet 

und analysiert werden können. 

Aus Sicht der betroffenen Patienten ist die 

Testung neuartiger biologisch begründeter 

Therapieansätze für EBD am wichtigsten. Die 

Effizienz einer Form der Substitutionstherapie 

konnte anhand dieses hypomorphen 

Mausmodells bereits gezeigt werden. Werden 

Fibroblasten aus Tieren mit normaler Kollagen 

VII-Synthese in die Rückenhaut der hypomorphen 

Tiere injiziert, so wird die Deponierung 

von Kollagen VII an der Basalmembran 

verstärkt. Außerdem ist bereits sieben Tage 

nach der Injektion die Resistenz der Haut 

gegenüber mechanischem Stress deutlich 

erhöht 20 . Dies zeigt, dass in diesem in vivo- 

Modell für EBD eine Analyse der Symptompathogenese 

und auch die Entwicklung und 

Validierung von Therapieansätzen möglich 

ist. Darüber hinaus kann diese transgene Linie 

nach Rekombinase-vermittelter Entfernung 

der PGK-Neo-Kassette genutzt werden, um 

einen konditionalen Knock-out von Kollagen 

VII durch Verwendung von Hormonrezeptorgekoppelten 

Cre-Rekombinase-Varianten 

zu erhalten. Damit wird auch die topische 

Gen-Inaktivierung möglich, was es erlaubt, 

das Auftreten und die Entwicklung klinischer 

Sympotme in einzelnen Geweben zu 

beobachten, zum Beispiel der Haut ohne 

Beteiligung der Schleimhäute. 

Zusammenfassung und Ausblick 

Anhand der dargestellten Tiermodelle für 

die verschiedenen Formen der Epidermolysis 


Tab. 1: Mausmodelle für verschiedene EB-Formen 

EB-Subtyp Zielgen Änderung Phänotyp 

EBS Krt14 Expression einer verkürzten Keratin-14-Variante Blasenbildung innerhalb der basalen 

unter Kontrolle d. endogenen Promoters Keratinozyten, perinatal letal6 Krt14 Ersatz von Krt14 durch eine Vimentin-cDNA Blasenbildung innerhalb der basalen 

Keratinozyten, perinatal letal7 Plec Inaktivierung perinatal letal8 bullosa wird deutlich, dass konventionelle 

Gen-Inaktivierungen zwar die Bedeutung des 

Zielgens für die Funktionen der Haut zeigen 

können, darüber hinaus aber als Modelle 

für die Erkrankungen nur bedingt geeignet 

sind. 

Insbesondere die häufig schwerwiegenderen 

Phänotypen der transgenen Tiere 

im Vergleich zu den klinischen Symptomen 

der Patienten machen direkte Vergleiche 

und Analysen der Symptompathogenese 

schwierig. Die kurze Lebenserwartung der 

Knock-out-Tiere macht es außerdem unmöglich, 

die Entstehung sekundärer Symptome 

einer Erkrankung, wie etwa die Mutilationen 

und Tumorbildung bei rezessiver EBD, zu 

untersuchen. 

Langfristig werden sicherlich auch für weitere 

Formen der EB Tiermodelle geschaffen 

werden, die eine konditionale Inaktivierung 

der Zielgene in einem bestimmten Zelltyp 

oder Gewebe areal erlauben. Daneben stellt 

auch die Verwendung der PGK-Neo-Kassette 

zur Generierung von hypomorphen Tieren 

eine elegante Möglichkeit dar, die letalen 

Auswirkungen eines vollständigen Fehlens 

von Proteinen zu mildern und so überlebensfähige 

in vivo-Modelle für humane 

Erkrankungen zu erhalten. 

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unter Kontrolle des Keratin 15-Promotors 

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Blasenbildung der Haut, perinatal 

letal 9 

EBJ Itgb4 Inaktivierung Blasenbildung, perinatal letal 10,11 

Itgb4 Deletion d. cytoplasmat. Teils d. b4-Integrins Blasenbildung, perinatal letal12 Itga6 Inaktivierung Blasenbildung, perinatal letal13 Col17a1 Ersetzen von Exon 2 durch PGK-Neo-Kassette Blasenbildung, ca. 20% der Tiere 

überleben die ersten 8 Wochen14 BP230 Ersetzen der Exons1-3 durch PGK-Neo-Kassette Blasenbildung nach mechanischem 

Stress, motorische Defekte15 Lama3 Inaktivierung Blasenbildung, perinatal letal16 Lamc2 Inaktivierung Blasenbildung, perinatal letal17 EBD Col7a1 Inaktivierung Blasenbildung, letal innerhalb der 

ersten 14 Tage18 [5] Varki, R., Sadowski, S., Uitto, J., Pfendner, E., J Med Genet 44 

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Erlacher, M., Berens von Rautenfeld, D., Hausser, I., Fassler, 

R., Bruckner-Tuderman, L., J Clin Invest (2008), in press 


Prof. Dr. Leena Bruckner-Tuderman 


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Treg, Autoimmunität und 

CD28-superagonistische 

Antikörper 

Prof. Dr. Holger M. Reichardt und Dr. Denise Tischner, Universitätsmedizin Göttingen; 

Dr. Nora Müller, Universität Würzburg 

Autoimmunerkrankungen wie Multiple Sklerose beruhen auf einer Fehlsteuerung des Immunsystems 

mit der Folge eines Angriffs auf körpereigene Zellen. Regulatorische T-Zellen 

(Treg) zeigen bei der Behandlung solcher Krankheiten neue Perspektiven auf, obgleich ihre 

Anwendung beim Menschen mit ernsthaften Schwierigkeiten verbunden ist. Die Infusion 

CD28-super agonistischer Antikörper hat sich in verschiedenen Tiermodellen als sehr erfolgreich 

erwiesen, ein erster klinischer Test musste aber aufgrund schwerer Nebenwirkungen 

abgebrochen werden. In Ratten werden zwei Phasen der T-Zellaktivierung beobachtet. Während 

die Lymphozyten kurz nach Infusion des Antikörpers massive Veränderungen in ihrer 

Morphologie, Gewebeverteilung und Beweglichkeit erfahren, kommt es nach wenigen Tagen 

zur selektiven Vermehrung und Aktivierung der Treg-Zellen. Dagegen tritt beim Menschen 

zusätzlich ein massiver Zytokinsturm auf, der eine Anwendung bei Patienten bis auf weiteres 

ausschließt. Gleichwohl wird es in Zukunft wichtig sein, das therapeutische Potential von 

Treg-Zellen für die Klinik weiter nutzbar zu machen. 

Autoimmunkrankheiten haben ihre Basis 

in einer Dysregulation des Immunsystems, 

wenn Lymphozyten plötzlich damit beginnen, 

körpereigene Zellen anzugreifen. Die Therapie 

beschränkt sich meist drauf, die autoaggressiven 

Zellen in Schach zu halten, wobei dies auf 

Kosten teils schwerer Nebenwirkungen und 

oft nur mit geringer Effizienz erfolgt. Neue 

Behandlungsstrategien zielen daher darauf 

ab, einen natürlich vorkommenden Mechanismus 

auszunutzen. Bereits vor Jahren wurde 

erkannt, dass regulatorische T-Zellen (Treg) sowohl 

bei Mäusen als auch beim Menschen dem 

Auftreten von Autoimmunreaktionen entgegenwirken. 

Aufbauend auf dieser Erkenntnis 

wurden seitdem verschiedene Ansätze entwickelt, 

um durch Transfer von Treg-Zellen oder 

durch deren Vermehrung direkt im Patienten 

den schädlichen Wirkungen autoaggressiver 

Lymphozyten entgegenzuwirken 1 . 

Regulatorische T-Zellen und ihre 

therapeutische Anwendung 

Treg-Zellen spielen eine wichtige Rolle im Rahmen 

pathogener und protektiver Immunreaktionen. 

Generell wird zwischen induzierten 

und natürlichen Treg-Zellen unterschieden. Zu 

ersteren zählen sowohl IL-10-produzierende Tr1 

Zellen als auch TGFb-sezernierende TH3-Zellen, 

deren Anreicherung nach oraler Verabreichung 

von Antigen beobachtet wurde. Im Gegensatz 

dazu entwickeln sich natürliche Treg-Zellen 

im Thymus und exprimieren den Transkriptionsfaktor 

FoxP3. Mutationen im FoxP3-Gen 

führen zu einem Funktionsverlust der natür- 

lichen Treg-Zellen, was beim Menschen eine 

multisymptomatische lymphoproliferative 

Erkrankung namens IPEX (Immundysregulation, 

Polyendocrinopathy, Enteropathy, Xlinked) 

zur Folge hat. Darüber hinaus wurden 

auch bei Autoimmunerkrankungen wie der 

Multiplen Sklerose (MS) ein Funktionsverlust 

oder eine verminderte Anzahl an Treg-Zellen 

beobachtet. Die Aktivierung von Treg-Zellen 

oder eine Verschiebung ihres Verhältnisses 

zu Effektorzellen stellt daher einen potentiell 

sehr interessanten Therapieansatz für solche 

Erkrankungen dar. Vorteile liegen insbesondere 

in der Möglichkeit zur antigenspezifischen 

Behandlung ohne gleichzeitige allgemeine 

Immunsuppression, der langanhaltenden 

physiologischen Regulation in vivo, sowie der 

Option zur Entwicklung patientenspezifischer 

Therapien. Prinzipiell kann die Aktivierung und 

Expansion von Treg-Zellen entweder in vivo im 

Patienten oder aber in vitro mit anschließendem 

Transfer geschehen. 

Treg-Expansion in vitro und in vivo 

Bei der Expansion von Treg-Zellen in vitro gibt es 

eine Reihe von Problemen, wie deren Isolation 

aus humanem peripherem Blut. Zum einen 

beträgt der Anteil der Treg-Zellen nur 5-10% 

der CD4 + -T-Lymphozyten, zum anderen ist bis 

heute kein wirklich spezifischer extrazellulärer 

Marker für diese Zellpopulation identifiziert. 

FoxP3 kommt als Sortierungskriterium nicht in 

Frage, da es sich hier um einen intrazellulären 

Transkriptionsfaktor handelt. Zudem wurde 

berichtet, dass FoxP3 beim Menschen nach Ak- 


tivierung auch in konventionellenCD4 + -T-Zellen 

induziert wird und somit dessen Expression 

für Treg-Zellen keineswegs spezifisch ist. Die 

derzeit effizienteste Aufreinigung wird mittels 

Leukapherese und anschließender magnetischer 

Aufreinigung der Treg-Zellen aus der Leukozytenfraktion 

auf Basis ihrer hohen CD25- und 

ihrer geringen CD127-Expression erreicht. 

Ein zweites Problem betrifft die Notwendigkeit, 

Treg-Zellen in vitro ausreichend stark 

zu expandieren. Hierbei besteht die Gefahr, 

dass auch kontaminierende CD25 + -Effektor-T- 

Zellen proliferieren. Dies würde im Falle eines 

Dendritic cell 

CD80/CD86 

CD80/CD86 

Peptide-MHC 

class II 

inzwischen deutlich reduziert werden. Eine 

Phase I-Studie zur Etablierung der Sicherheit von 

CD28-superagonistischen Antikörpern musste 

dagegen aufgrund massiver Nebenwirkungen 

abgebrochen werden, so dass ein weiterer 

Einsatz im Menschen bis auf weiteres nicht 

abzusehen ist. 

Während beim Menschen bislang nur mit 

polyklonalen Treg-Zellen gearbeitet wurde, hat 

sich in einigen Tiermodellen gezeigt, dass bereits 

etablierte Autoimmunerkrankungen nur durch 

Transfer antigenspezifischer Treg-Zellen therapiert 

werden können. Beim Menschen stellt sich 

TCR Signal 1 

Signal 2: 

Co-inhibition 

Naive T H cell 

CD28 Signal 2: Co-stimulation 

CTLA-4 

No response Response: 

T-cell activation 

Abb. 1: Um T-Zellen zu aktivieren, ist normalerweise eine Co-Stimulation des T-Zellrezeptors 

(TCR/CD3) und von CD28 erforderlich. TGN1412 bindet anders an CD28 als das natürliche 

Substrat CD80/86 und benötigt daher keine TCR-Bindung zur T-Zell-Aktivierung. 

adoptiven Transfers unter Umständen zu einer 

Verschlechterung des Krankheitsverlaufes 

führen. Um dies zu vermeiden, können Treg- 

Zellen in Anwesenheit von Rapamycin kultiviert 

werden, was die Proliferation von Effektorzellen 

spezifisch inhibiert. Die in vitro-Expansion 

der Treg-Zellen wird meist durch klassische 

Ko-Stimulation mittels an Beads gekoppelter 

monoklonaler Antikörper gegen CD3 und CD28 

in Gegenwart hoher Interleukin-2 (IL-2)-Dosen 

erreicht. Neben den methodischen Problemen 

stellt die Technik der in vitro-Expansion einen 

sehr zeit- und kostenaufwendigen Ansatz dar, 

insbesondere mit Blick auf die Notwendigkeit 

von GMP-Bedingungen. Weiterhin ist bislang 

ungeklärt, wie lange Treg-Zellen nach Rücktransfer 

im Patienten überleben und inwieweit ihre 

Suppressionsfähigkeit erhalten bleibt. Verlässliche 

Verfahren zur in vivo-Aktivierung und Expansion 

von Treg-Zellen wären daher vorteilhaft. 

Im Tiermodell ist es bereits heute möglich, Treg- 

Zellen durch gleichzeitige Verabreichung von 

Dexamethason und IL-2, durch Infusion niedriger 

Dosen eines anti-CD3-Antikörpers sowie mittels 

CD28-superagonistischer Antikörper selektiv zu 

vermehren. Im Falle von anti-CD3-Antikörpern 

wurden positive Effekte auf den Verlauf von 

Autoimmunerkrankungen auch in klinischen 

Studien nachgewiesen 2 . Die ursprünglich aufgetretenen 

schädlichen Begleiterscheinungen 

(Cytokine release syndrome) konnten durch 

Modifikation der verwendeten Antikörper 

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hier das Problem, dass die auslösenden Antigene, 

beispielsweise bei MS, häufig unbekannt sind. 

Darüber hinaus würde die geringe Anzahl antigenspezifischer 

Treg-Zellen im Blut deren Gewinnung 

und Expansion in vitro wahrscheinlich 

stark erschweren. Bei Krankheitsbildern, denen 

hingegen verschiedene Antigene zugrunde liegen, 

wie beispielsweise IPEX oder GvHD, ist der 

Transfer polyklonaler Treg-Zellen in Bezug auf 

die Wirkspezifität sogar vorteilhaft. 

CD28-superagonistische Antikörper 

Normalerweise benötigen T-Zellen zwei Signale, 

um durch Antigene aktiviert zu werden (Abb. 1). 

Kommt es zum Kontakt einer Peptid-beladenen 

Antigen-präsentierenden Zelle (APC) mit einer 

naiven T-Zelle, so wird sowohl der T-Zellrezeptor 

(TCR, CD3) als auch das kostimulatorische Molekül 

CD28 aktiviert. Nur wenn beide Signale 

gleichzeitig vorliegen, wird die T-Zelle zur Teilung 

und Differenzierung angeregt. Anders verhält es 

sich hingegen bei Stimulation mit CD28-superagonistischen 

Antikörpern. Durch die besondere 

Art und Weise, wie sie das CD28-Molekül auf 

Zellen binden und quervernetzen, reicht dieses 

Signal allein bereits aus, um T-Zellen effizient zu 

stimulieren 3 . Die Notwendigkeit eines zweiten Signals 

wird umgangen, wenngleich die Expression 

des T-Zellrezeptors (CD3g) per se erforderlich ist. 

Auf diese Weise ist es möglich, T-Zellen sowohl 


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A B C 

Abb. 2: Der CD28-superagonistische Antikörper JJ316 bewirkt innerhalb von 12 Stunden nach 

Infusion in Ratten eine transiente Veränderung der Morphologie und Größe der 

T-Zellen. Darstellung des F-Aktin-Zytoskeletts mittels konfokaler Mikroskopie nach 

Färbung mit Phalloidin-Alexa 488. A: T-Zellen vor Antikörperinjektion, B: 12 Stunden 

nach Injektion, C: 24 Stunden nach Injektion 

in vitro als auch in vivo mit nur einem einzigen 

Antikörper zu aktivieren. 

Die Fähigkeit T-Zellen direkt zu stimulieren, 

ist nicht das einzig Besondere an CD28superagonistischen 

Antikörpern. Eine weitere 

erstaunliche Eigenschaft ist, dass sie verschiedene 

Arten von T-Zellen unterschiedlich gut 

zu stimulieren vermögen. Diese Antikörper 

sprechen auf längere Sicht Treg-Zellen besser 

als konventionelle CD4 + -T-Helferzellen 

und andere Lymphozyten an. Folglich haben 

CD28-superagonistische Antikörper das Potential, 

Treg-Zellen in vivo innerhalb weniger 

Tage spezifisch zu expandieren und damit das 

Gleichgewicht zugunsten dieser Subpopulation 

zu verschieben 4 . Dies wiederum hat sich in 

verschiedenen Tiermodellen als therapeutisch 

äußerst effizient bei der Behandlung von Autoimmunerkrankungen 

erwiesen. 

CD28-superagonistischen Antikörpern 

wurde eine große Zukunft in der Therapie 

zahlreicher Krankheiten vorhergesagt. Präklinische 

Studien hatten gezeigt, dass sowohl die 

prophylaktische als auch die therapeutische 

Behandlung mit JJ316, einem Ratten-spezifischen 

CD28-superagonistischen Antikörper, 

zu einer signifikanten Reduktion der klinischen 

Symptome der Experimentellen Autoimmun- 

Enzephalomyelitis (EAE), dem Tiermodell 

der MS, führt 5,6 . Ähnliche Ergebnisse wurden 

für die Rheumatische Arthritis und den Typ 

I-Diabetes Mellitus erhalten. Die positive Wirkung 

des Antikörpers wurde vornehmlich den 

Treg-Zellen zugeschrieben, da sich der Transfer 

solcher Zellen ähnlich auswirkt wie die direkte 

Gabe des Antiköpers selbst. Auch wenn dies 

Schnelle Effekte CD28-super agonistischer 

Antikörper in der Ratte (< 24 Stunden) 

Kurzzeitige starke Verminderung der Beweglichkeit 

der T-Zellen 

möglicherweise nicht der einzige Mechanismus 

ist, so bleibt die erstaunliche Effizienz bei der 

Behandlung von Autoimmunreaktionen im 

Tiermodell unumstritten. 

Scheitern im Erstversuch 

Im März 2006 erlitten die großen Hoffnungen, 

die auf CD28-superagonistischen Antikörpern 

ruhten, einen jähen Rückschlag 7 . Sechs Probanden 

erhielten im Rahmen einer Phase I-Studie 

eine Infusion des humanisierten superagonistischen 

CD28-Antikörpers TGN1412. Anders als 

bei den zuvor durchgeführten präklinischen 

Studien kam es innerhalb kürzester Zeit zum 

Auftreten einer fulminanten systemischen 

Entzündungsreaktion, gekennzeichnet durch 

die Freisetzung großer Mengen an Zytokinen 

wie TNFa und IFNg, sowie zum Auftreten einer 

massiven Lymphopenie. Die Folgeerscheinungen 

des Zytokinsturms normalisierten sich nach 

Gabe von Methylprednisolon und monoklonalen 

anti-IL-2-Antikörpern sowie intensivmedizinischer 

Betreuung im Laufe der folgenden Tage 

wieder, so dass die Probanden die Klinik nach 

einigen Wochen verlassen konnten. 

Biphasische Wirkungen von 

CD28-superagonistischen Antikörpern 

Weshalb waren in der klinischen Studie von 

TGN1412 Wirkungen aufgetreten, die in vergleichbarer 

Weise im Tiermodell zuvor nie beobachtet 

worden waren? Was das Auslösen eines 

Tab. 1: Biphasische Wirkungen CD28-superagonistischer Antikörper in der Ratte 

verzögerte Effekte CD28-superagonistischer 

Antikörper in der Ratte (>24 Stunden) 

Selektive Expansion und Aktivierung der Treg-Zellen 

Aktivierung des F-Aktin-Zytoskeletts der Lymphozyten Selektive Veränderung der Morphologie und Größe 

der Treg-Zellen 

Induktion einer T-Lymphopenie Erhöhte Beweglichkeit der Treg-Zellen 

Verstärkte Expression von Aktivierungsmarkern auf 

T-Zellen 

Erhöhte Adhäsion der T-Zellen 

Effiziente Therapie und Prophylaxe von Autoimmunreaktionen 

Zytokinsturms durch TGN1412 im Menschen 

angeht, so scheint es sich hier tatsächlich um den 

wichtigsten Unterschied zwischen Mensch und 

Tier zu handeln. Verschiedene Untersuchungen 

am Modell der Ratte, derjenigen Spezies welche 

eine zentrale Rolle in der präklinischen Forschung 

von TGN1412 gespielt hatte, belegen, dass CD28superagonistische 

Antikörper im Tiermodell 

keine nennenswerte Zytokinsekretion auslösen. 

Nach Infusion von JJ316 in Ratten kommt es 

zwar zu einer erhöhten mRNA-Expression von 

TNFa und IFNg sowie anderen Mediatoren. Die 

in das Blut freigesetzten Zytokinmengen sind 

hingegen gering 8 . Verschiedene Studien haben 

sich mit der Frage nach der Ursache für diesen 

Unterschied zwischen Mensch und Tier auseinandergesetzt. 

Eine neuere Untersuchung zeigt, 

dass bei Anwendung geeigneter experimenteller 

Bedingungen zwar humane, nicht jedoch aus 

Affen gewonnene T-Zellen durch TGN1412 zur 

Freisetzung von Zytokinen angeregt werden 9 . 

Eine mögliche Erklärung hierfür liefern jüngste 

Erkenntnisse, dass CD28 superagonistische 

Antikörper ausschließlich bei humanen T-Zellen 

Kalzium-Signale auslösen 10 . Außerdem hat sich 

gezeigt, dass T-Zellen beim Menschen im Verlauf 

der Evolution inhibitorische Moleküle, so genannte 

CD33-verwandte Siglecs, verloren haben 11 . Diese 

könnten bei Ratten und Affen (Schimpansen 

und Gorillas) eine überschießende Reaktion auf 

die Stimulation durch CD28-superagonistische 

Antikörper verhindern, während menschlichen 

Zellen dieser Schutz fehlt. Auch wenn dieser 

Ansatz einiges erklären würde, so fehlt bislang 

noch jeglicher Beweis für dessen Gültigkeit. 

Es gibt aber auch erstaunliche Parallelen zwischen 

den Wirkungen CD28-superagonistischer 

Antikörper bei Ratte und Mensch. Insbesondere 

gilt dies für die Induktion einer Lymphopenie. 

So wurde in der klinischen Studie von TGN1412 

beobachtet, dass die Zahl der Lymphozyten 

bereits nach acht Stunden im Blut der Probanden 

stark vermindert war 6 . Wie sich zeigte, tritt 

dieses Phänomen auch nach Infusion von JJ316 

bei Ratten auf: nach nur vier Stunden sind kaum 

noch T-Zellen im Blut nachzuweisen 8 . Dieser 

Zustand ist jedoch vorübergehend, so dass 

die Zahl der Lymphozyten im Blut der Ratten 

sich innerhalb von zwei Tagen weitgehend 

normalisiert. Das Phänomen der Lymphopenie 

scheint mehrere Ursachen zu haben. Zum einen 

kommt es innerhalb weniger Minuten zu einer 

schlagartigen Verminderung der Beweglichkeit 

der T-Zellen. Während diese normalerweise in 

den lymphatischen Organen umherwandern, 

werden sie unmittelbar nach Infusion von JJ316 

immobilisiert. Dieser Zustand hält für wenige 

Stunden an, bevor die T-Zellen ihre Beweglichkeit 

zurückerlangen. Ein weiterer Grund für die 

Lymphopenie liegt offensichtlich in der erhöhten 

Adhäsivität der T-Zellen nach Behandlung mit 

JJ316. Weiterhin verändert sich die Morphologie 

der Lymphozyten innerhalb der ersten 24 Stunden 

nach Antikörpergabe, begleitet durch eine 

kurzzeitige Größenzunahme (Abb. 2). Obgleich die 

Beweglichkeit nur übergangsweise verloren geht, 


dauert die Lymphopenie deutlich länger an. Dies 

liegt vermutlich daran, dass T-Zellen nicht mehr 

aus den sekundären lymphatischen Organen 

auswandern können. Normalerweise ist hierfür 

die Expression des Sphingosin-1-Phosphat-Rezeptors 

verantwortlich, der es den Zellen ermöglicht, 

auf den im Blut vorkommenden Mediator S1P zu 

reagieren und in die Zirkulation zurückzukehren. 

Durch die Behandlung mit JJ316 wird die Expression 

dieses Rezeptors vermindert, so dass die 

Zellen die Lymphknoten nicht mehr verlassen 

können. All diese Veränderungen führen letztendlich 

dazu, dass es für eine Dauer von 24 bis 

48 Stunden zu einer ausgeprägten Lymphopenie 

kommt 8 . Anschließend beginnen die T-Zellen zu 

proliferieren, wobei insbesondere die Zahl der 

Treg-Zellen stark zunimmt und diese ihre Morphologie 

in charakteristischer Weise verändern 

(Abb. 3). Inwieweit die im Tiermodell auftretenden 

Veränderungen alle auch für den Mensch 

zutreffen, lässt sich nur spekulieren. Tatsache ist 

jedoch, dass die Lymphopenie und die Schnelle 

ihres Auftretens Mensch und Ratte gemeinsam 

sind. Dies ist jedoch keinesfalls als Nachteil zu 

betrachten. Vielmehr muss davon ausgegangen 

werden, dass die Induktion einer transienten Lymphopenie 

einen positiven Beitrag zur therapeutischen 

Effizienz von CD28-superagonistischen 

Antikörpern liefern würde. Dies wird durch die 

Beobachtung unterstützt, dass JJ316 und FTY720 

in Hinblick auf die Lymphopenie in der Ratte einen 

vergleichbaren Effekt aufweisen 8 . Bei FTY720 

handelt es sich um einen funktionellen Antagonisten 

der Sphingosin-1-Phosphat-Rezeptoren, 

der sich gegenwärtig in einer fortgeschrittenen 

klinischen Studie zur Behandlung von MS befindet. 

Es wäre denkbar, dass insbesondere die in 

einer frühen Phase eintretende therapeutische 

Wirkung von JJ316 bei Ratten der Induktion einer 

Lymphopenie zugeschrieben werden kann. Dies 

zeigt, dass CD28-superagonistische Antikörper 

Abb.3: Innerhalb von drei Tagen nach Infusion 

des CD28-superagonistischen 

Antikörpers JJ316 kommt es spezifisch 

bei Treg-Zellen zu morphologischen 

Veränderungen. Einfügung: Treg-Zelle 

aus einer unbehandelten Ratte (gleicher 

Maßstab). Darstellung der Zellen 

mittels Rasterelektronenmikroskopie 

möglicherweise über mehrere Mechanismen 

einen positiven Einfluss auf den Verlauf von 

Autoimmunerkrankungen nehmen und unterstreicht, 

ungeachtet der bislang ungelösten 

Problematik des Zytokinsturms im Menschen, 

deren therapeutisches Potential (Tab. 1). 

Fazit 

Neue Ansätze zur Behandlung bislang unheilbarer 

Autoimmunerkrankungen wie MS oder Rheumatische 

Arthritis werden auch in der Zukunft 

aufgrund der noch immer sehr beschränkten 

Therapiemöglichkeiten von großer Bedeutung 

sein. Neben dem Einsatz hochdosierter Glukokortikoide 

kommt insbesondere der Entwicklung 

neuer monoklonaler Antikörper sowie zellbasier- 

ten Ansätzen eine wichtige Rolle zu. Während 

verschiedene therapeutische Antikörper bereits 

jetzt aus vielen Behandlungsstrategien nicht 

mehr wegzudenken sind, wird es noch dauern, 

bis Treg-Zellen möglicherweise Einzug in den 

klinischen Alltag halten. Auch wenn der Einsatz 

CD28-superagonistischer Antikörper beim 

Menschen im ersten Anlauf gescheitert ist, so 

erscheint das ihnen zugrundeliegende Prinzip 

weiterhin vielversprechend. 

Literatur 

[1] Roncarolo, M.G., Battaglia, M. Nat Rev Immunol 7 (2007), 

585-598. 

[2] Chatenoud, L., Bluestone, J.A. Nat Rev Immunol 7 (2007), 

622-632. 

[3] Lühder, F., Huang, Y., Dennehy, K.M., et al. J Exp Med 197 

(2003), 955-966. 

[4] Hünig, T. Adv Immunol 95 (2007), 111-148. 

[5] Beyersdorf, N., Gaupp, S., Balbach, K., et al. J Exp Med 202 

(2005), 445-455. 

[6] Tischner, D., Weishaupt, A., van den Brandt, J., et al. Brain 

129 (2006), 2635-2647. 

[7] Suntharalingam, G., Perry, M.R., Ward, S., et al. N Engl J Med 

355 (2006), 1018-1028. 

[8] Müller, N., van den Brandt, J., Odoardi, F., et al. J Clin Invest 

118 (2008), 1405-1416. 

[9] Stebbings, R., Findlay, L., Edwards, C., et al. J Immunol 179 

(2007), 3325-3331. 

[10] Waibler, Z., Sender, L.Y., Merten, C., et al. PLoS ONE 3 (2008), e1708. 

[11] Nguyen, D.H., Hurtado-Ziola, N., Gagneux, P., Varki, A. Proc 

Natl Acad Sci USA 103 (2006), 7765-7770 

Korrespondenz 


Prof. Dr. Holger M. Reichardt 

Universitätsmedizin Göttingen 

Georg-August-Universität Göttingen 

Abt. Zelluläre und Molekulare Immunologie 

Humboldtallee 34 

37073 Göttingen; 

Tel.: +49-(0)551- 393365, Fax: - 395843 

hreichardt@med.uni-goettingen.de 


Blitzlicht Zellbasierte Assays 

Gelbasierte Angiogenese- 

Assays – neues Konzept 

zur Meniskusproblematik 

Dr. Roman Zantl, Dr. Ulf Rädler, Elias Horn, ibidi GmbH, Martinsried 

Der Meniskus von Flüssigkeiten, der sich in kleinen Wells an der Wasser-Luftgrenzfläche 

bildet, ist bei der Durchführung von gelbasierten Angiogenese-Assays wie zum Beispiel dem 

Tube Formation Assay aus drei Gründen störend: Erstens beeinträchtigt er die homogene 

Zellverteilung durch die Senke in der Mitte. Zweitens bleibt ein Großteil des teuren Gels 

in der Kante zwischen Boden und Seitenwand ungenutzt. Drittens befinden sich die Zellen 

auf der gekrümmten Oberfläche teilweise außerhalb des scharf abzubildenden Bereichs. In 

dem hier vorgestellten µ-Slide Angiogenesis von ibidi werden diese drei Probleme mit einer 

„well-in-a-well“-Struktur gelöst. Die Idee beruht darauf, dass die Oberfläche eines zu 100% 

gefüllten Töpfchens exakt eben ist. Im Vergleich zu handelsüblichen 96-well-Platten. erspart 

die neue Struktur 90% des einzusetzenden Gels. 

Substanzen mit anti-angiogenetischer Wirkung 

wird großes Potential bei der unterstützenden 

Therapie von Tumorerkrankungen 

zugeschrieben. Aufgrund des unkontrollierten 

Zellwachstums haben Tumore einen 

besonders großen Bedarf an Sauerstoff und 

Nährstoffen. Das schnelle Wachstum von Gewebe 

ist deshalb auf die Bildung neuer Gefäße 

im und um den Tumor herum angewiesen. 

Eine medikamentöse Beeinträchtigung der 

Angiogenese könnte demnach das Tumorwachstum 

verringern und damit die Chancen 

A B C 

Tube Formation Assay 

homogene 

Zellaussaat 

Gelmatrix 

5x 

tube 

formation 

Sprouting Spheroid 

Zell Sphäroid 

5x 

bei der Behandlung mit komplementären 

Behandlungsmethoden, wie chirurgischen 

Eingriffen, Bestrahlung und Chemotherapie 

vergrößern. 

Mit Nährstoffen unterversorgtes Gewebe 

setzt Signalstoffe frei, die das benachbarte 

Gewebe und insbesondere Endothelzellen 

dazu bringen, neue Gefäße zu erzeugen. 

Dieser Prozess ist meist chemotaktisch getrieben. 

Ein vielgenannter Faktor in diesem 

Zusammenhang ist das Molekül VEGF (vascular 

endothelial growth factor), der Endo- 

sprouting 

(sprießen) 

Stück aus Gefäßwand 

12 h 12 h 12 h 

Sprouting Aortic Tissue 

sprouting 

(sprießen) 

Abb. 1: Bei gelbasierten Angiogenese-Assays wird die Entwicklung von auf einer Gelmatrix 

(gelb) kultivierten Zellen mikroskopisch verfolgt. Beim Tube Formation Assay (A) 

bilden vereinzelt ausgesäte Zellen charakteristische, netzartige Strukturen. Im Gegensatz 

dazu bilden Endothelzellen aus sphäroidförmigen Zellverbänden oder Gefäßstücken 

sprossenartige Strukturen. Dies wird beim Sprouting Spheroid Assay (B) und 

beim Sprouting Aortic Tissue Assay (C) genutzt. 

24 | 9. Jahrgang | Nr. 3/2008 LABORWElT 

5x 

thelzellen zur Zellteilung und möglicherweise 

zur gerichteten Bildung neuer Gefäße anregt. 

Neben einer Behandlung der Tumorzellen ist 

deswegen die Unterdrückung der Angiogenese 

bei Endothelzellen eine lohnende Strategie 

in der Tumorbehandlung. 

In vitro-Assays zur Untersuchung 

der Angiogenese 

Es gibt zahlreiche in vivo- und in vitro-Assays 

zur Untersuchung des anti-angiogenetischen 

Potentials von Substanzen. Dazu wird die 

Wirkung von Stoffen auf die Gefäßneubildung 

durch Endothelzellen oder deren 

Vorläuferzellen anhand von Modellsystemen 

analysiert. Die Möglichkeiten reichen von der 

Impfung von Hühnereiern mit Endothelzellen 

und verschiedenen Modellsystemen in Tieren 

bis zu zellbasierten Untersuchungen. Zu den 

prominenten Beispielen der zellbasierten 

Assays gehören der „tube formation assay“ 

und der „sprouting assay“. 

Beim tube formation assay werden vereinzelte 

Zellen auf eine dünne Gelschicht 

aufgetragen und dort für eine bestimmte Zeit 

unter Zugabe von aktivierenden Substanzen 

kultiviert. Das angiogenetische Potential 

wird analysiert, indem die Ausprägung einer 

charakteristischen Netzstruktur anhand 

verschiedener Parameter (Anzahl der Knotenpunkte, 

Anzahl der Verzweigungen pro 

Knotenpunkt, Gesamtlänge aller Netzstrukturen, 

etc.) mit mikroskopischen Aufnahmen 

bestimmt wird. Obwohl die Zellen auf einer 

dreidimensionalen Matrix wachsen, sind 

die gebildeten Strukturen zweidimensional 

und als solche der Mikroskopie gut zugänglich. 

Ähnlich ist das Vorgehen beim sprouting 

assay, wo ein Sphäroid aus Endothelzellen 

oder auch direkt ein Stück des Gefäßes, 

also etwa ein ringförmiger Querschnitt des 

Gefäßes, auf die Gelmatrix gelegt werden. 

Je nach Potential zur Angiogenese sprießen 

aus diesen Endothelzellverbänden neue „Gefäße“ 

stärker oder schwächer aus. Bei beiden 

Assays werden keine Gefäße mit einem Lumen 

ausgebildet, sondern charakteristische 

Strukturen der Gefäßbildung. 

Um gute lichtmikroskopische Aufnahmen 

zu erhalten, ist es erforderlich, dass sich die 

Zellen in einer optischen Ebene befinden – 

genauer ausgedrückt: innerhalb des Tiefenschärfebereichs 

des verwendeten Objektivs 

liegen. Dieser beträgt typischerweise bei 

den für die Assays verwendeten 5x- oder 10x- 

Objektiven rund 75 µm oder entsprechend 

20 µm. Trotzdem liegen die Zellen in den 

typischen Bildausschnitten von etwa 4 mm 

x 3 mm (5x Objektiv) beziehungsweise 2 

mm x 1,5 mm (10x Objektiv) aufgrund der 

Meniskusbildung im Allgemeinen nicht im 

Tiefenschärfebereich wie in Abbildung 2 C 

zu sehen.

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Blitzlicht Zellbasierte Assays 

A B 

C 

5x 

Das Problem Meniskusbildung 

Sowohl Tube Formation- als auch Sprouting- 

Assays werden auf Gelmatrizes durchgeführt, 

wobei meist BD Matrigel TM von Becton Dickinson 

verwendet wird. Aufgrund der hohen Kosten 

für die Gelmatrix und der Parallelisierung 

wird angestrebt, den Test in möglichst kleinen 

Wells durchzuführen. 

Allerdings tritt im Fall kleiner Wells ein 

störender Meniskus auf. Dieser führt einerseits 

zu einer ungleichmäßigen Zellverteilung 

durch Zellkonzentration in der Mitte 

des Wells. Andererseits liegen die Zellen 

auf einer gekrümmten Oberfläche, was eine 

scharfe mikroskopische Abbildung aller Zellen 

zugleich unmöglich macht (Abb. 2). Die automatisierte 

Bildverarbeitung wird dadurch 

drastisch aufwendiger. 

Ein möglicher Lösungsansatz ist es, Bilder 

in verschiedenen Fokusebenen aufzunehmen, 

um danach die jeweils scharfen Bereiche der 

Bilder zu einem Bild zusammenzusetzen. Um 

das Meniskusproblem selbst zu verringern, 

bleibt bisher nur die Verwendung von größeren 

Wells, zum Beispiel von 6 Well- oder 

35 mm-Petrischalen. In diesem Fall vergrößert 

sich allerdings der Matrigeleinsatz pro Well 

–in 96-Well-Platten ca. 100 µl – um ein Vielfaches. 

Bei der Verwendung von 100 µl pro Well 

entstehen bereits Matrigelkosten von rund 

300 Euro für eine 96-Well-Platte. Hier gilt es, 

zwischen hohen Kosten einerseits und starker 

5x 

Abb. 2: Bei der Durchführung von Angiogenese-Assays in einfachen Töpfen erzeugt das eingefüllte 

Gel einen Meniskus (A), so dass die Zellen in unterschiedlichen Fokusebenen liegen. 

Die „well-in-a-well“-Struktur des µ-Slide Angiogenesis (B) verhindert durch vollständiges 

Auffüllen des inneren Wells mit Gel die Bildung eines Meniskus. Mikroskopische Bilder, die 

in Standard-Wells aufgenommen sind, enthalten ohne Software-seitige Nachbearbeitung 

zugleich scharfe und unscharfe Bereiche (C). Wird der Assay in der neuen Struktur durchgeführt, 

befinden sich alle Zellen in einer Fokusebene und können dadurch gleichzeitig scharf 

abgebildet werden. Bilder m. freundlicher Genehmigung v. Peter Nelson, LMU München 

0,8 mm 

5x 

5x 

Meniskusbildung, also schlechter Optik und 

inhomogener Zellverteilung andererseits, 

einen Kompromiss zu finden. 

Zellmedium (50 µl) 

Gelmatrix (10 µl) 

4 mm 

5 mm 


1 mm 

Abb 3: Das objekträgergroße µ-Slide Angiogenesis 

enthält 15 „Well-in-a-Well“- 

Strukturen. Wird das kleinere Well 

vollständig mit Gel (10 µl) gefüllt, 

benötigt das Objektiv einen Arbeitsabstand 

von mindestens 1 mm. Sollte der 

Meniskus an der Luft-Mediumgrenzfläche 

z.B. für Phasenkontrastaufnahmen 

stören, kann dieser durch vollständiges 

Füllen des großen Töpfchens 

(50 µl) vermieden werden. Ohne Gel 

können auch hochauflösende Objektive 

(z.B. 100x-Ölimmersion) zur Zellbeobachtung 

verwendet werden. 

Die Lösung: Well-in-a-Well 

Mit einem geometrischen Trick lässt sich die 

Meniskusbildung des Gels jedoch verhindern 

und zugleich 90% des zu verwendenden Gel- 

Materials einsparen. Dazu wird ein kleineres 

Well mit 4 mm Durchmesser und 0,8 mm 

Tiefe – also 10 µl Volumen – in einem größeren 

Well mit 5 mm Durchmesser untergebracht. 

Wird das kleinere Well komplett mit dem Gel 

befüllt, bildet dieses eine flache Oberfläche. 

Zellen und sich auf der Geloberfläche bildende 

Zellstrukturen liegen damit in derselben 

optischen Fokusebene und können einfach 

und gleichzeitig scharf abgebildet werden. 

Durch Verwendung eines deckglasdicken 

Bodens beträgt die Gesamthöhe im Falle des 

komplett gefüllten Wells etwa 1 mm und ist 

damit mit handelsüblichen 10x-, 20x- und 

40x-Objektiven mikroskopierbar. 

Für andere Anwendungen können zudem 

durch geringere oder größere Füllvolumen 

möglicherweise erwünschte Menisken 

hergestellt werden, zum Beispiel um wenige 

Zellen in der Mitte des kleinen Wells 

zu konzentrieren. Dazu würde lediglich 

5 µl des Gels eingesetzt werden, um den 

Zellen eine biokompatible und schalenförm - 

ige Geloberfläche zu präsentieren. Die „Wellin-a-Well“-Idee 

könnte auch ihren Platz in 

der dreidimensionalen Zellkultur finden, 

indem die Zellen nicht auf dem Gel, sondern 

in der Gelmatrix ausgesät werden. Dabei ist 

die homogene Dicke der Gelmatrix von nur 

0,8 mm von Vorteil, weil sie eine gleichmäßige 

Versorgung mit Nährstoffen gewähr - 

leistet. 

Fünfzehn dieser Well-in-a-well-Strukturen 

sind im µ-Slide Angiogenesis von ibidi umgesetzt. 

Das „well-in-a-well“ Prinzip bietet auch 

großes Potential bei der Durchführung von 

Screenings im Angiogenesebereich, da sich 

gerade hier die Vorteile wie Kosteneinsparung 

und vereinfachte Automatisierung der 

Bildverarbeitung besonders stark bemerkbar 

machen. 

Das µ-Slide Angiogenesis wurde in enger 

Zusammenarbeit mit Stefan Zahler 

vom Center of Drug Research des Instituts 

für pharmazeutische Biologie der Ludwig 

Maximilians-Universität München entwickelt. 


Dr. Ulf Rädler 

ibidi GmbH 

Am Klopferspitz 19 

82152 Martinsried 

Tel.: +49-(0)89-5204617 31 

Fax:+49-(0)89-5204617 59 

uraedler@ibidi.de 

www.ibidi.de

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Zellarrays zum 

HT-Nachweis von Protein- 

Protein-Interaktionen 

Dr. Andrea Fiebitz, Prof. Dr. Hans Lehrach, Dr. Michal Janitz, Dr. Dominique Vanhecke, 

Max-Planck-Institut für molekulare Genetik, Berlin 

Die Erforschung von Protein-Protein-Interaktionen (PPI) ist grundlegend für das Verständnis 

von zellulären Funktionen. Mit der Etablierung des „cell array-based protein-protein interaction 

assay“ (CAPPIA), eines kostengünstigen und effektiven Hochdurchsatz-Verfahrens 

zum Nachweis von Protein-Protein-Interaktionen, steht nun neben dem Hefe- auch ein 

hochdurchsatztaugliches Säuger-Zwei-Hybrid-System im Arrayformat zur Verfügung. Es ist 

von Vorteil, Interaktionen zwischen Säugerproteinen direkt in Säugerzellen zu untersuchen, 

da hier – anders als beispielsweise in Hefezellen – von einer korrekten Abbildung der Proteinexpression 

und der post-translationalen Modifikationen ausgegangen werden kann. 

Bei dem hier beschriebenen Assay wird eine 

große Probenanzahl im Arrayformat auf einem 

Objektträger immobilisiert, der dann mit einer 

Schicht adhärenter Zellen bedeckt wird. Interagieren 

die nach der Transfektion exprimierten 

Proteine miteinander, so fluoreszieren die auf 

dem Array gewachsenen Zellen infolge eines 

durch die Proteininteraktion aktivierten fluoreszenten 

Reporters. Die dichte Anordnung 

von Proben auf den Zellarrays und der geringe 

Blitzlicht Hochdurchsatz-Analyse 

Verbrauch von Reagenzien machen CAPPIA 

derzeit zu einer der ökonomischsten Hochdurchsatzverfahren 

für den Nachweis von 

Proteininteraktionen direkt in Säugerzellen. 

Vorteile und Funktionsweise 

Proteininteraktionen und -komplexe spielen 

in biologischen Systemen eine wichtige Rolle. 

Eine Standardmethode zum Hochdurchsatz- 

Nachweis der Proteininteraktion ist das 

Zwei-Hybrid-System 1 , bei dem sogenannte 

Bait- und Prey-Expressionsplasmide kotransfiziert 

werden. Das Baitprotein ist mit 

einer DNA-Bindungsdomäne (DBD) fusioniert, 

das Preyprotein mit einer transkriptionalen 

Aktivierungsdomäne (AD). Im Falle einer Interaktion 

beider Proteine bilden die beiden 

Domänen zusammen einen funktionellen 

Transkriptionsfaktor, der die Expression eines 

Reporterproteins aktiviert. Bisher wurden 

Hochdurchsatz analysen mit dem Zwei-Hybrid- 

Verfahren fast ausschließlich in Hefe durchgeführt, 

auch solche, bei denen Säugerproteine 

untersucht werden sollten. Potentielle Interaktionen 

müssen aufgrund der hohen Anzahl an 

falsch-positiven Signalen anschließend Gen für 

Gen im Säugersystem überprüft werden, um 

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LABORWElT �� 

9. 

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Jahrgang | Nr. 3/2008 | 27 

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A 

B 

C 

D 

Abb. 1: CAPPIA. A. Vorbereiten und Spotten 

von Proben mit Bait (X fusioniert an 

Aktivierungsdomäne AD) und Prey 

(möglicher Interaktionspartner Y 

fusioniert mit Bindungsdomäne BD). 

B. Adhärente Säugerzellen werden 

C. durch die immobilisierter DNA 

transfiziert. D. Interagieren Bait und 

Prey miteinander, wird der autofluoreszente 

Reporter exprimiert (rote 

Punkte). EGFP dient der Orientierung 

(grüne Punkte). 

eventuelle posttranslationale Modifikationen 

und beteiligte Co-Faktoren zu berücksichtigen. 

Doch obgleich es bereits Zwei-Hybrid-Systeme 

für Analysen direkt in Säugerzellen gibt 2,3 , sind 

diese bis heute nicht oder nur mit großem 

Kosten-, und Geräteaufwand für Hochdurchsatz-Screens 

nach neuen Proteininteraktionen 

geeignet. Aus diesem Grund wurde ein kostengünstiges 

und effizientes System etabliert, 

mit dem Säugerproteine direkt in Säugerzellen 

untersucht werden können. Hierfür wurde das 

Säuger-Zwei-Hybrid-System mit transfizierten 

Zell-Microarrays 4 zu einem neuen Verfahren 

namens CAPPIA („cell array based proteinprotein-interaction 

assay“) kombiniert. 

Nachdem die vektorkonstruierten Proben 

von Bait-, Prey- und Reporterplasmiden im 

Arrayformat auf Objektträgern fixiert worden 

sind, werden die so entstandenen Arrays mit 

humanen adhärenten Zellen bedeckt. Die Zellen 

setzten sich einschichtig auf der gesamten 

Oberfläche fest. Aber nur diejenigen, die direkt 

auf den aufgetragenen DNA-Spots wachsen, 

werden durch die Proben transfiziert und beginnen, 

spezifische Bait- und Preyproteine zu 

exprimieren. Sobald diese chimären Proteine 

miteinander in Wechselwirkung treten, kommt 

es zur Expression des Reporterproteins – hier: 

eines autofluoreszierenden Proteins –, infolge 

der Bildung des funktionellen Transkriptionsfaktors 

aus der DNA-Bindedomäne des Baits 

und der Aktivierungsdomäne des Preys. Die aus 

der Proteininteraktion resultierenden Signale 

werden mit Hilfe von Fluoreszenznachweisen 

analysiert, ohne dass die Objektträger weiter 

bearbeitet werden müssten, wie etwa bei Immunfluoreszenzfärbungen 

oder enzymatischen 

Nachweisen (Abb. 1) 

Für die Herstellung von Microarrays nach dem 

CAPPIA-Prinzip werden nur Nanoliter- Volumina 

von Lösungen zum Spotten der Objektträger benötigt. 

Sie enthalten neben dem Transfektionsreagenz, 

die Bait- und Prey-Expressionsplasmide 

sowie ein autofluoreszentes Reporterplasmid. 

Grundlage für die Konstruktion der Proben sowie 

für Positiv- und Negativkontrollen, war das 

Mammalian Two-Hybrid Assay-Kit (Stratagene). 

Im Vergleich verschiedener Reporter- und Nachweisverfahren 

erwies sich der autofluoreszente 

GAL4-pZsGreen-Reporter – ein Eigenkonstrukt 

aus der GAL4 upstream activating sequence 

des pGAL/lacZ (Invitrogen) und dem Plasmid 

pZsGreen1-1 (Clontech) – als am besten geeignet. 

Von 12 unterschiedlichen, in den Vergleich 

einbezogenen Objektträgern erwies sich eine 

selbsthergestellte Variante mit einer Kombination 

von Poly-L-Lysin und VECTABOND (Vector 

Labs) als am geeignetsten. Für das automatische 

Auftragen der DNA auf die Objektträger 

wurde ein sciFLEXARRAYER S5 (Scienion) genutzt 

(Abb. 2). Für eine gute Haftung auf den Objektträgern 

und eine spätere effiziente reverse 

Transfektion wurden diverse Bedingungen wie 

etwa die finale DNA-Konzentration und die 

Gelatinekonzentration optimiert. Die Arrays 

können nach dem Spotten über mehrere Monate 

hinweg stabil gelagert werden und müssen 

dann für die reverse Transfektion im Rahmen 

eines CAPPIA-Experiments lediglich mit einem 

Zell-Monolayer bedeckt und anschließend analysiert 

werden. Eine Reihe von Zelllinien wurde 

auf ihre Eignung für die reverse Transfektion 

und Proteinexpression im Rahmen von CAPPIA- 

Experimenten getestet, als Standardzelllinie 

für alle Optimierungsschritte und späteren 

Experimente diente HEK293T. Die Auswertung 

der Fluoreszenzsignale erfolgte mittels eines 

BIOccd Image Readers (PE Applied Biosystems). 

Für die graphische Darstellung wurden die 

Werte gegen die Signale des autofluoreszenten 

Proteins EGFP normalisiert. EGFP diente ferner 

der einfacheren Orientierung auf den Arrays. 

Aus diesem Grund wurde das Plasmid pcDNA4- 

EGFP als Umrandung auf jeden Objektträger 

gespottet. Eine detaillierte Beschreibung der 

grundlegenden Methoden und Materialien 

findet sich in [5]. 

Screening einer Prey-Bibliothek 

und quantitative Detektion 

Nach Optimierung der revers transfizierten 

Zell-Arrays und Anwendung in verschiedenen 

Zelllinien wurde die Leistungsfähigkeit von 

CAPPIA mittels Verifizierung einer bekannten 

hormonabhängigen Interaktion im Rahmen 

einer kleinen Bibliothek von potentiell mit 

nuklearen Rezeptorfunktionen assoziierten 

cDNAs getestet. Zehn Baits und 17 Preys, also 

170 verschiedene Prey-Bait-Kombination, 

wurden jeweils dreifach gespottet. Abbildung 

3 zeigt das Ergebnis der reversen Transfektion 

der Ligandenbindedomäne des androgenen 

Rezeptors (LBD-AR) als Bait in Kombination mit 

den 17 Preys der cDNA-Bibliothek. Die Interaktion 

zwischen LBD-AR und der N-terminalen 

Domäne des androgenen Rezeptors (NTD-AR) 

konnte dabei mit CAPPIA ebenso nachgewiesen 

werden wie die Notwendigkeit der Anwesenheit 

eines Androgens (hier des synthetischen 

Agonisten R1881) für die beobachtete Interaktion 

– beides steht in Übereinstimmung mit 

früheren Studien 6-8 . Nach dem so erbrachten 

Nachweis der Spezifität von CAPPIA wurde die 

quantitative Detektion von Proteininteraktio- 

Abb. 2: Automatisches Spotten. A. sciFLEX- 

ARRAYER S5. B. Mit einer 70 µm-Nozzle 

wurden pro Spot 20 Tropfen (ca. 8 nl 

Probe) dispensiert. C. Objektträger 

nach Transfektion der Zellen, aufgenommen 

mit einer BIOccd-Kamera 

(PE Applied Biosystems). Untersucht 

wurden unterschiedliche Anzahl von 

Tropfen pro Spot und verschiedene 

Abstände zwischen den Spots. 


A 

B 

C

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Grußwort 

Dr. Bernd Wegener, Vorsitzender des BPI, Vorstandsvorsitzender BRAHMS Aktiengesellschaft 

Die Märkte verändern sich: Handlungsbedarf! 

Märkte im Umbruch – Zwänge und Möglichkeiten: Dr. Gunter Trojandt, Boston Consulting Group, Berlin 

Der Pharmamarkt aus Sicht eines mittelständischen Unternehmens: Prof. Dr. G. Strugala, Apogepha Arzneimittel GmbH, Dresden 

Entwicklung der Biotech-Branche – Flops, Erfolge, Wege in die Zukunft: Dr. Ulrich Dauer, 4SC AG, Martinsried 

Neue Modelle: erste Beispiele für Kooperationen 

Riemser Arzneimittel AG und TVM Capital GmbH; Wilex AG und Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A., Barcelona; 

Revotar Pharmaceuticals AG: Internationale Kooperationen; Fresenius Biotech GmbH und TRION Pharma AG; und weitere 

Zwischen Reaktion und Zukunftsgestaltung: die Rolle der Kapitalmärkte 

Pharmamittelstand und Biotech – eine übersehene Chance?: Dr. Axel Polack, TVM Capital GmbH, München 

Kapitalmarktinstrumente zur Zukunftssicherung: Tilman Wittershagen, Deutsche Bank AG, Frankfurt 

und weitere 

Podiumsdiskussion: Visionen und/oder realistische Chancen 

Pharma-Mittelstand und Biotech-KMU – ein unterschätztes Erfolgsmodell? Moderation: Andreas Mietzsch, BIOCOM AG 

Zwischen den Vortragsblöcken besteht ausreichend Gelegenheit zu Diskussion und Networking. 

Abschließend optional Besichtigung des Peter-Behrens-Baus und Cocktail-Empfang. 

Bitte registrieren Sie sich unter www.biocom.de/events oder senden Sie uns eine eMail an events@biocom.de. 

Eine Veranstaltung der BIOCOM AG in Kooperation mit dem Bundesverband der Pharmazeutischen Industrie e.V. 

Organisation: BIOCOM Projektmanagement GmbH | Brunnenstraße 128 | 13355 Berlin 

www.biocom.de | events@biocom.de | Tel. +49 (0)30 264921-53 | Fax +49 (0)30 264921-66 

Foto: InfraServ Höchst


A 

B 

Abb. 3: Detektion einer Interaktion. Kotransfektion der Ligandenbindedomäne des Androgenrezeptors 

(AR-LBD) als Bait und jeweils einem von 17 Preys. Jede Kombination 

(A – Q) wurde dreifach gespottet, ebenso die Kontrollen. In Gegenwart von R1881, 

einem synthetischen Androgen-Liganden, interagiert AR-LBD mit der N-terminalen 

Domäne des Androgenrezeptors (Prey O). A. BIOccd-Scannerbild, B. Graph 

nen anhand der Dosis-Antwort-Abhängigkeit 

der hormonregulierten Wechselwirkungen von 

LBD-AR und NTD-AR untersucht. Die Analyse der 

Regulation mit Hilfe von R1881 als Agonist bzw. 

der inhibierende Effekt von Medroxyprogesteronacetat 

(MPA) und Hydroxyflutamid (OH-Flu) 

als Antagonisten befand sich im Einklang mit 

veröffentlichten Daten 6,9 . Zusammengenommen 

zeigen diese Experimente deutlich, dass 

Proteininteraktionen mit Hilfe von Zellarrays 

auch unter verschiedenen physiologischen 

Bedingungen zuverlässig und sogar quantitativ 

identifiziert werden können. 

Um die Flexibilität und damit die Möglichkeiten 

der Anwendung von CAPPIA zu erhöhen 

wurden zusätzlich zu der hier beschriebenen 

Dreifach-Transfektion (Bait + Prey + Reporter) 

zwei weitere Transfektionsstrategien mit CAP- 

PIA getestet. Hierfür wurden Objektträger ohne 

Bait gespottet (sogenannte PR-Objektträger). 

Um nach Interaktionspartnern für die gespotteten 

Preys zu suchen, wird das zu testende 

Bait dann vor der reversen Transfektion in die 

Zellen integriert, entweder mittels stabiler 

oder transienter Transfektion. Die sogenannten 

„PR-stable Bait“- sowie die „PR-trans Bait“- 

Zellarrays erbrachten eine vergleichbar spezifische 

Trans-Aktivierung der Reporterexpression. 

Da PR-Objektträger mit jedem beliebigen 

Bait kombiniert werden können, sind sie für 

die Suche nach unbekannten Interaktionen 

gegenüber Objektträgern mit bereits gespotteten 

Baits (PRB-Objektträger) im Vorteil. Große 

Prey-Bibliotheken können gespottet und die 

entsprechenden Objektträger gelagert oder an 

andere Forschungsgruppen verschickt werden, 

die nach Interaktionspartnern für ein bestimmtes 

als Bait einsetzbares Protein suchen. 

Fazit 

Im Vergleich zu dem gängigen Zwei-Hybrid- 

Assay in Hefe bietet CAPPIA den Vorteil, Interaktionen 

zwischen Säugerproteinen im korrekten 

zellulären Kontext zu testen, was die Rate an 

falsch-positiven Signalen deutlich verringern 

sollte, zumal phänotypisch sehr unterschiedliche 

Zelltypen verwendet werden können. 

Zusammenfassend kann gesagt werden, dass 

das große Leistungsvermögen der Zellarrays 

zusammen mit der Flexibilität, dem geringen 

Verbrauch an Reagenzien und der lange 

Lagerfähigkeit der gespotteten Objektträger 

CAPPIA derzeit zu einem der ökonomischsten 

Hochdurchsatz-Assays für die Detektion von 

Protein-Protein-Interaktionen in Säugerzellen 

macht. Vor allem der Verbrauch an Transfektionsreagenz 

– einer der größten Kostenquellen 

bei solchen Assays – ist im Vergleich zu Transfektionen 

im Well-Format deutlich reduziert. 

Durch die Verwendung eines autofluoreszenten 

Reporters, der Immunfluoreszenzfärbung oder 

einen enzymbasierten Reporterassay überflüssig 

macht, wird die Kosteneffizienz weiter 

erhöht. Im Gegensatz zu Mikrowell-basierten 

Methoden zum Auffinden von Proteininteraktionen 

wie beispielsweise nach Suzuki 3 ist zudem 

keine teure Geräteinfrastruktur für den Hochdurchsatzbetrieb 

mit einem solchen Format 

nötig. Derzeit können bis zu 900 verschiedene 

Preys als einzelne Spots auf CAPPIA-Objektträgern 

gespottet werden. Das entspricht etwa 

neun 96-Mikrowellplatten. Durch die Analyse 

mehrerer identischer Objektträger können ohne 

großen Mehraufwand replikative Datenpunkte 

zusammengelegt analysiert werden. Die lange 

Lagerfähigkeit der gespotteten Arrays und die 

Möglichkeit, diese an andere Forschungsgruppen 

zu verschicken, erhöht die Flexibilität und 

Praktikabilität dieses Assays. 

Nach erfolgter Optimierung und Verifizierung 

der Leistungsfähigkeit von CAPPIA wird 

nun die Identifizierung unbekannter PPI angestrebt. 

Mit der Schaffung großer Bait-Prey- 

Bibliotheken zum Screenen mittels CAPPIA 

könnten mehr als 15.000 bereits vorhandene 

Open Reading Frame-Klone auf Proteininteraktionen 

getestet werden. Ferner kann CAPPIA 

durch die gezielte Suche nach Liganden, die 

bestimmte Interaktionen modulieren oder. 

trennen, für die Identifizierung von Arzeimittelkandidaten 

genutzt werden. 

Literatur 

[1] S. Fields and O. Song, Nature 340 (1989) 245-6. 

[2] C.V. Dang, J. Barrett, M. Villa-Garcia, L.M. Resar, G.J. Kato and 

E.R. Fearon, Mol Cell Biol 11 (1991) 954-62. 

[3] H. Suzuki, Y. Fukunishi, I. Kagawa, R. Saito, H. Oda, T. Endo, S. 

Kondo, H. Bono, Y. Okazaki and Y. Hayashizaki, Genome Res 11 

(2001) 1758-65. 

[4] J. Ziauddin and D.M. Sabatini, Nature 411 (2001) 107-10. 

[5] A. Fiebitz, L. Nyarsik, B. Haendler, Y.H. Hu, F. Wagner, S. Thamm, 

H. Lehrach, M. Janitz and D. Vanhecke, BMC Genomics 9 

(2008) 68. 

[6] P. Doesburg, C.W. Kuil, C.A. Berrevoets, K. Steketee, P.W. Faber, 

E. Mulder, A.O. Brinkmann and J. Trapman, Biochemistry 36 

(1997) 1052-64. 

[7] I. Ahrens-Fath, O. Politz, C. Geserick and B. Haendler, Febs J 

272 (2005) 74-84. 

[8] E. Langley, Z.X. Zhou and E.M. Wilson, J Biol Chem 270 (1995) 

29983-90. 

[9] J.A. Kemppainen, E. Langley, C.I. Wong, K. Bobseine, W.R. Kelce 

and E.M. Wilson, Mol Endocrinol 13 (1999) 440-54. 


Dr. Andrea Fiebitz 

Max-Planck-Institut für molekulare Genetik 

Ihnestr. 73, D-14195 Berlin 

Tel.: +49-(0)30-8413-1238 

Fax: +49-(0)30-8413-1128 

fiebitz@molgen.mpg.de 

www.molgen.mpg.de 


Optimale Überwachung 

von Laboranlagen 

Will Coulter, Perkin Elmer, One Source Business Leader Europe, Beaconsfield, UK 

Pharmazeutische, biotechnische und zahlreiche andere Labore sehen sich stetig wachsenden 

Herausforderungen gegenüber, wenn es darum geht, die Produktivität zu erhöhen, das 

Compliance-Risiko einzugrenzen und zugleich Kosten zu senken, um damit wettbewerbsfähig 

oder für ihre Aktionäre attraktiv zu bleiben. Eine Lösung, auf die zahlreiche Labore 

zurückgreifen, um diese Ziele zu erreichen, ist die Vergabe des Wartungsmanagements für 

Laborgeräte. Wenn Programme zum Anlagen- und Instandhaltungsmanagement professionell 

mit den entsprechenden Ressourcen implementiert werden, können Labore von erheblichen 

Kostensenkungen und Leistungssteigerungen profitieren. 

Einfach ausgedrückt besitzen oder leasen 

Labore Anlagen (Geräte, Instrumente oder 

Systeme), die aus finanztechnischen Gründen 

und wegen der Einhaltung gesetzlicher 

Vorschriften abverfolgt werden müssen. 

Wenn Ereignisse, wie etwa eine Installation, 

vorbeugende Wartung (PM), Reparatur (CM), 

Validierung (IQ/OQ/PQ), Laborumzug etc., im 

Zusammenhang mit diesen Anlagen eintreten, 

müssen diese Ereignisse und ihre Auswirkungen 

ebenfalls dokumentiert werden, 

um nachvollziehbar zu sein. Zahlreiche Labore 

verwirklichen diese Aufgabe mit minimalem 

Aufwand in Form von Anlagenregistern und 

Gerätelogbüchern. Diese Daten sind jedoch 

nicht zentralisiert oder im gesamten Unternehmen 

zugänglich. Zudem sind sie häufig 

veraltet, dies gilt insbesondere für Anlagenregister. 

Schlimmer noch: Einige Labore 

riskieren, Auflagen nicht zu erfüllen, wenn sie 

den Termin für vorbeugende Wartungen und 

Qualifizierungen (OQ) nicht einhalten. 

Zahlreiche Softwareunternehmen bieten 

eigenständige Softwarepakete an, um La- 

Das BioMedizinZentrumDortmund BMZ bietet als Einrichtung des 

TechnologieZentrumDortmund optimale Bedingungen für Start-Ups 

und junge Unternehmen im Bereich der Life Sciences. 

Für die Bereiche Biomedizin, Bioinformatik und Biomikrostrukturtechnik 

bietet das BMZ seinen Nutzern folgende Dienstleistungen an: 

• Bereitstellung moderner Büro- und Laborinfrastruktur 

• Technisches Facility Management 

• Unterstützung bei der Geschäftsentwicklung 

• Nationales & internationales Networking 

• PR & Marketing-Maßnahmen 

Innerhalb des BMZ bietet das Zentrum 

für Angewandte Proteomik ZAP 

in Zusammenarbeit mit den Universitäten 

Bochum und Dortmund 

State-of-the-art-Technologien in 

folgenden Bereichen: 

• Quantitative Proteomik 

• 2D-DIGE Technologien 

• Glykoanalytik 

• Protein Biochips 

• Biostatistik & Bioinformatik 

info@zap-do.de 

info@bmz-do.de 

Innerhalb des BMZ bietet das Zentrum 

für Angewandte Chemische Genomik ZACG 

in Zusammenarbeit mit der Universität 

Dortmund und des Max-Planck-Instituts 

Dortmund Expertise in folgenden Bereichen: 

• Antibiotikaforschung 

• Biotechnologische Syntheseoptimierung 

• Adressierbare mikro- und nano-Arrays 

• Membran-Protein-Wechselwirkungen 

• Wirkstoffbibliotheken 

Blitzlicht Labor-Wartungsmanagement 

bore beim Nachhalten dieser Informationen 

zu unterstützen. Diese Software lässt sich 

unter Umstände sogar mit dem aktuellen 

Warenwirtschaftssystem (ERP) der Labore 

verknüpfen. Der Einsatz solcher Pakete setzt 

erhebliche Investitionen in Ressourcen und 

Zeit voraus, um die Gerätedatenbank zu pflegen 

und die Serviceaufzeichnungen auf dem 

neuesten Stand zu halten. Für einige Labore 

ist dieser Aufwand schlichtweg zu hoch, 

mit dem Ergebnis, dass die erfassten Daten 

unvollständig und damit unbrauchbar sind. 

Selbst wenn die entsprechende Software 

richtig eingesetzt wird, fehlen den meisten 

Unternehmen die Zielstrebigkeit und das 

Fachwissen für eine optimale Nutzung der 

erfassten Daten. 

Eine Lösung, die einerseits diese Problematik 

addressiert und andererseits erhebliche 

Verbesserungen in der Effizienz und 

Nutzung der Geräte mit sich bringt, ist die 

Partnerschaft mit einem Dienstleister, der 

Geräte verschiedenster Hersteller sowie die 

Dienstleistungen anderer Anbieter betreut. 

Verglichen mit dem Abschluss zahlreicher 

Verträge bei verschiedenen Anbietern bietet 

solch ein konsolidiertes Servicemanagement, 

bei dem das Labor alle Leistungen 

aus einer Hand erhält, aufgrund des geringeren 

Verwaltungsaufwandes unmittelbare 

Kosteneinsparungen und Leistungsverbesserungen. 

PerkinElmer bietet mit seinen 

info@zacg-do.de 


Kontakt: BMZ · Otto-Hahn-Straße 15 · 44227 Dortmund · Telefon + 49 231 97 42-130 · info@bmz-do.de · www.bmz-do.de


Abb. 1: Schema des Labormanagement-Angebotes One Source 

OneSource®Professional Services diese 

Dienstleistungen für Labore an. 

Maßgeschneiderte Lösung 

OneSource® ist, wie der Name schon sagt, 

ein umfassendes Lösungspaket aus einer 

Hand für die Geräte-Instandhaltung und Anlagenverwaltung 

im Labor. Mit OneSource® 

bietet PerkinElmer umfassende Geräteinventarisierungs- 

und Prüfungsfunktionen, die 

eine exakte Bestandsaufnahme aller Geräte 

(und Anlagen) ermöglichen. Die Details zum 

Anlagenbestand werden in eine Datenbank 

zur Anlagenverwaltung eingegeben, wo sie 

die Grundlage für die Datenerfassung und 

das Berichtswesen bilden (Abb. 1). 

Nach Abschluss der Bestandsaufnahme 

erarbeitet PerkinElmer gemeinsam mit den 

Anwendern im Labor und den Qualitätssicherungsteams 

eine Dokumentation über 

Serviceanforderungen, Qualitätsverfahren, 

Service Level Agreements (SLAs) und Leistungskennzahlen 

(KPIs) für die einzelnen 

Instrumente. Qualitätssicherungsverfahren 

werden mit den bestehenden Qualitätssystemen 

im Labor abgestimmt, um die 

Einhaltung einschlägiger Vorschriften sicherzustellen. 

Anforderungen zur vorbeugenden 

Wartung und Einhaltung von Vorschriften 

werden definiert und nachgehalten, um 

eine automatische Planung zu ermöglichen 

und das Risiko der Nichteinhaltung zu verringern. 

Schnelle Problembehebung 

Im nächsten Schritt werden Dienstleister mit 

der Durchführung der Arbeiten (die Ereignisse) 

an den Anlagen betraut. PerkinElmer 

bietet direkte technische Unterstützung 

für eine Reihe von Geräten verschiedener 

Originalgerätehersteller in unterschiedlichen 

Technologiebereichen, unter anderem HPLC, 

GC, LC/MS, GC/MS und Liquid Handling. Indem 

PerkinElmer selbst eine größere Anzahl 

an Geräten direkt wartet, in zahlreichen 

Fällen durch die Stationierung von Servicetechnikern 

vor Ort am Kundenstandort, 

erzielt PerkinElmer für den Kunden erhebliche 

Verbesserungen in Bezug auf die Reaktionszeit 

und die Geräteverfügbarkeit. Während 

es normalerweise zwei bis drei Tage dauert, 

bis Servicetechniker am Standort des Labors 

auftauchen und bis zu vier Tagen benötigen, 

um eine Reparatur durchzuführen, reagieren 

vor Ort stationierte Teams innerhalb einer 

Stunde, und die Reparatur wird in der Regel 

innerhalb von vier Stunden durchgeführt, 

da vor Ort ein Lagerbestand der wichtigsten 

kritischen Ersatzteilkomponenten vorhanden 

ist. Vor-Ort-Support aus einer Hand für eine 

umfangreiche Palette an Geräten liefert 

dem Labor eine höhere Effizienz im Hinblick 

auf Betriebszeiten und Verfügbarkeit der 

Anlagen. 

Optimale Ersatzteillogistik- 

und -qualität 

Wenn Dienstleister Teile verschiedener 

Hersteller verwenden, kann dies zu einem 

Problem für das Labor werden. Zum einen 

ist die Verfügbarkeit von Originalteilen nicht 

sichergestellt, zum anderen werden anstelle 

der Originalteile möglicherweise Teile minderer 

Qualität verwendet. Zur Lösung dieses 

Problems setzt PerkinElmer eigens hierfür 

vorhandene Ressourcen ein, um verschiedene 

Beschaffungskanäle einzurichten bzw. 

zu nutzen. Damit wird sichergestellt, dass 

Teile jederzeit verfügbar sind und dass diese 

– soweit möglich – von der Quelle bezogen 

werden, die auch die Originalgerätehersteller 

nutzen. In jedem Fall werden alle Teilestücklisten 

im Vorfeld überprüft und mit dem 

Kunden abgestimmt, um sicherzustellen, dass 

die vom Kunden geforderte Qualität erreicht 

oder übertroffen wird, bevor die Teile in die 

Ersatzteilversorgung (Abb. 2) aufgenommen 

werden. 

Zuweilen ergeben sich Fragen hinsichtlich 

des Compliance-Risikos, wenn der 

Service von einem anderen Anbieter als 

dem Originalgerätehersteller erbracht wird. 

PerkinElmer hat daher mehrere Millionen 

US-Dollar in die Ausstattung verschiedener 

Schulungszentren weltweit investiert, in 

denen OneSource®-Techniker an Produkten 

diverser Hersteller mit demselben Niveau 

geschult werden, wie die Techniker, die mit 

der Wartung von Perkin Elmer-Produkten 

betraut sind. Jeder Techniker muss am Ende 

des Kurses eine Abschlussprüfung bestehen, 

um ein Ausbildungszertifikat zu erhalten. Kopien 

dieser Zertifikate sind am Standort des 

Kunden verfügbar, um Qualitätsprüfungen 

Abb.2: Beschaffungslogistik innerhalb des One Source-Dienstleistungsangebotes 


im Rahmen des gemeinsam vereinbarten Qualitätsmanagementsystems 

zu unterstützen. 

Stetige Verbesserung der Kundenunterstützung 

Durch den jüngsten Erwerb von LabMetrix Technologies, dem 

größten unabhängigen Lösungsanbieter für die Qualifizierung metrologischer 

Analyseinstrumente verschiedener Hersteller, liefert 

PerkinElmer seinen Kunden jetzt eine optimierte Qualifizierungsumgebung, 

die herstellerunabhängig für zahlreiche Laborinstrumente 

und -technologien erhältlich ist. 

Für den Fall, dass PerkinElmer nicht über das Fachwissen verfügt, 

um den Service an den Laborgeräten selbst zu erbringen, stehen 

dem Kunden bewährte Tools zur Verfügung, um die Erbringung 

durch andere, vom Labor benannte Anbieter, zu veranlassen. Der 

große Vorteil für die Anwender liegt dabei in der zentralen Koordination. 

Wann immer ein Instrument einen Service benötigt, werden 

alle Anforderungen – unabhängig vom Gerätehersteller – an das 

OneSource® Customer-Care-Center geleitet. Dieses Customer-Care- 

Center kann je nach Einsatzaufkommen vor Ort beim Kunden oder 

dezentral eingerichtet werden. Der Kundendienstspezialist nimmt 

die Kundenanforderung entgegen und steuert anschließend alle 

Phasen des Serviceprozesses von der Reparaturbeauftragung bis hin 

zur erfolgreichen Behebung des Problems. 

Verlässliche Dokumentation 

Abschließend werden alle Daten des Serviceeinsatzes in das Anlagenverwaltungssystem 

durch das OneSource®-Team eingetragen. Neben 

Angaben, wie Servicebeschreibung, verwendete Teile, Arbeitszeit und 

entstandene Kosten, werden alle im Rahmen des Einsatzes aufgetretenen 

Änderungen in der Anlageninformation (neuer Standort oder 

Anwender, Änderung des Kostenträgers oder des Wartungsplans) 

erfasst und im Verwaltungssystem für die Anlagenwartung aktualisiert, 

um die Datenintegrität zu gewährleisten. Die Daten werden 

von erfahrenen Fachleuten unter Verwendung von Lean- und Six 

Sigma-Tools geprüft und analysiert, um für den Kunden eine kontinuierliche 

Verbesserung in der Diestleistung und Effizienz zu erzielen 

sowie eine dauerhafte Kostensenkung zu erreichen. Diese Analysen 

und Ergebnisse werden gemeinsam mit den Standardberichten über 

Leistungskennzahlen (KPIs) dem Kunden zur Verfügung gestellt, um 

weitere Entscheidungsprozesse zu unterstützen und kontinuierlichen 

Mehrwert zu schaffen. Auf diese Weise wird sichergestellt, dass der 

Kunde und die Labore dauerhaft von den Vorteilen der Outsourcing- 

Partnerschaft profitieren. 

PerkinElmer hat sich mit seinem OneSource®-Angebot einen 

Ruf als zuverlässigen Serviceanbieter erworben und arbeitet mit 

zahlreichen führenden Laboren aus dem Pharma-, Biotechnologie 

und Umweltprüfungs-Sektor zusammen. Seit der Einführung von 

OneSource® in den neunziger Jahren hat PerkinElmer beträchtliche 

Investitionen in Personal, Prozesse und Systeme getätigt und bietet 

die derzeit auf dem Markt umfassendsten Laborservicelösungen für 

Geräte verschiedenster Hersteller an. 



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QUANTIFYING. 

Will Coulter 

One Source Business Leader 

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iTRAQ: Identifizierung 

unkonventionell 

sekretierter Proteine 

Dr. Martin Keller und Dr. Hans-Dietmar Beer, Institut für Zellbiologie, ETH Zürich 

Die klassische Sekretion von Proteinen aus Säugerzellen beruht auf dem Erkennen aminoterminaler 

Signalpeptide und dem Transport dieser Proteine durch das Endoplasmatische Retikulum 

(ER) und den Golgi-Apparat. Die proinflammatorischen Zytokine Pro-Interleukin(IL)-1a und -b 

und eine Reihe anderer Proteine werden jedoch ohne ein solches Signalpeptid aus der Zelle 

geschleust. Dies geschieht durch die nur in Ansätzen verstandene ‚unkonventionelle Sekretion‘. 

Die durch Stress in Inflammasomkomplexen aktivierte Protease Caspase-1 ist essentiell für die 

Aktivierung von proIL-1b, und Zellen ohne Caspase-1 schleusen kein IL-1b, zugleich aber auch 

weniger IL-1a aus. Um die Funktion von Caspase-1 bei der unkonventionellen Sekretion zu untersuchen, 

haben wir das Sekretom nach Aktivierung von Caspase-1 mittels iTRAQ-Proteomanalyse 

charakterisiert. Dabei zeigte sich, dass Caspase-1 für die Sekretion zahlreicher Proteine ohne 

Signalpeptid verantwortlich ist. Deren Eigenschaften sprechen dafür, dass die von Caspase-1 

regulierte unkonventionelle Sekretion ein inflammatorischer Weg ist, der die Entzündung des 

Gewebes direkt mit dessen Regeneration und dem Überleben der die Entzündung auslösenden 

Zellen verbindet 1 . 

Die Cysteinprotease Caspase-1 ist essentiell für 

die Aktivierung des proinflammatorischen Zytokins 

proIL-1b in Makrophagen. Makrophagen 

ohne Caspase-1 schleusen deshalb kein IL-1b 

aus. Überaschenderweise sekretieren diese 

Zellen aber auch weniger IL-1a, obwohl dieses 

Zytokin kein Substrat des Enzyms ist und auch 

in der Pro-Form an den IL-1-Rezeptor binden 

kann 2 . Caspase-1 wird initial als ein inaktives 

Vorläuferprotein hergestellt, die Aktivierung 

des Prä-Enzyms findet in sogenannten Inflammasomkomplexen 

statt 3 (vgl. Hintergrund 

1). Keratinozyten, welche die äußerste Haut- 

Laborwelt Hintergrund 1 

schicht (Epidermis) aufbauen, sekretieren nach 

UV-Bestrahlung große Mengen an IL-1b, was 

Sonnenbrand hervorruft. Erst kürzlich wurde 

gezeigt, dass dies ebenfalls von Caspase-1 und 

Inflammasomproteinen abhängt 4,5 . In Caspase- 

1-Knock-out-Mäusen ist der Sonnenbrand 

deutlich schwächer ausgeprägt 4,5 . Interessanterweise 

werden nicht nur IL-1a und -b ohne 

eine Signalsequenz über den unkonventionellen 

Mechanismus aus der Zelle geschleust 6,7 . Auch 

Caspase-1 selbst und andere Inflammasomproteine 

besitzen keine Signalsequenz, befinden 

sich aber nach UV-Bestrahlung trotzdem im 

Aktivierung von Inflammasomen führt zur Entzündung 

Inflammasome (hier: NALP3-Inflammasom) 

sind Proteinkomplexe, die für die Aktivierung 

der Protease Caspase-1 benötigt werden 3 . 

Caspase-1 kann dann das proinflammatorische 

Zytokin proIL-1b aktivieren, dessen Ausschleusung 

durch Rekrutierung und Aktivierung 

inflammatorischer Zellen zur Entzündung 

führt. Inflammasome werden durch bakterielle 

Toxine, virale DNA und bakterielle RNA 

aktiviert 3 . Zytoplasmatische DNA – und damit 

auch jede Transfektion – führt ebenfalls zu 

einer Aktivierung der Caspase-1 9 . Dies gilt 

auch für Harnsäurekristalle, die für die Gicht 

verantwortlich gemacht werden 3 , und Asbest- 

oder Silikonpartikel 10 . Auch Keratinozyten exprimieren 

Inflammasomkomplexe, die durch 

UV-Strahlen aktiviert werden 4,5 . 

Abb. 1: Sekretomanalyse von Keratinozyten 

nach UVB-Bestrahlung 

Überstand der Zellen 4,5 . Diese Ergebnisse lassen 

eine Funktion des Inflammasoms und insbesondere 

von Caspase-1 bei der unkonventionellen 

Sekretion möglich erscheinen. 

Die Sekretion von IL-1a und FGF-2 

hängt von Caspase-1 ab 

Unkonventionell sekretierte Proteine besitzen keine 

Signalsequenz und werden nicht glykosyliert. 

Da der Mechanismus dieses Sekretionsweges 

nicht verstanden ist, kann die unkonventionelle 

Sekretion weder verfolgt noch inhibiert werden 6 . 

Deshalb ist es nur unter Schwierigkeiten möglich, 

die unkonventionelle Sekretion von Proteinen zu 

beweisen und diese von der passiven Freisetzung 

durch Zelllyse zu unterscheiden, insbesondere, 

weil die unkonventionelle Sekretion durch 

Stress-verursachende Faktoren induziert wird 

und deshalb auch immer zur Zelllyse führt 6,7 . 

Eine essentielle Kontrolle von Experimenten 

zur unkonventionellen Sekretion stellt deshalb 

der Nachweis von cytoplasmatischen Proteinen 

im Überstand und in den aktivierten Zellen dar, 

da deren Quantifizierung eine Abschätzung der 

Zelllyse erlaubt. Lactatdehydrogenase (LDH) und 

b-Aktin sind hierfür besonders geeignet 1 . Wenn 

die Caspase-1-Aktivität in Keratinozyten inhibiert 

oder die Expression der Protease reduziert wird, 

dann sekretieren auch diese Zellen nach UV- 

Bestrahlung signifikant weniger proIL-1a 1 . 

Fibroblast Growth Factor 2 (FGF-2), der eine 

wichtige Rolle bei der Reparatur des Gewebes 

und bei der Angiogenese spielt, besitzt ebenfalls 

keine Signalsequenz und wird unkonventionell 

sekretiert 6 . Interessanterweise hängt die 

Menge des von UVA-bestrahlten Fibroblasten 

sekretierten FGF-2 ebenfalls von der Expression 

und der Aktivität von Caspase-1 ab 1 . 

Identifizierung der Caspase-1- 

abhängigen Sekretion mittels iTRAQ 

UV-bestrahlte Keratinozyten bieten sich wegen 

ihrer Robustheit zur systematischen Identifizierung 

von Proteinen an, die abhängig von der 

Caspase-1-Aktivität und -Expression sekretiert 

werden. Zusätzlich lässt sich in diesen Zellen die 


Laborwelt Hintergrund 2 

Vergleich von Proteinen in verschiedenen Proben durch iTRAQ 

Die kürzlich entwickelte iTRAQ-Methode – 

eine Weiterentwicklung der ICAT-Methode – 

erlaubt den Vergleich von Proteinen in mehreren 

Proben ohne Verwendung von 2-D-Gelen 8 . 

iTRAQ beruht auf der unterschiedlichen chemischen 

Markierung (Tag) der Aminotermini 

von Peptiden, die durch Trypsin-Verdau aus 

Proteinen mehrerer Proben hervorgegangen 

sind. Die markierten Peptide werden dann 

vereint, fraktioniert und mit MALDI-MS/MS 

analysiert. Durch Datenbankvergleich werden 

die korrespondierenden Proteine identifiziert. 

Die Fragmentierung der an die Peptide gebundenen 

Tags führt zu einer Generierung von 

Reporterionen, die jeweils spezifisch für die 

Marker-Tags sind. Die Messung der Intensität 

dieser Reporterionen erlaubt eine relative 

Quantifizierung der durch Trypsinverdau 

erhaltenen Peptide. Damit lässt sich das Vorkommen 

von Proteinen in mehreren Proben 

relativ zueinander quantifizieren. 

Expression oder Aktivität von Caspase-1 mittels 

siRNA oder Inhibitoren sehr efffizient und schonend 

reduzieren 4 . Gleichwohl muss erwartet 

werden, dass sich auch im Überstand dieser 

Zellen eine große Menge an intrazellulären Proteinen 

findet, die von lysierten Zellen freigesetzt 

wurden. Zusätzlich werden natürlich sekretierte 

Protein mit Signalsequenz ganz unabhängig 

von der Caspase-1-Aktivität ausgeschleust. Also 

geht es darum, eine Methode zur Identifizierung 

von Proteinen zu verwenden, die trotz eines 

starken Auftretens vieler Proteine in gleichen 

Mengen (Caspase-1-unabhängige Sekretion und 

Freisetzung wegen Zelllyse) in beiden Proben 

eine Identifizierung der differentiell sekretierten 

Proteine (Caspase-1-abhängige Sekretion) 

erlaubt. Diese Voraussetzungen erfüllt das 

iTRAQ-Verfahren (isobaric tags for relative and 

absolute quantitation) 8 (vgl. Hintergrund 2). 

Primäre Keratinozyten wurden entweder 

mit Caspase-1-Inhibitoren behandelt, oder die 

Expression der Protease wurde mit Hilfe von 

siRNAs in einem unabhängigen Experiment 

reduziert (siehe Abb. 1). Vier Stunden nach 

der UV-Bestrahlung dieser Zellen sowie von 

Kontrollzellen wurden die Überstände isoliert, 

konzentriert und nach einem Verdau der Proteine 

mit Trypsin mit den iTRAQ-Tags markiert. 

Nach der Vereinigung beider Proben und einer 

Fraktionierung erfolgte die Analyse mittels 

MALDI-MS/MS (vgl. Hintergrund 2). Wie erwartet, 

ist die Sekretion oder passive Freisetzung 

der meisten Proteine nicht abhängig von der 

Caspase-1-Aktivität oder -Expression (iTRAQ- 

Verhältnis um 1). Aber eine Reihe von Proteinen, 

die im Überstand der Kontrollzellen in deutlich 

größerer Menge auftraten (iTRAQ-Verhältnis 

>1), wurde identifiziert (siehe Tabelle 1, Seite 36). 

Die iTRAQ-Ergebnisse wurden für verschiedene 

Proteine mittels Western-blot in Keratinozyten 

und aktivierten Makrophagen verifiziert 1 . 

Schlussfolgerungen: iTRAQ 

Obwohl die überwiedende Mehrzahl der 

Proteine in gleichen Mengen im Überstand 

der Caspase-1-inhibierten Keratinozyten und 

Kontrollzellen zu finden war, gelang mit der 

iTRAQ-Methode die Identifizierung einer Reihe 

von Proteinen, deren Sekretion von der Caspase-1-Expression 

und -Aktivität abhängt. Für 

alle untersuchten iTRAQ-Kandidaten gelang 

eine Verifizierung der Caspase-1-abhängigen 

Sekretion sowohl in Keratinozyten als auch in 

Makrophagen. Damit hat sich iTRAQ als eine 

der Aufgabenstellung gewachsene Methodik 

erwiesen, die zudem experimentell leicht und 

schnell durchzuführen ist. 

Schlussfolgerungen: Caspase-1 

und unkonventionelle Sekretion 

Von einer Reihe der mit dem iTRAQ-Verfahren 

identifizierten Proteine (siehe Tabelle 1) war 

eine unkonventionelle Sekretion bereits 

bekannt 6,7 , nicht dagegen die Abhängigkeit 

ihrer Sekretion von Caspase-1. Zudem wurden 

Proteine identifiziert, die trotz des Fehlens 

einer Signalsequenz verstärkt von Kontroll- 

Keratinozyten ausgeschleust wurden. Einige 

dieser Proteine (z.B. Bid) haben keine bekannte 

extrazelluläre Funktion, spielen jedoch eine 

wichtige intrazelluläre Rolle in der Apoptose. Die 

Sekretion dieser Proteine wie auch die Sekretion 



Protein Funktion Subz. Lokalisation SP Sekretion Caspase-1 siRNA YVAD 

Death-associated protein 1 (P51397) Induktion TNF-assoziierter Apoptose ZP – unbekannt 2.747 

Synaptotagmin-2 (A0FGR8) regul. Freisetzung v. Neurotransmitter TMP – unbekannt 2.460(±0.884) 

Testin (Q9UGI8) Tumorsuppressor; induziert Apoptose ZP – unbekannt 2.114 1.211 

Galectin-1 (P09382) reguliert Apoptose, Differenzierung u. 

Immunantwort 

ZP, EZ – unkonventionell 1.930(±0.274) 0.939(±0.136) 

Urokinase (Q5SWW8) aktiviert Plasminogen – unbekannt 

Bid (P55957) Apoptose ZP, mitoch. Membran – unbekannt 1.889 

Annexin A4 (Q6LES2) bindet Phospholipide unbekannt – unbekannt 1.687(±0.270 1.332(±0.250) 

IL-1alpha (P01583) proinflammatorisches Zytokin ZP, EZ – unkonventionell 1.666(±0.324) 

Destrin (P60981) Aktin-Depolymerisation ZP – unbekannt 1.631(±0.181) 0.867(±0.095) 

Maspin (P36952) Protease-Inhibitor; Matrix-Degeneration ZP, EZ – unbekannt 1.527(±0.244) 

LDL receptor (P01130) bindet LDL TMP + klassisch 1.472(±0.100) 1.093(±0.123) 

Thioredoxin-1 (P10599) Redox-Regulation ZP, EZ – unkonventionell 1.426(±0.073) 0.957(±0.257) 

ASC (Q9ULZ3) Komponente des Inflammasoms ZP, EZ – unkonventionell 1.420 0.991(±0.038) 

Galectin-3 (P17931) Lektin, welches IgE bindet Nukleus, EZ – unkonventionell 1.327(±0.152) 1.220(±0.095) 

IL-1Ra (P18510) inhibiert IL-1R Typ I; IL-1-Antagonist ZP, EZ + klassisch 1.221(±0.096) 1.220(±0.201) 

LDH (P00338) Metabolismus; Lyse-Marker ZP – nein 1.096(±0.083) 1.071(±0.204) 

Gelsolin Zellmotilität ZP, EZ + klassisch 1.077(±0.135) 

Thymosin beta-10 (P63313) zytoskelettale Organisation ZP, EZ - unkonventionell 0.919(±0.150) 1.255(±0.194) 

Cystatin-A (P01040) inhibiert Cathepsin ZP, EZ - unkonventionell 0.827(±0.105) 1.251 

GAPDH (P04406) Metabolismus ZP - unbekannt 0.464(±0.026) 0.699(±0.050) 

EPLIN (Q59FE8) Aktindynamik ZP - unbekannt 1.069(±0.166) 0.742(±0.089) 

Tab. 1: Funktion und Eigenschaften ausgewählter mittels iTRAQ (letzte beide Spalten) identifizierter Proteine. Keratinozyten wurden vor der 

UV-Bestrahlung mit Caspase-1-Inhibitor (YVAD) oder siRNA gegen Caspase-1 (siRNA) behandelt. Angegeben sind die Mittelwerte und 

das 95%ige Vertrauensintervall aller identifizierten und quantifizierten Peptide eines Proteins. Abkürzungen: ZP, Zytoplasma; EZ, extrazellulär; 

TMP, Transmembranprotein, SP, Signalpeptid. 

von Caspase-1 selbst könnte ein Überleben 

der Zellen erleichtern. Die Aktivierung von 

Caspase-1 in Inflammasom-Komplexen führt 

also nicht nur zur Aktivierung von proinflamma 

torischen Zytokinen wie proIL-1b, sondern 

auch zur Induktion der unkonventionellen 

Abb 2: Modell der Caspase-1-abhängigen Protein-Sekretion. 

Sekretion anderer Proteine (siehe Tabelle 1). 

Diese Proteine modulieren die Entzündung 

(MIF), spielen eine Rolle bei der Gewebereparatur 

und Angiogenese (FGF-2), befreien 

das Gewebe von reaktiven Sauerstoffspezies 

(ROS) (Thioredoxin-1, Peroxiredoxin-1) oder 

sind proapoptotisch (Bid) (vgl. Abbildung 2). 

Caspase-1 und Inflammasome spielen also eine 

deutlich vielschichtigere Rolle bei der Entzündung 

als bisher angenommen. 

Literatur 

[1] Keller, M., Rüegg, A., Werner, S., Beer, H.-D., Cell 132 (2008), 

818-831 

[2] Kuida, K., Lippke, J.A., Ku, G., Harding, M.W., Livingston, D.J., 

Su, M.S., Flavell, R.A., Science 267 (1995), 2000-3 

[3] Ogura, Y., Sutterwala, F.S., Flavell, R.A., Cell 126 (2006), 

659-662 

[4] Feldmeyer, L., Keller, M., Niklaus, G., Hohl, D., Werner, S., Beer, 

H.-D., Curr. Biol. 17 (2007), 1140-1145 

[5] Faustin, B., Reed, J.C. Trends Cell Biol. 18 (2008), 4-8 

[6] Nickel, W. Eur. J. Biochem. 270 (2003), 2109-2119 

[7] Rubartelli, A., Curr. Med. Chem. 4 (2005), 133-40 

[8] Ross, P.L., Huang, Y.N., Marchese, J.N., Williamson, B., Parker, 

K., et al., Mol. Cell. Proteomics 3 (2004), 1154-1169 

[9] Muruve, D.A., Petrilli, V., Zaiss, A.K., White, L.R., Clark, S.A., 

Ross, P.J., Parks, R.J., Tschopp, J., Nature 452 (2008), 103-7 

[10] Dostert, C., Petrilli, V., Van Bruggen, R., Steele, C., Mossman, 

B.T., Tschopp, J., Science (2008), Apr 10, Epub ahead of print 


Dr. Hans-Dietmar Beer 

ETH Zürich-Institut für Zellbiologie 

Schafmattstr. 18 

CH-8093 Zürich 

Tel.: +41-(0)44-633-3405 

Fax: +41-(0)44-633-1174 

dietmar.beer@cell.biol.ethz.ch 

www.cell.biol.ethz.ch 


Verstärkung der 

Chemosensitivität von 

Tumorzellen mittels RP101 

Prof. Dr. Rudolf Fahrig, RESprotect GmbH, Dresden 

Die Chemotherapie ist derzeit die Standardtherapie für Krebserkrankungen. Die für die 

Therapie eingesetzten Zytostatika treiben Tumorzellen in den Selbstmord. Leider ist die erfolgreiche 

Behandlungsperiode mit den gegenwärtig auf dem Markt befindlichen Zytostatika 

meist nicht lang genug, um den Tumor gänzlich zu vernichten. Der Tumor entwickelt nämlich 

Abwehrmechanismen gegenüber der Behandlung; er wird resistent. Die von RESprotect 

entwickelten Arzneimittel verhindern diese Resistenzbildung von Tumorzellen gegenüber 

Chemotherapien und erhöhen die Immunabwehr der Patienten. Im Gegensatz zu den seit 

Jahrzehnten bekannten und meist erfolglosen Versuchen, existierende Chemoresistenzen 

zu umgehen oder zu mindern, gibt es für diesen technologischen Ansatz weltweit keine 

Konkurrenz. Das erste von uns entwickelte Arzneimittel RP101 zeigte in Kombination mit 

Zytostatika in zwei kleinen klinischen Studien mit Bauchspeicheldrüsen-Krebspatienten 

eine lebensverlängernde Wirkung, welche jene bisheriger Therapien bei weitem übertraf. 

Darüber hinaus führte die RP101-Behandlung zu keinen schädlichen Nebenwirkungen, wie 

sie bei Behandlung mit Zytostatika immer zu beklagen sind. Da RP101 potentiell mit jedem 

Zytostatikum und bei allen Krebsarten wirken sollte, eröffnen sich neue Möglichkeiten für 

die Chemotherapie und damit für die Patienten. 

Die von RESprotect genutzte Technologie, die 

Chemogenomik, besteht in der Verwendung 

kleiner Moleküle (small molecules), welche 

die Expression bestimmter Gene in einer für 

den Patienten günstigen Weise beeinflussen. 

Die Konzentration auf bestimmte biologische 

Prozesswege führt zu einem besseren 

Verständnis der Wirkung eines Arzneimittels. 

Auf diese Weise ist die Entdeckung von 

Arzneimitteln möglich, deren Wirkung auf 

die Ursachen und nicht die Symptome einer 

Krankheit gerichtet ist. Die Arzneimittel von 

RESprotect werden zusätzlich zur Standard- 

Chemotherapie verabreicht. Die Chemotherapie 

beruht darauf, dass Tumorzellen in den 

Selbstmord (Apoptose) getrieben werden. 

Hauptproblem der Chemotherapie ist das 

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Auftreten von Chemoresistenz, welche die 

Apoptose verhindert. 

Die RESprotect-Technologie, die Chemogenomik, 

führt zur Identifizierung von 

Zielgenen, die an der Entwicklung der Chemoresistenz 

beteiligt sind. 

Unser erstes Arzneimittel RP101 unterdrückt 

die Überexpression Apoptose-hemmender 

Gene, die durch die Behandlung mit 

Zytostatika induziert wird. 

RP101-Effekt auf Pankreaskrebszellen 

In Pankreaskrebszellen (Bauchspeicheldrüsenkrebszellen) 

wird das Onkogen, das 

heißt krebserzeugende Gen STAT3 häufig 

überexprimiert und durch die Zytostatika- 

Abb. 1: Wirkung von RP101 auf STAT3-Proteinmenge 

(1,2 und 3 stellen die Ergebnisse 

von drei unabhängig durchgeführten 

Versuchen dar). 

behandlung noch weiter hochreguliert. Hierdurch 

wird die durch Zytostatika induzierte 

Apoptose (Selbstmord der Tumorzellen nach 

Schädigung) verhindert und die Krebszellen 

zeigen dementsprechend keinerlei Reaktion 

auf eine Chemotherapie. 

Die RP101-Ko-Behandlung verhindert 

jedoch die Hochregulierung von STAT3 und 

dessen Zielgen VEGF und macht die Zellen 

hierdurch empfindlich gegenüber der Chemotherapie. 

Behandlung mit Zytostatika führt in 

Krebszellen zur Schädigung der Erbsubstanz 

DNA und treibt die Zelle hierdurch zum 

Selbstmord. Tumorzellen, insbesondere 

Pankreaskrebszellen können dem Selbstmord 

(Apoptose) durch Überexpression des 

DNA-Reparaturgens APEX/ref-1 entgehen 

und hierdurch resistent gegenüber der Chemotherapie 

werden. RP101-Ko-Behandlung 

verhindert diese Überexpression und erhält 

auf diesem Wege die Empfindlichkeit der 

Tumorzellen gegenüber der Zytostatikabehandlung 

aufrecht. 

Spezifisch in Pankreaskarzinomzellen wird 

durch RP101-Ko-Behandlung die Hochregulierung 

der Uridin-Phosphorylase (UPase) 

verhindert. 

Die Expression der UPase scheint durch 

Onkogene, Tumorsuppressor-Gene und 

Zytokine kontrolliert zu werden, und die 

Aktivität der UPase ist in Tumoren meist 

höher als in gesundem Gewebe. Patienten 

mit erhöhtem UPase-Spiegel haben eine 

schlechte Prognose. 


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Tab. 1: Genregulation in Pankreaskrebszellen als Resultat der RP101-Behandlung – 

Quantitative real-time PCR 

Genregulation als Resultat 

der RP101-Behandlung 

uridine phosphorylase, UPase BxPC-3 

AsPC-1 

natural killer cell transcript 4, 

NK 4, IL-32 

lymphotoxin-alpha, LTB 

tumor necrosis factor C 

lymphotoxin beta, LTA, tumor 

necrosis factor beta 

tumor necrosis factor LIGHT, 

TNFSF14 

Hum. Pankreas- 

Adeno karzinom- 

Zellinie 

CAPAN-2 

AsPC-1 

CAPAN-2 

AsPC-1 

CAPAN-2 

AsPC-1 

CAPAN-2 

AsPC-1 

ICAM-1 CAPAN-2 

AsPC-1 

VEGF, vascular endothelial 

growth factor 

APEX, ref-1, apurinic 

endonuclease 

CAPAN-2 

AsPC-1 

Spezifisch in Pankreaskarzinomzellen werden 

durch RP101-Ko-Behandlung die Lymphotoxine 

alpha und beta, das „natural 

killer cell trancript 4“, der „tumor necrosis 

factor LIGHT“ und ICAM-1 hochreguliert. 

Die Produkte dieser Gene erhöhen die Anti- 

Tumor-Immunität. Die Wirkungen von RP101 

in Pankreaskrebszellen auf Genebene finden 

sich in Tabelle 1. 

In Abbildung 2 ist zu sehen, dass Kobehandlung 

mit RP101 die Wirkung von „killer cells“ 

erhöht, also einen positiven Einfluss auf die 

Immunabwehr ausübt. Die gelben Flächen 

zeigen die durch Abtötung der Tumorzellen 

entstandenen Lücken im Zellrasen. 

Wirkung auf Krebspatienten 

In zwei voneinander unabhängigen Phase I/ 

II-Studien mit metastasierten Bauchspeicheldrüsenkrebspatienten 

wurde RP101 in Kombination 

mit Gemcitabin, der gegenwärtigen 

Standardtherapie, sowie mit Gemcitabin 

+ Cisplatin eingesetzt. Diese Ergebnisse 

wurden kürzlich veröffentlicht 1 . Die RP101- 

Ko-Behandlung führte zu einer ungefähren 

Verdoppelung der medianen Überlebenszeit. 

Darüber hinaus lebten vier- beziehungsweise 

fünfmal mehr Patienten mit Fernmetastasen 

(Stadium IV) ein Jahr oder länger im Vergleich 

zu den Patienten, die mit Chemotherapie 

allein behandelt worden waren. 

Phase II – Pilotstudie 

Dreizehn Patienten mit Metastasen (neun 

mit Fernmetastasen in Stadium IV und 

vier mit Nahmetastasen in Stadium III der 

Krankheit) wurden mit in einer klinischen 

Phase II-Studie mit Gemcitabin, Cisplatin 

und RP101 behandelt. 77% der Patienten mit 

RP101 vs. DMSO 

Kontrol. (%) 

keine Veränderung 

q 64 

q 160 

q 50 

q 180 

q 370 

q 20 

q 70 

q 10 

q 30 

q 32 

q 53 

Q 37 

Q6 

Gemcitabine + RP101 

vs. GEM allein (%) 

Q 66 

Q 73 

q 125 

q 63 

q 224 

q 760 

q 76 

q94 

q 85 

q 200 

q 54 

q 135 

Q 34 

Q 27 

CAPAN-2 keine Veränderung Q 36 

Fernmetastasen lebte länger als ein Jahr nach 

Start der Behandlung. Dies bedeutet, dass 

von den Patienten in Stadium IV viermal mehr 

ein Jahr überlebten als Patienten, die nur mit 

Zytostatika behandelt wurden. 

Phase II – Dosis-Findungs-Studie 

Eine Phase II-Dosis-Findungs-Studie mit 

22 metastasierten Patienten wurde in drei 

Zentren in Deutschland durchgeführt. Die 

Ergebnisse stimmten mit denen der Pilotstudie 

überein. Die Ein-Jahres-Überlebensrate 

betrug 43%. 

Alle diese Patienten waren in Stadium IV, 

hatten also Fernmetastasen (Leber, Lunge 

etc.). Von diesen Patienten mit der normalerweise 

geringsten medianen Überlebenszeit 

erlebten fünfmal mehr ein Jahr als Stadium 

IV-Patienten der Kontrollgruppe. Die jetzt 

A 

D 

Abb. 2: Wirkung von RP101 auf die zytolytische Aktivität von NK-92-„natural killer 

cells“ . (a) CAPAN-2-Zellen+GEM. (b) CAPAN-2-Zellen+NK-92-Zellen. (c) CAPAN-2- 

Zellen+GEM+NK-92-Zellen. (d) CAPAN-2-Zellen+GEM+RP101. (e) CAPAN-2-Zellen 

+RP101+NK-92-Zellen. (f) CAPAN-2-Zellen +GEM+RP101+NK-92-Zellen. 


B 

E 

begonnene klinische Studie schließt aus 

diesem Grund ausschließlich Stadium IV- 

Patienten ein. 

Es zeigte sich hierbei außerdem die Tendenz, 

dass sich die Lebensqualität der behandelten 

Patienten durch RP101-Ko-Behandlung 

verbesserte. Es konnten keine negativen 

Nebenwirkungen festgestellt werden. Eine 

Phase II/III Studie begann im Oktober 2007 

in den USA und Europa. Etwa 55 Zentren und 

153 Patienten mit Fernmetastasen werden 

involviert sein. 

Tab.2: Überlebenszeit bei Standardtherapie, 

in der Dosisfindungs- und Pilotstudie 

Therapie 6 Monate 12-Monate 

Chemotherapie allein 

ohne RP101 

45 % 22 % 

RP101 + Gemcitabin 71 % 43 % 

RP101 + Gemcitabin + 

Cisplatin 

92 % 77 % 

Literatur 

[1] Fahrig, R., Heinrich, J.C., Nickel, B., Wilfert, F., Leisser, 

C., Krupitza, G., Praha, C., Sonntag, D., Fiedler, B., 

Scherthan, H., and Ernst, H. Cancer Res. 63 (2003) 5745 

-5753. 

[2] Fahrig, R., Quietzsch, D., Heinrich, J-C., Heinemann, V., 

Boeck, S., Schmid, R.M., Praha, C., Liebert, A., Sonntag, 

D., Krupitza, G., and Haenel, M. Anti-Cancer Drugs 17 

(2006) 1045-1056. 


Prof. Dr. Rudolf Fahrig 

RESprotect GmbH 

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Tel.: +49-(0)351-450-3201 

Fax: +49-(0)351-450-3210 

fahrig@resprotect.de 

www.resprotect.de 

C 

F

Ionenkanal-Screening 

auf den Kopf gestellt 

Martina Knirsch, Albrecht Lepple-Wienhues, Dirck Lassen, flyion GmbH, Tübingen; 

Emmanuel Bourinet, IGH CNRS, Institute de Genomique Fonctionelle, Montpellier 

Pharmakologische Studien an Ionenkanälen gewinnen in der Arzneimittelforschung zunehmend 

an Bedeutung. In den vergangenen Jahren konnten immer häufiger Zusammenhänge zwischen 

Ionenkanalproteinen, einer Vielzahl von Erkrankungen und pharmakologischen Nebenwirkungen 

aufgeklärt werden. Die größte Herausforderung bei der Entwicklung ionenkanalspezifischer 

Arzneimittel besteht in dem für deren funktionelle Untersuchung notwendigen aufwendigen 

Messverfahren. Als beste Methode hierfür hat sich die Patch Clamp-Technik weltweit etabliert. 

Da die manuelle Handhabung der Patch Clamp-Technik ein hohes Maß an Erfahrung und Fingerspitzengefühl 

erfordert und zudem der Messdurchsatz limitiert ist, gab es in den vergangenen 

fünf Jahren zahlreiche Ansätze, diese Methode zu automatisieren und zu vereinfachen. Dennoch 

erweisen sich viele automatisierte Systeme im Vergleich zum manuellen Patch Clamp hinsichtlich 

ihrer Erfolgsraten sowie der Messqualität als unzureichend. Das im Folgenden vorgestellte 

vollständig automatisierte Patch Clamp-System basiert auf der „Flip-the-Tip“-Technologie, 

einer Invertierung des klassischen Patch Clamp-Verfahrens unter Verwendung der bewährten 

Glaspipetten. Diese Methode zeichnet sich durch maximale Erfolgsraten bei hoher Messqualität 

unter Verwendung von herkömmlichen physiologischen Lösungen ohne Zusatz von Fluorid 

sowie durch extrem schnellen Lösungswechsel (~50 ms) bei kleinsten Applikationsvolumina 

(

Blitzlicht Patch Clamp 

A 

(TRPP, Zystenniere) und Mukolipidose IV 

(TRPML) 4 führt. 

Automationsansätze 

Es gibt heute eine ganze Reihe von Methoden, 

um Kandidaten für Ionenkanalwirkstoffe zu 

testen. Hierzu zählen elektrophysiologische 

Messungen (Patch Clamp), Bindungs-Assays, 

radioaktive Flux-Assays, membranpotentialabhängige 

Fluoreszenzfarbstoffe und 

spannungsabhängiger Fluoreszenzresonanzenergietransfer 

(FRET). Jedoch lediglich das 

Patch Clamp-Verfahren erlaubt es, winzige 

Ionenströme (10 –12 A) durch Kanalproteine 

in intakten Zellen mit physiologischer 

Membran orientierung unter vollständiger 

Spannungskontrolle und exakter Beeinflussung 

der chemischen Zusammensetzung 

auf beiden Membranseiten in Echtzeit zu 

messen. 

Bei der traditionellen Patch Clamp-Technik 

wird eine Glaspipette mit einer sehr kleinen 

Öffnung an einer Zellmembran angesetzt 

und ein geringer Unterdruck zum Inneren 

der Pipette angelegt. Durch den Sog bil- 

Abb. 2: Der vollautomatische Patch Clamp- 

Roboter Flyscreen® 8500 

B 

Abb. 1: A. Konventionelles Patch Clamp: eine einzelne Zelle bildet einen Gigaseal an der Spitze 

einer Glasspipette. B: Flip-the-Tip-Patch Clamp: eine Zelle versiegelt die Pipette von 

innen und bildet dort einen Gigaseal. 

det die Zelle eine stabile Versiegelung mit 

der Glasoberfläche der Pipette aus (eine 

sogenannte Gigaohm-Versiegelung oder 

Gigaseal, da der elektrische Widerstand 

ein Gigaohm übersteigt). Der anschließend 

applizierte Unterdruck ist notwendig, um 

einen Teil der Zellmembran aufzureißen 

und so Zugang zum Intrazellularraum zu erhalten 

(Abb. 1A). Folglich können über einen 

an die Pipette angeschlossenen Verstärker 

Spannungspulse an der Zellmembran angelegt 

und der aus dem transmembranären 

Ionenfluss resultierende elektrische Strom 

gemessen werden. 

Leider ist diese konventionelle manuelle 

Technik sehr langsam und erfordert ein 

hohes Maß an Erfahrung und Fingerspitzengefühl. 

Daher wurden in den vergangenen 

fünf Jahren verschiedene Versuche unternommen, 

das Verfahren zu automatisieren 

und zu vereinfachen. Dabei haben viele automatisierte 

Geräte unerwartete Probleme, 

die zu unakzeptabel niedrigen Erfolgsraten 

bei den Messungen sowie zu Abweichungen 

der pharmakologischen Ergebnisse füh ren. 

Die Flip-the-Tip ® -Technologie 

Die meisten automatischen Verfahren führen 

das Patch Clamp-Experiment in einem 

Messgefäß durch, das einem planaren Chip 

gleicht, in den ein Loch gebohrt wurde. Aus 

diesem Aufbau resultieren Schwierigkeiten, 

die teilweise auf das verwendete Chip-Material 

zurückzuführen sind, aber auch systembedingt 

auf die planare Anordnung. 

Um diese Probleme zu vermeiden, haben wir 

uns gegen einen planaren Versuchsaufbau 

entschieden und statt dessen das klassische 

Experiment einfach auf den Kopf gestellt 

(Flip-the-Tip) 5 . Dabei wird das Patch Clamp- 

Experiment innerhalb einer herkömmlichen 

Patch-Pipette durchgeführt, indem eine 

Zellsuspension direkt in die Spitze der Pipette 

gespült wird. Der hierbei entstehende Seal 

im Gigaohmbereich entsteht äußerst schnell, 

ist extrem stabil sowie langlebig und wird 

weder durch ein Bewegen der Pipette noch 

durch das Einspülen von Lösungen beeinträchtigt 

(Abb. 1B). 

Im vollautomatischen Flyscreen®-Roboter 

(Abb. 2) und in der halbautomatischen 

PatchBox wurde diese Technologie umgesetzt. 

Während im Flyscreen die Ausbildung 

des Seals, die Etablierung der Whole Cell- 

Konfiguration und die Applikation von Substanzen 

auf drei bis sechs parallelen Kanälen 

vollautomatisiert durchführbar ist, verfügt 

dessen „kleiner Bruder“, die PatchBox, ebenfalls 

über eine integrierte Automatisierung 

des Seal- und Whole Cell-Vorgangs, erlaubt 

jedoch zugleich den Einsatz selbstgezogener 

Glasspipetten und erfordert eine manuelle 

Handhabung der Lösungen. 

An die verwendeten Materialien werden 

gerade bei pharmakologischen Anwendungen 

hohe Anforderungen gestellt. So zeigen die in 

planaren Chip-Systemen eingesetzten Kunststoffmaterialien 

insbesondere mit lipophilen 

Substanzen häufig unerwünschte Wechselwirkungen. 

Aus diesem Grund stehen Zellen, Lösungen 

und applizierte Substanzen in den von 

Flyion entwickelten Systemen ausschließlich 

mit Pipettenoberflächen aus Glas in Kontakt. 

Im Gegensatz zu anderen automatisierten 

Patch Clamp-Systemen, die den Einsatz von 

Fluorid in der Intrazellulärlösung erfordern, 

um stabile Gigaseals zu erzielen, werden in 

dem hier vorgestellten System ausschließlich 

physiologische Lösungen verwendet. Dies 

hat den Vorteil, dass damit unerwünschte 

Nebeneffekte wie Chelatbildungen des Fluorids 

mit Kalzium- und Magenesiumionen 

oder im schlimmsten Fall das Präzipitieren als 

CaF 2 und MgF 2 ausbleiben. Gravierender noch 

Abb. 3: Eine Quarzkapillare mit 170 µm Außendurchmesser 

wird in die Patch- 

Pipette eingeführt und appliziert 

dort die Wirkstofflösungen. Die 

einzelnen Videobilder wurden im 

Abstand von 100 ms aufgenommen 

und illustrieren den laminaren Fluss 

beim Lösungswechsel. 

sind die nicht kontrollierbaren Auswirkungen 

des Fluorids auf von G-Proteinen gesteuerte 

Prozesse, Phosphatasen und Kinasen sowie die 

irreversible Bindung an zytosolische Proteine 6 , 

was eine Verwendung fluoridhaltiger Lösungen 

für die Analyse zahlreicher Ionenkanäle 

ausschließt. 


Ebenfalls problematisch für pharmakologische Untersuchungen 

sind unerwünschte Wechselwirkungen mit einer zu hohen Anzahl 

applizierter Zellen, da diese aufgrund ihrer Membranlipide und 

Bindungsstellen die Abläufe an der zu untersuchenden Zelle beeinflussen 

können. In unseren Patch-Pipetten werden nur etwa 30 

bis 40 Zellen in die Spitze abgegeben und der Seal der ersten die 

„Seal Area“ erreichenden Zelle durch den anliegenden Unterdruck 

zuverlässig innerhalb von Sekunden etabliert. Die zu untersuchende 

Substanz wird über eine Kapillare nur 200 µm entfernt direkt auf die 

Zelle appliziert, was einen raschen und kompletten Austausch der 

Lösungen sicherstellt (Abb. 3). 

Dieser in anderen Patch Clamp-Technologien für die Stabilität des 

Seals oftmals kritische Prozess hat in den von Flyion entwickelten 

ChipTip-Pipetten aufgrund der Strömungseigenschaften innerhalb 

der Pipette einen Seal-stabilisierenden Effekt, was sich in den hohen 

Erfolgsraten von mehr als 70% widerspiegelt. Ebenso rasch und zu- 

Abb. 4: hERG: Dosiswirkungskurven für die Substanzen Propafenon 

und E4031 

verlässig können applizierte Substanzen wieder ausgewaschen und 

Kon trollmessungen durchgeführt werden. 

Im Verlauf klassischer manueller Patch Clamp-Ableitungen ist nach 

dem Erreichen der Whole Cell-Konfiguration häufig eine Erhöhung 

des Serienwiderstandes durch störende Mem branfragmente zu beobachten. 

Durch das Invertieren des Systems tritt dieser unerwünschte 

Anstieg des Zugriffswiderstandes bei der Flip-the-Tip-Methode 

dagegen niemals auf. Der Serienwiderstand beträgt hier weniger 

als 5 MΩ und bleibt während der Ableitungen stabil. Ein weiterer 

Vorteil dieser inversen Technologie zeigt sich in Perforated Patch- 

Experimenten. Der während des Sealvorgangs angelegte Unterdruck 

verhindert zunächst einen Kontakt der „Seal Area“ und der Zelle mit 

perforierender Intrazellulärlösung. Ist der Seal etabliert, wird der 

chemische Zugang zum Zellinneren extrem schnell hergestellt. 

Die Untersuchung physiologischer Prozesse erfordert oft temperaturabhängige 

Messungen. Diesen Anforderungen wird der Flyscreen- 

Roboter durch eine temperaturkontrollierte Innenkammer gerecht. 

Es können dabei Temperaturen in einem weiten Bereich innerhalb 

von ± 0,2°C stabil kontrolliert werden. Die Einsatzmöglichkeiten 

der Flip-the-Tip-Technik werden im Folgenden an drei Beispielen 

demonstriert. 

hERG-Screening 

Der spannungsaktivierte auswärtsgleichrichtende hERG(Human Ether- 

A-Go-Go Related Gen)-Kanal spielt beim Aktionspotential des Herzens 

für die Repolarisation eine entscheidende Rolle. Eine Blockade dieses 

Kanals kann daher zu einer Verlängerung des Aktionspotentials führen, 

dem Long QT-Syndrom. Zahlreiche Substanzen und Arzneimittel 

mussten in den vergangenen 10 Jahren vom Markt genommen werden, 

da sie als unerwünschte Nebenwirkungen die Funktionsweise des 

hERG-Kanals beeinflussten. 

Der mit dem Flyscreen Roboter-entwickelte Assay erlaubt ein 

Substanz-Screening des hERG-Kanals, wofür eine stabil transifizierte, 

induzierbare CHO (Chinese Hamster Ovary) TRex-Zellinie zur 

GE Healthcare 


Drop. Measure. Done. 

NanoVue, the easy-to-use 

spectrophotometer. 

www.gelifesciences.com/tryNanoVue 


GE Healthcare Bio-Sciences AB, Björkgatan 30, 751 84 Uppsala, Sweden 

© 2008 General Electric Company – All rights reserved. 

GE33-07. First published November 2007


Tab. 1: Vergleich der mit dem Flip-the-Tip- 

Patch-Clamp-Verfahren bestimmten 

IC50-Werte mit den im konventionellen 

Patch Clamp ermittelten Werten 

Verfügung steht. Aufgrund des schnellen 

Lösungswechsels in ChipTips konnten schnell 

und langsam wirkende Arzneimittelsubstanzen 

unterschieden werden. Abbildung 4 

(Seite 41) zeigt Dosis-Wirkungskurven von 

hERG unter Einfluss von Propafenon und 

E4031. Sämtliche auf diese Weise erhaltene 

IC50-Werte zeigen eine klare Übereinstimmung 

mit den Daten, die durch manuelle 

Patch Clamp-Messungen gewonnen wurden 

(Tabelle 1). 

T-Typ-Kanäle 

Flyscreen ® 8500 

APC (nM) 

E4031 41 34 

terfenadine 184 35 

verapamil 548 378 

quinidine 889 915 

propafenone 1060 2000 

Manual Patch 

Literature 

(nM) 

Wird eine Zelle depolarisiert, so aktiviert 

dies in neuronalen Zellen Herzmuskelzellen 

und in der glatten Muskulatur spannungsgesteuerte 

T-Typ-Kalzium-Kanäle, die durch 

den Einstrom von Kalziumionen intrazelluläre 

Prozesse wie die Kontraktion, Sekretion, 

Ausschüttung von Neurotransmittern und 

Genexpression steuern. Eine wichtige Rolle 

spielen T-Typ-Kanäle bei zellulären Schrittmacherprozessen, 

bei der Schmerzwahrnehmung 

und Sensitivierung. Bislang ist kein 

selektiver T-Typ-Kanal-Inhibitor bekannt. 

Eine gezielte Blockierung der T-Typ-Kanäle 

wäre im Hinblick auf kardiovaskuläre Erkrankungen, 

einige Formen von Epilepsie und in 

der Schmerztherapie von großer klinischer 

Bedeutung. Dieses Ziel lässt sich jedoch nur 

mit einem umfassenden Hochdurchsatz- 

Screening dieser Kanäle verfolgen. 

Die hier für den T-Typ-Kanal Ca V 3.2 

präsentierten Daten wurden an stabil 

transfizierten CHO-Zellen mit Hilfe des 

Abb. 5: Ca V 2.3: Zeitlicher Verlauf der Strom- 

Antwort auf die Einspülung von 20 

mM Ca 2+ -Lösung, gefolgt durch anschließende 

Auswaschung mit physiologischer 

Ca 2+ -Lösung. 

Flyscreen-Roboters im Perforated Patch 

gewonnen. Die Abbildungen 5 und 6 zeigen 

den raschen Effekt einer Applikation hoher 

Ca 2+ -Konzentrationen (20 mM) und die zuverlässige 

und unmittelbare Auswaschung 

durch Einspülen einer Lösung mit physiologischer 

Ca 2+ -Konzentration. Die Messungen 

zeichnen sich durch ein optimales Signal- 

Rausch-Verhältnis aus, was insbesondere 

für die Aufzeichnungen dieser kleinen Ca 2+ - 

Kanalströme wichtig ist. 

Ligandenaktivierte Rezeptoren 

Nikotinische Acetylcholinrezeptoren finden 

sich im zentralen und peripheren Nervensystem 

und werden durch die Bindung 

des Neurotransmitters Acetylcholin (Ach) 

aktiviert. Die Schließung des jeweiligen 

Kanals erfolgt spontan auch in Anwesenheit 

von Acetylcholin. Die Aktivierung des 

Kanals führt durch den Einstrom von Na + 

und Ca 2+ zu einer Depolarisation der Zelle. 

Elektrophysiologische Untersuchungen an 

ligandenaktivierten Ionenkanälen wie dem 

nikotinischen Acetylcholinrezeptor erfordern 

eine präzise Applikation des Liganden 

sowie eine gute zeitliche Auflösung der 

Daten. 

Die hier vorgestellten Daten zeigen Messungen 

des nAch-Rezeptors in der humanen 

Zellinie TE671, die eine vollentwickelte Form 

dieses Kanals exprimiert (Abb. 7). Hierfür wurden 

Experimente mit ChipTips im Perforated 

Patch durchgeführt und dabei 10 µM Ach in 

Abständen von 12 s appliziert. Die Abbildungen 

zeigen eine gute Auflösung dieser kleinen 

Amplituden und die präzise Applikation des 

Liganden. 

Fazit 

Die automatisierte Flip-the-Tip-Methode in 

Verbindung mit den speziell entwickelten 

ChipTip-Pipetten überwindet die Einschränkungen 

planarer Patch Clamp-Systeme. Es 

können stabile Gigaseals und Whole-Cell- 

Konfigurationen erhalten werden. Unspezifische 

Bindung von Substanzen an verwendete 

Materialien wird durch den Einsatz von Glas 

vermieden. Für eine einzelne Messung sind 

weniger als 50 Zellen notwendig, und die Zugabe 

von Wirkstofflösungen kann auf Volumina 

von wenigen µl beschränkt werden. Die 

systembedingten Vorteile des experimentellen 

Aufbaus sind extrem schnelle Lösungswechsel 

(< 50 ms), die selbst die Analyse 

schnell desensitisierender ligandengesteuerter 

Kanäle erlauben, und die Möglichkeit, 

die Geometrie und Spitzendurchmesser der 

Pipetten für spezielle Experimente maßzuschneidern, 

um beispielsweise Ionenkanäle 

subzellulärer Organellen und Bakterien zu 

untersuchen. 

Abb. 6: Ca V 2.3: Optimales Signal-Rausch- 

Verhältnis 

Abb. 7: nAch-Rezeptor : Überlagerung von 

vier wiederholten Einspülungen einer 

10 µM Acetylcholin-Lösung auf 

eine TE671-Zelle, jeweils gefolgt von 

anschließender Auswaschung. Der 

schwarze Balken repräsentiert das 

Zeitfenster der Einspülung. 

Literatur 

[1] Sanguinetti, M.C.; Jiang, C.; Curran, M.E.; Keating, M.T. 1995, 

Cell 81, 299. 

[2] Moss, A.J.; Zareba, W.; Kaufman, E.S.; Gartman, E.; Peterson, 

D.R.; Benhorin, J.; Towbin, J.A.; Keating, M.T.; Priori, S.G.; 

Schwartz, P.J.; Vincent, G.M.; Robinson, J.L.; Andrews, M.L.; 

Feng, C.; Hall, W.J.; Medina, A.; Zhang, L.; Wang, Z. 2002, 

Circulation, 105, 794. 

[3] Cox, J.J.; Reimann, F.; Nicholas, A.K.; Thornton, G.; Roberts, E.; 

Springell, K.; Karbani, G.; Jafri, H.; Mannan, J.; Raashid, Y.; Al- 

Gazali, L.; Hamamy, H.; Valente, E.M.; Gorman, S.; Williams, 

R.; McHale, D.P.; Wood, J.N.; Gribble, F.M.; Woods, C.G. 2006, 

Nature, 444, 894. 

[4] Nilius, B.; Owsianik, G.; Voets, T.; Peters, J.A. 2007, Physiol. 

Rev. 87, 165. 

[5] Lepple-Wienhues, A.; Ferlinz, K.; Seeger, A.; Schäfer, A. 2003, 

Receptors and Channels, 9, 13 

[6] Yatani, A; Brown, A.M. J. Biol. Chem. 1991, 266, 22872. 


Dr. Dirck Lassen 

Flyion GmbH 

Waldhäuser Str. 64, 72076 Tübingen 

Tel./Fax: +49-(0)7071-6888-30/-68883099 

info@flyion.com, www.flyion.com 


Marktübersicht Cell-based Assays 

Marktübersicht: Zell-basierte Assays 

Einen solchen Ansturm auf eine Marktübersicht haben wir seit langem nicht erlebt – die Zell-basierte Untersuchung aller erdenklichen biologischen 

Vorgänge ist mit den zahlreichen optisch auslesbaren Assays, den immer besseren Messverfahren und GFP-Reporterproteinen schier 

unüberschaubar geworden. Wegen der zahlreichen qualifizierten Rückmeldungen seitens der Anbieter – insgesamt 33 Firmen gaben einen 

Einblick in Ihr derzeitiges Angebot – haben wir kurzentschlossen den Umfang dieser LABORWELT-Ausgabe um 16 Seiten erweitert, um die 

Information an Sie, liebe Leser, weiterzugeben. Doch selbst das reichte nicht, um alle Informationen unterzubringen. Das Ergebnis sollte aber 

eine gute Orientierung bieten, was derzeit am Markt angeboten wird. Auch wenn wir zum Teil etwas straffen und abkürzen mussten, hoffen 

wir eine interessante Informationssammlung zusammengestellt zu haben, die Ihnen einen ersten Hinweis auf interessante Produkte und für 

Kaufentscheidungen bietet. Bitte nutzen Sie auch die Gelegenheit, an der Optimierung der Marktübersichten mitarbeiten zu können und 

nehmen Sie an unserer Leserbefragung teil – der Fragebogen liegt dieser Ausgabe bei. 

AMS Biotechnology 

(Europe) Ltd. 

63B Milton Park 

Abingdon, OX14 4RX, UK 

William Booth 

Tel.: +49-(0)69-779099 

Fax: +49-(0)69-13376880 

info@amsbio.com 

www.amsbio.com 

AMS Biotechnology 

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www.amsbio.com 

Advanced CellSystems GmbH 

Mülheimerstr. 26 

53840 Troisdorf 

Horst Fuchs 

Tel.: +49-(0)2241-1651634 

info@advancedcellsystems.com 

www.advancedcellsystems.com 

Firma/Kontakt Advanced CellSystems GmbH 

Mülheimerstr. 26 

53840 Troisdorf 

Horst Fuchs 

Tel.: +49-(0)2241-1651634 

info@advancedcellsystems.com 

www.advancedcellsystems.com 

Universal PARP Assay Kit 

Produktname AST-2000 3D Vollhautmodell EST-1000 Epidermal Skin Test High Throughput PARP 

Apoptosis Assay Kit 

Inhibitor Screening using purified PARP 

(for R&D, Pharma, Basic Research) 

PARP activity before and during 

apoptosis (for R&D, Pharma, Basic 

Research) 

Substanztestung auf Hautkorrosion nach 

OECD-Guideline TG 431; Haut irritation; 

Genotoxizität (REACH) 

Einsatzgebiete Substanztestung auf Sensibilisierung 

und Wundheilung 

PAR detection via Biotin-NAD (Enzymatic 

Activity); 5 hour protocol (preparation 

plus assay) 

HT PAR ELISA (our most sensitive 

ELISA) 

EST-1000 ist ein humanes epidermales 

in vitro-Hautmodell. Die Testsubstanzen 

werden entsprechend der OECD-Guideline 

appliziert und ausgewertet. 

AST-2000 ist ein humanes Vollhautmodell. 

Die Testsubstanzen werden 

topikal appliziert und via Vitalitätstest 

ausgewertet. 

Beschreibung des 

Assays 

Colorimetric or chemiluminscent Colorimetric or chemiluminscent 

Vitalitätstest (MTT), Bestimmung der 

IL-1 alpha-Konzentration 

Messprinzip/Endpunkt Vitalitätstest (MTT), Bestimmung 

der diverser Zytokinkonzentrationen, 

Histologie 


96-well strip well format suitable for 

automation 

96 well plate format suitable for 

automation 

Das Testsystem kann vollständig automatisiert 

werden. 

Automationsgrad Das Testsystem kann vollständig automatisiert 

werden 

Sensitivity: 0.01 U PARP/well = 50,000 

cells/well 

Sensitivity: 0.1 mU PARP or 500 

cells/well 

Das Testsystem zeichnet sich durch eine 

sehr hohe Spezifität und Sensitivität aus. 

Das Testsystem zeichnet sich durch 

eine sehr hohe Spezifität und Sensitivität 

aus. 

Dynamischer Bereich/ 

Sensitivität 

Recombinant Human PARP Enzyme 

(HSA); 4-amino-1;8-naphthalimide; anti 

PAR rabbit polyclonal antibody 

Besonderheiten/Extras Auftragstestung in house Auftragstestung in house Recombinant Human PARP 

Enzyme (HSA); 4-amino-1;8naphthalimide; 

anti PAR rabbit 

polyclonal antibody 

525 Euro (excluding carriage) 525 Euro (excluding carriage) 

Preis Preis auf Anfrage, Staffelung nach Anzahl 

der Hautmodelle


BioCat GmbH 

Im Neuenheimer Feld 581, 69120 Heidelberg 

Dr. Elke Gamer 

Tel.: +49-(0)6221-7141516 

Fax: +49-(0)6221-7141529 

info@biocat.de, gamer@biocat.de 

www.biocat.de 

BD Biosciences, Discovery Labware 

Tullastr. 8-12 

69126 Heidelberg 

Dr. Peter Weiser 

peter_weiser@europe.bd.com 

Axiogenesis AG 

Nattermannallee 1 

50829 Köln 

Dr. Ralf Kettenhofen 

Tel. +49-(0)221-998818-0 

info@axiogenesis.com 

www.axiogenesis.com 

Firma/Kontakt Axiogenesis AG 

Nattermannallee 1 

50829 Köln 

Dr. Ralf Kettenhofen 

Tel. +49-(0)221-998818-0 

info@axiogenesis.com 

www.axiogenesis.com 

Multiple Substrate Array MSA 

Produktname Cor.At ® ready-to-use Cardiomyocytes µEST BD BioCaotTM Tumor Invasion Systems | BD Bio- 

CoatTM Angiogenesis Systems 

Microarray-basierte Zelladhäsionsanalyse, Vergleich 

behandelte-unbehandelte Zellen, Analyse von Zellphänotpyen 

(z.B. Morphologie) oder Zelldifferenzierung, 

die durch Proteine der extrazellulären Matrix 

(ECM) induziert werden, Untersuchung der Spezifität 

von Zell-Matrix-Interaktionen 

Tumor-Invasion Assays, Screening von anti-metastatischen 

Verbindungen | Angiogenese-Assays 

(Migration, Invasion, Tube-Formation, Screening v. 

anti-angiogenetischen Verbindungen) 

in vitro-Test zum Nachweis von Embryotoxizität 

und Teratogenität 

Einsatzgebiete Arzneimittelentwicklung , Sicherheitspharmakologie, 

Elektrophysiologie, Allo- und Xenotransplantation, 

RNA-Präparation 

Multiple Substrate Array MSA ist ein Glasträger 

(slide) mit 10 Substrat-Microarrays (14 verschiedene 

ECM-Proteine pro Microarray, je vierfach gespottet) 

und 2 Kontroll-Microarrays (nur Poly-L-Lysin). Durch 

Aufklipsen des ProPlate Multiarray Slide-Moduls auf 

d. Glasträger entsteht pro Microarray eine Inkubationskammer 

für d. Zellen. Diese werden in d. Inkubationskammern 

ausgesät, inkubiert, nicht-adhärierte 

Zellen weggewaschen und die verbleibenden Zellen 

analysiert. Die Zellen können entweder lebend oder 

nach Fixierung und Anfärben mit Farbstoffen oder 

über indirekte Immunmarkierung analysiert werden. 

Zellkultur-Inserts (klare oder BD FluoroBlokTM- Membranen) f. Migrations u. Invasions-Studien, z.T. 

Beschichtung m. extrazellul. Matrix (BD MatrigelTM : 

Invasion; Tube Formation; Fibronectin: Migration)- 

Zellkultur-Inserts (klare oder BD FluoroBlokTM- Membranen) f. Migrations- und Invasions-Studien 

– automatisiertes Imaging (Endothelial Tube 

Formation) 

Differenzierung von embryonalen Stammzellen 

zu Herzgewebe als Marker für normale Embryonalentwicklung 

| Quantifizierung der Menge an 

Herzzellen über Expression eines Reportergens 

unter Kontrolle eines herzspezifischen Promotors 

| Vergleich der Differenzierung von behandelten 

Zellen zu unbehandelten Kontrollen | Abweichung 

der Differenzierung bei den behandelten Zellen ist 

der Marker für gestörte Embryonalentwicklung 

| Vergleich der spezifischen embryotoxischen 

Wirkung mit möglicher zytotoxischer Wirkung der 

Substanz, Aussage über Prädiktionsmodell 

Cor.At ® Cells: Untersuchungen an Kardiomyocyten, 

bei denen Zellen hochrein und in reproduzierbarer 

Form benötigt werden. Zellen sind gebrauchsfertig, 

nur Auftauen erforderlich. | Cor.At ® Tox: Testkit 

zum Nachweis d. Kardiotoxizität (96-Well-Format) 

mit allen notwendigen Kontrollen | Cor.At ® Mod: 

Modell z. induzierbaren Hypertrophie | Cor.At® 

Patch: Gebrauchsfertige Zellen auf Coverslips für 

die Elektrophysiologie 


Assays 

Live cell tracking mit Fluoreszenzfarbstoffen; 

Kinetik und Endpunkt möglich, je nach verwendetem 

Farbstoff (für Kinetik: DiI; Calcein AM nur 

Endpunkt) 

Quantifizierung der Menge an Herzzellen über 

fluorometrischen Nachweis des Reportergenproduktes 

Messprinzip/Endpunkt Alle gängigen Messmethoden (wie z. B. Elektrophysiologie, 

PatchClamp) und Nachweissysteme 

(wie z. B. NRU, MTT, Troponin-ELISA, RT-PCR) 

anwendbar. 


Analyse per Mikroskop 

Mikrotiterplatten-Maßstab 

96-well-Platten verfügbar (Tumor Invasion, Endothelial 

Cell Migration, Endothelial Cell Tube Formation), 

daneben 24-well-Systeme (Endothelial Cell Invasion, 

Tumor Invasion, Endothelial Cell Migration). 


werden. 

Automationsgrad Zellen für automatisierte Verfahren (z. B. HTS) 

bestens geeignet 

nur 5.000 bis 20.000 Zellen benötigt 

abhängig v. diversen Faktoren: Zelltyp, Fluoreszenzfarbstoff, 

screening compounds, Instrument 

Das Testsystem zeichnet sich durch eine sehr 

hohe Spezifität (87%) und Sensitivität (88%) 

aus. 

Der Phänotyp der Cor.At ® -Zellen ist sehr gut charakterisiert. 

Hohe Aussagekraft und Spezifizät der 

Ergebnisse (z. B. im Nachweis von kardiotoxischen 

Substanzen) 


Sensitivität 

| Microarray-Format für die Analyse von Zelladhäsion 

| Es wird nur eine geringe Anzahl Zellen benötigt 

(5.000 bis 20.000 Zellen pro Microarray) | die Adhäsion 

von 10 verschiedenen Zelltypen an jeweils 

14 verschiedene ECM-Proteine kann gleichzeitig 

analysiert werden 

Individual Inserts verfügbar, klare und BD Fluoro- 

BlokTM-Membranen, 3.0 µm (Tumor Invasion) und 

8.0 µm (Endothelial Cell Migration & Invasion) 

Porengröße; HUVEC-Zellen f. Angiogenese-Assays, 

Calcein AM- und DiI-Farbstoffe f. Fluoreszenzbasierte 

Assays. BD FluoroBlokTM-Membran ermögl. 

Ausl. d. Platten o.zusätzl. Waschschritte 

µEST eignet sich besonders für den Einsatz 

in frühen Phasen der Substanzentwicklung 

und zur Priorisierung von Substanzen, da nur 

geringe Substanzmengen benötigt werden (5 

mg) und der Test schnelle Ergebnisse liefert. Der 

Test ist in der Lage, die teratogene Wirkung von 

Thalidomid spezifisch nachzuweisen. 

Besonderheiten/Extras Von embryonalen Stammzellen abgeleitete Kardiomyocyten 

mit hoher physiologischer Relevanz 

in Bezug auf adulte humane Kardiomyocyten | Die 

Qualität des Produkts wird durch den Hersteller 

zertifiziert | Hohe Reinheit der Zellen (99,9 %) | 

Keine arbeitsintensive Zellpräparation notwendig | 

Zellen transfizierbar 

560 Euro für 2 slides mit je 10 Substrat-Microarrays 

Preis auf Anfrage, Staffelung nach Anzahl der zu 

testenden Substanzen. 

Preis Preisliste ist über CellSystems (Tel. 

+49-(0)26449512-0) erhältlich.

Biomol GmbH 

22769 Hamburg 

Waidmannstr. 35 

Dr. Edgar Lipsius 

Tel.: +49-(0)40-853260-37 

www.biomol.de 

Firma/Kontakt BioCat GmbH 

Im Neuenheimer Feld 581, 


Dr. Elke Gamer 

Tel.: +49-(0)6221-7141516 

Fax: +49-(0)6221-7141529 

info@biocat.de, gamer@biocat.de 

www.biocat.de 

Produktname CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 um), Colorimetric Cignal TM Reporter Assay Kits 

quantitative Erfassung der Aktivierung oder Hemmung von Signalwegen durch Proteine, niedermolekulare 

oder organische Substanzen, siRNA, shRNA, miRNA; im 96-Well-Format 

Einsatzgebiete Der CytoSelect 24-well Cell Migration Assay (8 um), Colorimetric wird für die Analyse des Migrationsverhaltens 

von Zellen eingesetzt. 

über spezifische Transkriptionsfaktoren induzierbare Reporter-Konstrukte werden in gewünschte Zell- 

Linien transfiziert | durch Co-Expression oder Stimulierung der Zellen verursachte Effekte werden mittels 

des dualen Luciferase-Reporter-Systems gemessen | für 18 Signalwege/Transkriptionsfaktoren 

Der Assay enthält Polycarbonatmembraneinsätze (Porengröße 8 µm) in einer 24-well-Platte, die die Vertiefungen 

der 24-well-Platte in eine obere und eine untere Kammer teilen und als Barriere zur Separation/ 

Unterscheidung migratorischer u. nicht-migratorischer Zellen dienen. Migratorische Zellen bilden Fortsätze 

in Richtung des chemischen Lockstoffes in d. unteren Kammer und wandern durch d. Poren der Membran 

dorthin. Nicht-migratorische Zellen verbleiben auf der Membran i. d. oberen Kammer. Migratorische Zellen 

werden angefärbt und quantifiziert. 


Assays 

Messprinzip/Endpunkt Colorimetrische Messung im ELISA-Reader (beim fluorometrischen Format im Fluorometer) Bestimmung der Luciferase-Aktivität im Luminometer (Endpunktmessung) 

Automationsgrad Mikrotiterplatten-Maßstab in hohem Maße automatisierbar 

Colorimetrischer Assay: 5.000 Zellen (Fluorometrischer Assay: 2.000 Zellen) exzellentes Signal-to-Noise-Verhältnis: bis zu 250:1 | destabilisierte Luciferase und optimierte Promotoren 

bewirken maximale Reduktion des Hintergrunds | breiter dynamischer Bereich 


Sensitivität 

jeder Kit enthält fertig einsetzbare Mischungen aus induzierbaren und konstitutiv exprimierenden Reporter-Plasmiden 

sowie Neagtiv-und Positiv-Kontrollen | auch als 10 Pathway Suites für cross-talk-Studien 

erhältlich | auch als GFP-Reporter-Assays für Zeitkurven und Einzelzell-Messungen erhältlich (Detektion 

per Fluoreszenz-Mikroskop oder Durchflusszytometer) 

Besonderheiten/Extras Assay-Dauer < 6h | Quantitativer Assay o. manuelles Auszählen | Verschiedene Formate: für colorimetrische 

oder fluorometrische Auswertung | 24-well oder 96-well-Format | als Haptotaxis-Assays beschichtet 

mit Collagen, Fibronectin | spezieller Leukocyte Migration-Assay 


Preis 325 Euro CignalTM Reporter Assay Kit: 440 Euro 

CignalTM Reporter Assay 10-Pathway Suite: 1159 Euro


CCS Cell Culture Service GmbH 

Falkenried 88 

20251 Hamburg 

Susan Friedemann 

Tel.: +49-(0)40-47196575 

Friedemann@cellcultureservice.com 

CCS Cell Culture Service GmbH 

Falkenried 88 

20251 Hamburg 

Susan Friedemann 

Tel.: +49-(0)40-47196575 

Friedemann@cellcultureservice.com 

Biopharm GmbH 

Czernyring 22 


Renate Kron 

Tel.: +49-(0)6221-5383-0 

services@biopharm.de 

www.biopharm.de 

Firma/Kontakt Bionas GmbH 

Friedrich-Barnewitz-Str. 3 

18119 Rostock 

Dr.Michael Schulze 

Tel.: +49-(0)381-5196-241 

Fax: +49-(0)381-5196-246 

bionas@bionas.de 

www.bionas.de 

HEK-AP1-SEAP recombinant Reporter Cell 

Line 

A549-NFB-SEAP, Recombinant NFB Reporter 

Cell Line 

Methodenentwicklung und -validierung nach GMP/GLP 

zum Nachweis der Wirksamkeit 

Produktname Bionas ® 2500 analyzing system Familie, 

Bionas ® metabolic chip SC100 

GLP konforme und Non-GLP CRO-Services im firmeneigenen 

Labor 

Screening for AP1-activation 

Screening of inflammatory and anti-inflammatory 

drugs 

Stabilitätsstudien, Freigabeuntersuchung, Qualitätskontrolle 

Einsatzgebiete Drug Discovery | Drug Development, Toxikologie, 

Krebsforschung/ Therapieoptimierung, Zelltherapien, 

Bioproduktion, Zellprodukte, Zellkulturmedien, Nahrungsmittelherstellung, 

Umweltmonitoring 

Assay for screening of substances for their 

activation of AP1 by quantifying SEAP expression 

in 96-well formate ready to use 

Assay for screening of substances for their 

activation of NFB by expression of SEAP 

(Secreted Embryonic Alkaline Phosphatase) 

reporter gene. 

Proliferationsassays, Cytoxitätsassays, Angiogenese- 

Assay, Differenzierungsassays u.v.m. 

Online-Monitoring lebender Zellen. Das Bionas ® analyzing 

system analysiert Effekte d. Zellstoffwechsels 

und d. Signaltransduktion auf das Zellkulturmedium. 

nicht-invasive, labelfreie, kontinuierliche Beobachtung 

d. Zellstoffwechsels in Abhängigkeit v. Testsubstanzen 

u. Kulturbedingungen. 


Assays 

measuring of SEAP expression by CSPD 

chemo-luminescent substrate 

Absorption, Floureszenz, Lumineszenz, Zellzählung measuring of SEAP concentration by chemoluminescent 

(CSPD) or fluorescent (MUP) 

substrate without the need of lyse the cells. 

Messprinzip/Endpunkt Real-time-Zellanalyse metabolisch relevanter Parameter 

wie O -Verbrauch, Ansäuerungsrate, Zelladhäsion auf 

2 

Basis v. Zell-Silikon-Hybriden. Drei Sensortypen pro 

Chip. Messung parallel u. kontinuierlich (Stunden - 

Tage) u. label-frei. Dadurch keine Beeinflussung d. 

Zellphysiologie. 

Automationsgrad Vollautomat (6 unabhängige Kanäle) mit langer walkaway-Zeit, 

Semi-Automat (2 bzw. 1 Kanal), Sicherheitsfeatures 

ermöglichen unbeaufsichtigtes Arbeiten über 

Nacht/am Wochenende 


Cedex Cell Counter Yes Yes 

Sensitivität: 0,5 ng/ml, Signal : Background 

=14.000 

Hohe Sensitivität über weiten Messbereich Sensitivität: 0,2 ng/ml, Signal : Background 

=7500 

abhängig v. Aktivität d. untersuchten Zellen. Messprinzip 

beinhaltet Relativ-Messung v. Änderungen d. 

Zellstoffwechsels nach Wirkstoffzugabe. Startpunkt wird 

auf 100% normiert. Beispielhaft können minimal 0,05 

pH-Einheiten unterschieden werden. Typ. Standardabweichung 

< 15%. 


Sensitivität 

Flexibilität, Termintreue 

Besonderheiten/Extras Patentiertes Fluidiksystem versorgt Zellen/Gewebe 

kontinuierlich m frischem Medium dadurch Langzeitmessungen 

adhärenter, suspendierter Zellen u. von 

Geweben mgl. 

18.000 Euro 18.000 Euro 

Preis Bionas ® analyzing systeme: 19.900 Euro-92.000 Euro. 

GLP- und Non-GLP-Dienstleistungen nach Aufwand und 

Fragestellung

Cytocentrics AG 

Joachim-Jungius-Str. 9 

18059 Rostock 

Tel.: +49-(0)381-4059640 

info@cytocentrics.com 

www.cytocentrics.com 

Cytocentrics AG 

Joachim-Jungius-Str. 9 

18059 Rostock 

Tel.: +49-(0)381-4059640 

info@cytocentrics.com 

www.cytocentrics.com 

CellSystems Biotechnologie Vertrieb GmbH 

Hummelsbergerstr. 11 

53562 St. Katharinen 

Dr. Peter Frost 

Tel.: +49-(0)2644-9512 -0 

info@cellsystems.biz 

www.cellsystems.biz 

Firma/Kontakt CellSystems Biotechnologie Vertrieb GmbH 

Hummelsbergerstr. 11 

53562 St. Katharinen 

Dr. Peter Frost 

Tel.: +49-(0)2644-9512 -0 

info@cellsystems.biz 

www.cellsystems.biz 

Produktname MucilAir AngioKit CytoPAQ hERG-HEK 293 Instant Cells Kit hERG Screening Service (unter GLP und non- 

GLP) 

Sicherheitspharmakologie, Early Profiling 

Manuelle und automatisierte Patch Clamp-Technik, 

Sicherheitspharmakologie, hERG-Screening, 

fluoreszenzbasierte Assays. 

in vitro-Cokultursystem für Substanztestung auf 

stimulierende und inhibitorische Effekte im Bereich 

Angiogenese 

Einsatzgebiete Substanztestung auf toxikologische Effekte im Respirationstrakt; 

NanoTox 

Die Wirkung von Prüfsubstanzen auf eine 

mögliche Inhibierung des hERG (human Ether 

a-go-go-Related Gene)-Ionenkanals wird mit 

der Patch Clamp-Technik untersucht (manuell 

oder automatisiert). Hintergrund: Eine Hemmung 

des hERG-Ionenkanals in der Herzzelle durch 

Gabe bestimmter Arzneimittel kann zu lebensbedrohenden 

Rhythmusstörungen (Torsades de 

Pointes) führen. Durch Patch Clamp-Messungen 

in der präklinischen Phase der Medikamententestung 

werden Hinweise auf derartige Nebenwirkungen 

erbracht. 

HEK 293-Zellen, die den hERG (human Ether 

a-go-go-Related Gene)-Ionenkanal exprimieren, 

können 15 min nach Auftauen im Assay 

verwendet werden. Zellkulturarbeiten entfallen. 

Kit besteht aus qualitätsgesicherten, elektrophysiologisch 

validierten hERG- HEK293 Zellen, 

intra- und extrazellulärer Lösung und dem Cell 

Reservoir. 

Cokultursystem aus Endothelzellen und anderen 

Primärzellen 

Applikation der Testsubstanzen akut und chronisch 

(bis zu 12 Monaten) 


Assays 

Durchführung des hERG-Screenings am manuellen 

Patch Clamp-Setup und am CytoPatch- 

Automaten unter GLP- oder non-GLP-Bedingungen. 

Qualitätssicherung jeder Charge durch manuelle 

Patch Clamp-Technik. Qualitäts-Zertifikat 

standardmäßig mit elektrophysiologischen 

Parametern (Sealrate, Stromamplitude, Rundown 

and Rate der erfolgreich beendeten Ganzzellableitungen) 

Messprinzip/Endpunkt Vitalitätstest (MTT), TEER Quantifizierung der Menge an Gefäßen, Verzweigungspunkten 

und Länge der Gefäße via Oberflächenmarker 

oder ELISA 

Je nach Kundenwunsch wird das Screening am 

manuellen Patch Clamp-Setup oder am eigens 

von Cytocentrics entwickelten Patch Clamp- 

Automaten CytoPatch durchgeführt. 



Zellen können 15 Minuten nach dem Auftauen 

für Assays verwendet werden 


werden. 

Automationsgrad Das Testsystem kann vollständig automatisiert 

werden. 

Vitalität der Zellen: >90% | Sealrate: >90% | 

Whole Cell Rate: >90% | Stabilität über 25 min: 

>60% der Zellen | Stromamplitude: 1000 pA 

Das Testsystem zeichnet sich durch eine sehr hohe 

Spezifität und Sensitivität aus. 

Das Testsystem zeichnet sich durch eine sehr hohe 

Spezifität und Sensitivität aus. 


Sensitivität 

Cytocentrics bietet Assay-Entwicklung und 

-Screening mit Kundenzelllinien an 

Besonderheiten/Extras Auftragstestung bei Kooperationspartnern möglich Auftragstestung in house möglich Die Zusammensetzung der Kits erfolgt in Absprache 

mit dem Kunden und wird an dessen 

Bedürfnisse angepasst. Cytocentrics adaptiert 

weiterhin Zelllinien von Kunden an das CytoPAQ 

Instant Cells System. 

Preis auf Anfrage, Staffelung nach Format 

(24well/96well), Staffelung nach Anzahl der zu testenden 

Substanzen. 

Preis Preis auf Anfrage, Staffelung nach Anzahl der Modelle


Guava Technologies, Inc 

Kanalstr. 19/1, 72631 Aichtal 

Dr. Michael Liebler 

Tel.: +49-(0)7127 953133 

Fax: +49-(0)7127 953130 

mliebler@guavatechnologies.com 

www.guavatechnologies.com 

Guava Technologies, Inc 

Kanalstr. 19/1, 72631 Aichtal 

Dr. Michael Liebler 

Tel.: +49-(0)7127 953133 

Fax: +49-(0)7127 953130 

mliebler@guavatechnologies.com 


flyion GmbH 

Waldhäuser Str. 64, 72076 Tübingen 

Dr. Dirck Lassen 

Tel.: +49-(0)7071-6888-30 

Fax: +49-(0)7071-6888-399 

info@flyion.com, www.flyion.com 

Firma/Kontakt Eppendorf Biochip Systems GmbH 

Barkhausenweg 1 

22339 Hamburg 

Dr. Margit Stadler 

stadler.m@eppendorf.de 

Guava ViaCount Guava Nexin 

Produktname TF Chip Stem Cell Kit, TF Chip MAPK Kit | Flyscreen ® 8500 (Patch Clamp-Roboter) | PatchBox 

(Patch Clamp-Automat) | Feedback Microforge (vollautomatisches 

Mikro-Glasblasegerät ) 

Apoptose-Messung, in Medienen- und 

Zelllinienoptimierung, Target-Validierung, 

Wirksamkeitsstudien 

Zellzählung und Bestimmung der Viabilität, 

in Medienen- und Zelllinienoptimierung, 

Target-Validierung, Wirksamkeitsstudien, 

allgemeine Zellkultur 

Akademische u. pharmazeutische Ionenkanalforschung | 

Wirkstofffindungs-Screening | Lead-Optimierung | Sicherheitspharmakologie 

| biophysikal. Charakterisierung v. 

Ionenkanälen 

Einsatzgebiete Nachweis aktivierter Transkriptionsfaktoren in Kernproteinextrakten 

aus Zellkulturen 

„Mix and Read“, Messung mit Guava- 

Durchflusszytometern 

„Mix and Read“, volumetrische Messung 

mit Guava-Durchflusszytometern 

Invertierung d. klassischen Patch Clamp-Experiments (FliptheTip): 

Zellen in Suspension werden in mit extrazelluärer 

Lösung befüllte Glaspipette gesaugt. Einzelzelle versiegelt 

Spitzenöffnung u. bildet elektrisch dichte Verbindung zwischen 

Zelle und Glas („Gigaseal“). Zelle wird kontroll. aufgerissen 

– dadurch elektr. Zugang zum Zytosol. Verbleibende el. dichte 

Membranfläche wird du. Anlegen untersch.Spannungspotentiale 

stimuliert. Durch. kontroll. Änderungen d. Membranspannung 

werden d. Ionenkanäle in d. Zellmembran aktiviert. Strom 

wird über Messverstärker aufgezeichnet. 

Doppelstrang-DNA mit Konsensus-Bindungssequenz f. best. 

Transkriptionsfaktor wird auf beschichtete Glasoberfläche 

gespottet u. mit Kernproteinextrakt inkubiert; d. Nachweis 

d. Bindung an Zielsequenz erfolgt via konformationsspezif. 

Antikörper. Visualisierung via fluoreszenzmarkierte o. biotinylierte 

Sekundärantikörper sowie Anti-Biotin-Nanogold- 

Konjugat. Der Goldpartikel katalysiert die Reduktion v. 

Silbernitrat zu Silber. Mit TF Chip Kits können bis zu 12 Transkriptionsfaktoren 

in einem Assay gemessen werden. 


Assays 

Anfärbung der Zellen mit Annexin V und 

7-AAD in einem einzigen Schritt 

DNA-Färbung mit Fluoreszenzfarbstoffen 

zur Viabilitätsbestimmung und Debris- 

Diskriminierung 

In intra- o. extrazelluläre Lösung werden Wirkstoffe eingespült 

u.ihr Einfluss auf Ionenkanäle bestimmt. Aktivität 

wird als Strom/Spannungskurve bzw. Dosis/Wirkungskurve 

gemessen. | Messmethoden: Voltage Clamp; Current Clamp 

| Voltage clamp-Methoden: „Open Whole Cell“ und „Perforated 

Patch“ 

Messprinzip/Endpunkt Transkriptionsfaktor-Bindungssequenzen als Triplikate 

gespottet. Zur Messung unspezif. Bindungen sind mutierte 

Sequenzen (keinerlei spezif. Bindung) daneben gespottet. 

Weitere Negativ- Kontrollen sind in den Assay integriert. 

Quantifizierung d. Silberfärbung mittels def. Konzentrationskurve 

mit positiven Detektionskontrollen. Messung d. 

fluoreszenzgefärbten Assays via Microarray-Fluoreszenz- 

Scanner | Messung d. silbergefärbten Proben via Eppendorf 

Silverquant ® -Scanner. 

Einzel-Proben und/oder 96-Loch-Platten, 

Einbindung in Pipettierstationen verschiedener 

Hersteller möglich 

Vollautomatisch (Flyscreen) | halbautomatisch (PatchBox) Einzel-Proben und/oder 96-Loch-Platten, 

Einbindung in Pipettierstationen verschiedener 

Hersteller möglich 


Automationsgrad Niedrig; zwei Assays pro Slide, zwei Slides pro Messung im 

Silverquant ® -Scanner 

Zellkonzentrationen 5x104 bis 2x106 per ml 

Zellkonzentrationen 104 bis 2x107 per 

ml (und mehr), schon 2.000 Zellen sind 

ausreichend 

Dynamischer Bereich ≥2 Größenordnungen Durchschnittlicher Seal-Widerstand > 1 GΩ 

Durchschnittlicher Whole-Cell-Widerstand > 0,5 GΩ 

Pipettenwiderstand 0.8 – 1.3 MΩ 

Serienwiderstand < 5 MΩ 

Durchschnittliche Whole-Cell-Stabilität ~ 30 min 

Erfolgreiche Whole-Cell-Messungen > 70 % (CHO/HEK/LTK) 


Sensitivität 

Mix and Read ohne Pufferwechsel oder 

Waschschritte, besonders zellschonend 

| Extrem schneller Lösungsaustausch (~50ms) | Kleinste 

Messvolumina (

Invitrogen GmbH 

Emmy-Noether-Str. 10 

76131 Karslruhe 

euroinfo@invitrogen.com 

www.Invitrogen.com, 

In Vitro Systems & Services GmbH 

Rudolf-Wissell-Str. 28 

37079 Göttingen 

Katrin Esslinger 

Tel.: +49-(0)551-50097-329 

Fax: +49 (0)551-50097-311 

customerservice@ivss.de 

www.ivss.de 

ibidi GmbH 




Tel.: +49-(0)800-00111128 


Firma/Kontakt ibidi GmbH 




Tel.: +49-(0)800-00111128 


lumoxTM slide flask SelectScreen Cell-based Kinase/ Nuclear Receptor 

Pathway Profiling 

Produktname Cell culture Insert Electric Cell-substrate Impedance Sensing 

(ECIS) 

Zellbasierte Assays, insbesondere Fluoreszenzassays Screening von Substanzen in einer pathwayspezifischen 

Zelllinie 

Zellwachstum | Zellspreading | Zellmigration 

| Zellproliferation und Zytotoxiziät | Funktionelles 

Monitoring von Rezeptor-Aktivitäten | 

Áutomatisierte Wundheilungsassays 

Einsatzgebiete Zellwachstum | Wundheilung | Invasionsassays 

Das SelectScreen Cell-based Pathway Profiling 

basiert auf Invitrogens Bibliothek von GeneBLAzer ® - 

spezif. CellSensor ® -Zelllinien mit GeneBLAzer ® betalactamase 

(bla) Reporter-Technologie. Die Reporter- 

Assays verwenden ein beta-Laktamase-Gen, kombiniert 

mit einem FRET-aktiven Substrat. Bei exprimierter 

beta-Laktamase wird d. Substrat umgesetzt – die Zellen 

erscheinen blau. Ohne Laktamase: Grünfärbung. 

Objektträgerflasche mit gasdurchlässigem Folienboden 

mit sehr geringer Autofluoreszenz. Folien-Objektträger 

nach der Kultivierung abziehbar und für weitere 

Arbeitsschritte einfach zugänglich. Gasdurchlässige 

Wachstumsoberfläche in TC-Qualität. 

Nicht invasive Echtzeitmessung des zellulären 

Zustandes via Impedanz 

Nicht invasive Echtzeitmessung der Wundheilung/ 

Invasion via Mikroskopie | Insert bildet 

einen definierten Spalt der Breite 500 µm | 

Nach Erreichen der gewünschten Zelldichte 

wird der Steg entfernt, und die Echtzeitmessung 

beginnt. 


Assays 

Messprinzip/Endpunkt Echtzeitmessung im Mikroskop Echtzeitmessung Zellen werden mit Substrat beladen, das abhängig v. 

d. Laktamase-Expression umgesetzt wird. Im Assay 

werden Substanzen in einem Panel von den Pathwaysspezifischen 

Zelllinien bei d.EC /IC -Bestimmung 

50 50 

im Aktivierungs- (%) und Inhibierungs- (%) Modus 

gescrennt, indem 10 Messpunkte einer Dosis-Responsekurve 

bestimmt werden. 

Automationsgrad Von Einzelmessungen bis zu 24 well-Platten von 8 well- bis 96 well-Platten in Standard-Plattformen zu automatisieren | Invitrogen 

bietet einen Service an. E-Mail an: SelectScreen@ 

Invitrogen.com 



Flexibler dynamischer Bereich möglich bei hoher Sensitivität 

(Fluorezenz-Messung). 

Geringe Autofluoreszenz und hohe Transparenz des 

lumoxTM-Folienbodens ermöglicht eine verbesserte 

Mikroskopierbarkeit und Sensitivität bei fluoreszenzbasierten 

Zellassays. Gasdurchlässige Wachstumsfläche für 

optimalen O - und CO -Austausch. 

2 2 

Messungen von Einzellzellen bis zur Konfluenz 

des Zellrasens 

Messungen von Einzellzellen bis zur Konfluenz 

des Zellrasens 


Sensitivität 

Alle Zelllinien GMP-konform u. auf Mykoplasma 

getestet. Response-Elemente werden f. jede Zelllinie 

sequenziert. Stimulus/Aktivierung, Small Molecule- 

Inhibitoren , RNAi-knockdown, werden – wenn angebracht 

– für Assays getestet. Der Assay kann auch im 

Flowzytometer durchgeführt werden. 

Hervorragende optische Eigenschaften | Hohe Sensitivität 

bei Fluoreszenzmessungen | Hintergrundfreie 

Bilddarstellung | Homogenes Zellwachstum | Hohe 

Oberflächenelastizität 

Besonderheiten/Extras Kombinierbar mit Mikroskopie Kombinierbar mit Mikroskopie | Bestimmung 

der Membrankapazitäten | Bestimmung der 

Barrierefunktion bei konfluenten Zellrasen – 

Gut etabliert – mehr als 250 Publikationen 

12 Stück 79,- Euro | 96 Stück 600,- Euro 

Von ca. 15.000 bis ca. 50.000 Euro (+ 

MwSt.) 

Preis 30 Stück:150 Euro (in Petrischalen ready to 

use) | 25 Stück zum Selbsteinsetzen: 80 Euro 

(+ MwSt.)


MDS Analytical Technologies GmbH 

Gutenbergstr. 10 

85737 Ismaning 

Frank.Hafner@moldev.com 

MARINPHARM GmbH 

Im Biotechnologiepark TGZ 2 

14943 Luckenwalde 

Prof. Dr. Christian Petzelt 

Tel.: +49-(0)3371-681350 

Fax: +49-(0)3371-681348 

cpetzelt@marinpharm.com 

www.marinpharm.com 

Lonza Verviers 

www.lonza.com 

Leon de Bruin 

leon.debruin@lonza.com 

Firma/Kontakt LI-COR Biosciences GmbH 

Siemensstr. 25 A 

61352 Bad Homburg 

Dr. Sandra Scheuch 

Tel.: +49-(0)6172-1717771 

Fax: +49-(0)6172-1717799 

gmbh@licor.com 

www.licor.com 

ViaLight ® , ToxiLight ® Fluoreszierende stabil transfizierte Zell-Linien CellKey TM und CellKey TM 384 System 

Produktname In-Cell WesternTM Assay | Odyssey Infrared Imaging 

System | Aerius ® Automated Infrared Imaging System 

funktionaler zellbasierter Assay für endogene 

Rezeptoren | Evaluierung von GPCR- und Tyrosin- 

Kinase-Rezeptoren und anderen Klassen an 

Rezeptoren bzw. Targets | Identifizierung und 

Charakterisierung des Signaltransduktionsweges 

| Hit-Identifizierung und pharmakologisches 

Profiling | Target-Identifizierung und Validierung | 

RNAi-Studien zur funktionellen Inhibitierung von 

Rezeptoren | zelluläres Primärscreening 

Cell culture applications, Drug discovery screening Echtzeitdarstellung von lebenden Zellen 

oder Zellorganellen oder Einzelproteinen in 

lebenden Zellen, in-vivo-Imaging von Tumoren 

in Tieren 

Einsatzgebiete Direkte Proteindetektion (2 Targets simultan) u. Quantifizierung 

in Zellen | Quantitative Analyse zellulärer 

Signaltransduktionswege | High Throughput Screening 

| Zellbasierte IC -Bestimmung | Inhibitor/-Effektor- 

50 

Screening 

markierungsfreier, biorelevanter zellbasierter 

Assay auf 96- und 384-Mikrotiterplatten-Format 

Direktes „Sehen“, vom Gewebe im Tier bis 

zum einzelnen Protein in der lebenden Zelle 

ViaLight ® : quick and accurate analysis of cell proliferation 

and cytotoxicity in both adherent and nonadherent 

cell types. | ToxiLight ® : measuring the toxicity 

of drugs by looking at the release of adenylate 

kinase (AK) from damaged eukaryotic cells. 

Kultivierung adhärenter Zellen o. Suspensionszellen in 

Mikrotiterplatten | Zell-Behandlung (Inhibitor-Inkubation, 

Stimulierung, etc.) | Fixierung und Permeabilisierung der 

Zellen | Primärantikörper-Inkubation | Inkubation mit 2 

Sekundärantikörpern oder einem Sekundärantikörper + 

DNA-Färbung | Imaging und Quantifizierung 


Assays 

Fluoreszenzmikroskopische Auswertung nicht invasive, Impedanz-basierte, markierungsfreie, 

kinetische Messung an lebenden Zellen. 

ViaLight ® : bioluminescent detection of ATP, using the 

bioluminescent firefly luciferase reaction | ToxiLight ® : 

AK actively phosphorylates ADP to form ATP, which is 

then measured on a luminometer using the bioluminescent 

firefly luciferase reaction 

Messprinzip/Endpunkt Zellbasierter immuncytochemischer Assay, Zielprotein 

wird in Zellen nachgewiesen, Infrarotfarbstoff-markierter 

Sekundärantikörper, direkte Detektion des Fluoreszenzsignals 

u. Normalisierung gegen ein zweites 

Target ermöglichen präzise quantitative Daten 

Online Pipettor zum automatischen Pipettieren 

während des Assays. | CellKeyTM ist voll roboterintegrierbar 

Automationsgrad Aerius ® Automated Infrared Imaging System: Integrierter 

Barcode-Scanner. Scannt bis zu 30 Platten pro Lauf 

mit optionalem Stacker | Integration in vollautomatische 

Arbeitsabläufe möglich – Automatische Analyse 

für In-Cell Western- Assays 


High-Throughput-Screening je nach Zell-Linie 

möglich 

Both systems are highly automatable, can be upscaled 

to 96 or 384 wells 

markierungsfreies Messprinzip ergibt Sensitivität 

um einen großen Bereich an endogenen Rezeptoren 

messen zu können 

breiter Bereich zwischen einem vielzelligen 

Tumor im Tier bis hin zu einzelnen Proteinen 

in der Zelle, direkt sichtbar 

ViaLight ® : Dynamic range of five decades, detects 

as few as 10 eukaryotic cells | ToxiLight ® : Dynamic 

range of four decades, detects as few as 10 dead 

eukaryotic cells per well 

Dynamischer Bereich der Odyssey und Aerius ® Imaging-Systeme: 

5 log-Stufen | hochsensitiv, Nah infrarot- 

Technologie | maximale Auflösung: 21 µm 


Sensitivität 

online Pipettor 

Fast, convenient and direct measurements Auf Wunsch Generierung Klienten-spezifischer 

Zell-Linien | weltweit konkurrenzlos 

Detektion im Nahinfrarot-Bereich (700 nm, 800 nm) 

| Min. Autofluoreszenz v. Zellen u. Plastikmaterialien 

| Quantifizierung m. automat. Normalisierung auf ein 

simultan gemessenes zweites Target | Direkte Detektion 

der Proteine im zellulären Kontext (Eliminierung 

von Zelllyse-bedingten Artefakten) 

Besonderheiten/ 

Extras 

Preis ViaLight ® LT07-221: 500 tests 155 Euro; 1,000 

tests 291Euro; 10,000 tests 2501 Euro | ViaLight ® 

LT17-221: 500 tests with 5 white TC plates 193 Euro 

| ToxiLight ® LT07-217: 500 tests 173 Euro; 1,000 

tests 312 Euro | ToxiLight ® LT17-217: 500 tests with 

5 white TC plates 207 Euro

Olympus Deutschland GmbH 

Mikroskopie + Industrial Insight 

Wendenstr.14-18, 20097 Hamburg 

Tel.: +49-(0)40-237730 

Fax:+49-(0)40-230817 

mikroskopie@olympus.de 

www.olympus.de 

Merck Chemicals Ltd. 

Boulevard Industrial Park 

Padge Road, Beeston, Nottingham, NG9 

2JR, UK 

Dr. Martin Finkbeiner 

Tel.: +44-(0)115-9430840 

Fax: +44-(0)115-115-9430951 

techservice@merckbio.eu 

www.merckbio.eu 

Merck Chemicals Ltd. 

Boulevard Industrial Park 

Padge Road, Beeston, Nottingham, NG9 

2JR, UK 

Dr. Martin Finkbeiner 

Tel.: +44-(0)115-9430840 

Fax: +44-(0)115-115-9430951 

techservice@merckbio.eu 

www.merckbio.eu 

Firma/Kontakt MDS Analytical Technologies GmbH 

Gutenbergstr. 10 

85737 Ismaning 

Frank.Hafner@moldev.com 

Screening Station for Life Science scan ® 

InnoCyte Laminin-based 96-Well Cell Invasion 

Assay 

Produktname ImageXpressMICROTM Caspase-3 Detection Kit (FITC-DEVD-FMK) Cat. 

No. QIA91 

High Content Screening | Zell-basiertes Screening 

| Assay-Entwicklung | Grundlagenforschung | 

Systembiologie | Pharmazeutische Forschung Drug 

Development | Diagnostische Forschung | Routine- 

Anwendungen | Toxikologie | Target Identification | 

Target Validation 

Beurteilung der Invasionsfähigkeit (metastatisches 

Potential) von Zellen 

Messung von Apoptose in einem frühen Stadium 

in lebenden Zellen 

Einsatzgebiete zellbasierte Assays mit Fluoreszenzfarbstoffen bis 

zum 1.536 Well-Format 

Frei adaptierbares u. konfigurierbares Gesamtsystem, 

mit d. fast jeder Assay realisiert und Assay- 

Entwicklung betrieben werden kann. Hardware 

individuell anpassbar. Analyse-Software stellt von 

Bildprozessierung über Bildanalyse bis zur Datenanalyse 

und Datennavigation eine umfassende/ 

einfach zu bedienende Gesamtlösung zur Verfügung. 

Beispielassays: Zellzyklus, intrazellulärer 

Transport, Genexpression, Proteinlokalisation, 

RNAi knock-out, Genaktivierung, Membrantransport, 

Mitose, Apoptose. 

Eine Membran mit 8 µm Porengröße, beschichtet 

mit Laminin als effiziente Barriere für nicht-invasive 

Zellen, ermöglicht die Identifizierung von Zellen 

mit metastatischem Potential und das Screening 

anti-metastatischer Wirkstoffe 

FITC-DEVD-FMK ist ein zellpermeabler Inhibitor, 

der irreversibel an aktivierte Caspase-3 in apoptotischen 

Zellen bindet. 

High Content Screening, automatisierte wide-field- 

Mikroskopie 


Assays 

Vollautomatisierte Weitfeld-Fluoreszenz- und 

-Durchlichtmikroskopie, sowohl für End-Point- 

Assays mit fixierten Zellen als auch für dynamische 

Assays mit lebenden Zellen | Detektor: CCD- 

Kamera 

Zellen, die durch die Membran gewandert sind, 

werden durch Fluoreszenzfärbung (Calcein AM) 

quantitativ detektiert (Emission ~520 nm, Anregung 

~485 nm) 

FITC konjugierter Inhibitor | kann in der Zelle 

über Flow Cytometrie (FACS), Fluorometrie oder 

Fluoreszenzmikroskopie nachgewiesen werden 

(Emission ~535 nm, Anregung ~485 nm) 

Messprinzip/Endpunkt Kinetisch oder Endpunkt, Fluoreszenzfarbstoffe, 

MetamMorph ® -basierte Software zur Quantifizierung 

von Ergebnissen 

Automationsgrad Online Pipettor zum automatischen Pipettieren 

während des Assays | ImageXpressMICRO TM ist 

voll roboterintegrierbar 



Vollautomatisches System, optional mit Laderoboter 

und Bar-Code-Reader ausstattbar 

Semi-Automatische Detektion in FACS/Fluorometer 96-well high throughput-Format, Detektion im 

Fluorometer semi-automatisch 

Detektor (CCD) 12 bit. | Intensität der Beleuchtung: 

zwischen 1% und 100% regelbar 

Es werden nur 40.000 bis 80.000 Zellen pro well 

eingesetzt, bereits wenige invasive Zellen sind 

fluorometrisch detektierbar 

gekühlte CCD-Kamera Quantitative Detektion apoptotischer und nichtapoptotischer 

Zellen 


Sensitivität 

Außerordentliche Flexibilität der Hardware- 

Konfiguration | Cytometrisches Interface für die 

Datenanalyse | Präzision und Datenqualität 

Invasions-Kammer mit Laminin-Membran im 

96-well-Format 

Methode zur Detektion von aktiver Caspase-3 in 

lebenden Zellen 

Besonderheiten/Extras Transmitted light, Klimakammer, online Pipettor, 

Roboter zur Plattenbeladung 

Preis 100 Tests für 546 Euro 96 Tests für 509 Euro

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BIOCOM 

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25.09.2007 12:42:41 Uhr 

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ProBioGen AG 

Dr. Gabriele Schneider 

Tel.: +49-(0)30-924006-0 

info@probiogen.de 

www.probiogen.de 

Firma/Kontakt PEQLAB Biotechnologie GmbH 

Carl-Thiersch-Str. 2B 

91052 Erlangen 

Dr. Christof Larisch 

larisch@peqlab.de 

Service für zellbasierte Assays & zelluläre Analytik | Human artificial lymph node (human ALN) • Research, 

Entwicklung, Validierung, Prävalidierung, Transfer 

Produktname Cellometer Auto T4 

Cellometer Auto M10 

ProBioGen AG ist eine Contract Manufacturing Organisation (CMO). Wir bieten zellbasierte Assays im 

Rahmen der Herstellung von Biopharmazeutika an sowie – über den CMO-Bereich hinaus – zur Charakterisierung 

und Optimierung von Wirkstoffen (lead optimisation). 

Einsatzgebiete automatischer Zellzähler für Zellen zwischen 5 und 35 µm (Auto T4 | automatischer Zellzähler für Zellen 

zwischen 2 und 12 µm (Auto M10 | Trypanblau Lebend-/Totbestimmung (Vitalitätsmessung) | Bestimmung 

von Zellgrößen 

Mikroskop-basierter, automatischer Zellzähler für unterschiedlichste eukaryotische Zellen Proliferations-/Antiproliferationsassay 

Anti-Viraler-Assay (AVA): Charakterisierung von Interferon alpha/beta (Potency Assay) 

Reporter-Gen-Assay (IFN alpha/beta) | Antibody dependent Cellular Cytotoxicity’-Assay (ADCC) | 

Zellulärer Zytotoxizitäts-Assay (primäre humane NK-Zellen/Zielelle) | Immun-Modulations-Assay (ILA, 

primäre humane Leukozyten/Lymphozyten) | MHC-Assay (primäre humane Leukozyten; IFN alpha/beta) | 

Humaner artifizieller Lymphknoten (human ALN): Gewebe-/Organoid- Modell zur Immunogenitäts- und 

Immunmodulations-Testung (siehe ‚Produktwelt’ in dieser Ausgabe) 



Assays 

Messprinzip/Endpunkt Imaging-Cytometrie: Lichtmikroskop mit LED-Lampe, CCD-Kamera mit Festwinkelobjektiv | Bildauflösung 

1280 x 960 Pixel | Messung in spezieller Einmal-Zählkammer | Software-basierte Bildanalyse (Zelldatenbank) 

Automationsgrad lediglich 20 µl der Zellsuspension in die Einmal-Zählkammer pipettieren, Einmal-Zählkammer in das 

Gerät einführen, Messung starten, nach 30 Sekunden werden die Daten erhalten. 

Cellometer Auto T4 : Zellzähler für Zellen zwischen 5 und 35 µm | Cellometer Auto M10: Zellzähler für 

Zellen zwischen 2 und 12 µm 


Sensitivität 

Alle R&D-Aktivitäten laufen unter DIN ISO 9001:2000 und DIN EN ISO 13485:2003 Zusätzlich weisen 

wir eine GMP-Herstellungserlaubnis auf. | Mit Hilfe des ALN-Modells können immunmodellierbare sowie 

immunogene Eigenschaften von Wirkstoffen vorhergesagt werden. 

Besonderheiten/Extras Objektive Resultate du. Automation | Ergebnisse in 30 s | Bilder u. Daten werden im PC gespeichert | 

keine Verschleißteile, kein Liquid-Handling-System | Minimales Kontaminationsrisiko durch Verwendung 

speziell konzipierter Einmal-Zählkammern 

Preis

Promega GmbH 

Schildkrötstr. 15, 68199 Mannheim 

Dr. Steffen Barz 

Tel.: +49-(0)621-85010 

Firma/Kontakt Promega GmbH 

Schildkrötstr. 15, 68199 Mannheim 

Dr. Steffen Barz 

Tel.: +49-(0)621-85010 

Produktname Caspase-Glo ® 3/7 Assay Cytotox-Glo TM Cytotoxicity Assay 

Einsatzgebiete Apoptosemessung; Bestimmung von Caspaseaktivität Messung von Zytotoxizität 

Lumineszenter Zytotoxizitäts-Assay; hochsensitiv; homogenes Assay-Format; bietet Möglichkeit zum 

Multiplexing; lange Signalstabilität 

Lumineszenter, hochsensitiver Assay; geeignet zum Multiplexing; homogener Assay; kurze Assayzeiten; 

lange Signalstabilität 


Assays 

Messprinzip: Lumineszenter Nachweis einer Protease im Zellkulturüberstand 

Endpunkt: Nekrose/Membranschäden 

Messprinzip/Endpunkt Assay basiert auf einem modifizierten Luciferin; durch Caspase 3/7 Aktivität wird Luciferin freigesetzt; 

Umsetzung des Luciferins setzt Lichtsignal frei, das mit Caspase 3/7 Aktivität korreliert • Endpunkt: 

späte Apoptose 

Automationsgrad Protokolle zur Automatisierung können unter www.promega.de/automethods/ herunter geladen werden Automatisierbar (durchführbar bis 1-536 Well-Format) 

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Sensitivität: ca. 50 Zellen (abhängig vom Zelltyp) | Dynamischer Bereich: ca. 5 Dekaden Sensitivität: ca. 50 Zellen (abhängig vom Zelltyp) | Dynamischer Bereich: N.A. 

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Sensitivität 



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Besonderheiten/Extras Einfache Anwendung, höchste Sensitivität Zytotoxizitätsmessung über neuen Protease-Biomarker 

Preis ab 92 Euro ab 92 Euro 

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BIOCOM AG Verlag GmbH 

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Sandhofer Str. 116 

68305 Mannheim, 

Fachliche Information 

Tel.: +49-(0)621-759-8568 

mannheim.biocheminfo@roche.com 






Tel.: +49-(0)621-759-8568 



PromoCell GmbH 

Sickingenstr. 63/65 


Dr. Jürgen Becker 

Tel.: +49-(0)6221-64934-0 

Fax: +49-(0)6221-64934-40 

info@promokine.de 

www.promokine.de 

Firma/Kontakt PromoCell GmbH 



Dr. Jürgen Becker 

Tel.: +49-(0)6221-64934-0 

Fax: +49-(0)6221-64934-40 



Produktname Cell Viability & Cytotoxicity Kits Cell-based Reporter Assays xCELLigence RTCA SP Instrument Cell Proliferation Reagent WST-1 

nicht-radioaktive Bestimmung von metabolischer 

Aktivität, Zellproliferation, Zellvitalität oder Zytotoxizitäts-Studien 

in Zellkulturen im 96 Well-Format 

Real Time-Monitoring lebender Zellen. Zeitgleiche 

Analyse vieler zellulärer Parameter wie z.B. Zellproliferation, 

Adhäsion, Toxizität oder Rezeptorvermittelte 

Signaltransduktion über die gesamte 

Dauer eines Experiments. 

Nachweis und Quantifizierung von Luziferase und 

beta-Galaktosidase-Aktivität in eukaryotischen 

Zellen 

Einsatzgebiete Quantifizierung der Zellviabilität, Zellproliferation 

und Zytotoxizität, Zellzahlbestimmung 

Mitochondriale Dehydrogenasen vitaler Zellen 

spalten Tetrazoliumsalze wie WST-1 zu rötlichen 

Formazansalzen. Der Farbumschlag korreliert 

direkt mit der Anzahl metabolisch aktiver Zellen in 

der Kultur und kann im ELISA Reader vermessen 

werden 

Zellen werden in E-Plates ® im 96 well-Format 

kultiviert. In die wells ist ein mikroelektronischer 

Gold-Sensorarray integriert. Durch Anlegen einer 

Spannung von 20mV wird die Änderung der Impedanz 

gemessen, die ein Maß für Änderungen 

zellulärer Parameter wie z.B. Zelloberfläche, Veränderung 

der Zellzahl oder Zellmorphologie ist. 

Die Aktivität von Luziferase und beta-Galaktosidase, 

welche z.B. in mit entsprechenden 

Reporterplasmiden transfizierten Zellen exprimiert 

werden, wird durch einfache enzymatische Tests 

bestimmt und erlaubt eine Quantifizierung der 

entsprechenden Enzymexpression und somit auch 

des Anteils der mit den jeweiligen Reportergenen 

transfizierten Zellen 

Nicht-radioaktive Assays, basierend auf der metabolischen 

Aktivität zellulärer Enzyme bzw. der 

Bildung von ATP in vitalen Zellen (Cell Viability 

Assays) oder der Freisetzung von Lactatdehydrogenase 

aus toten Zellen (LDH-Zytotoxizitäts-Assay). 


Assays 

Bildung kolorimetrisch messbarer Endprodukte aus 

Substraten für die beta-Galaktosidase (beta-Gal 

Reporter-Assay) bzw. Messung der freigesetzten 

Biolumineszenz (Luziferase-Assay). Nachweis 

erfolgt über kolorimetrische oder Biolumineszenz- 

Messung. 

Messprinzip/Endpunkt Bildung kolorimetrisch und fluorometrisch messbarer 

Endprodukte durch aktive Enzyme in vitalen 

Zellen bzw. Messung der durch ATP-Synthese 

in vitalen Zellen freigesetzten Biolumineszenz 

(Luziferase-basierter ATP-Assay). Nachweis erfolgt 

über kolorimetrische, fluorometrische oder 

Biolumineszenz-Messung. 


Kontinuierliche Messung der Impedanz Colorimetrischer ELISA 

Vollautomatisierte Messung 

Geeignet auch für verschiedene Mikrotiterplatten- 

Formate 

Automationsgrad Geeignet auch für verschiedene Mikrotiterplatten- 

Formate. 

Impedance: 20ohm-10kohm Sehr großer linearer Bereich und hohe Sensitivität: 

bereits 5 x 102 Zellen/ml sind detektierbar. 

25.000 Zellen pro well beta-Galaktosidase-Assay:

Sigma-Aldrich Chemie GmbH 

Eschenstr. 5, 82024 Taufkirchen 

Dr. Udo Sticher 

Tel.: +49-(0)89-6513-1504; 

+49-(0)89-6513-0 

Fax: +49-(0)89-6513-1169 

udo.sticher@sial.com, deorders@sial.com 

www.sigmaaldrich.com 

Sigma-Aldrich Chemie GmbH 

Eschenstr. 5, 82024 Taufkirchen 

Dr. Udo Sticher 

Tel.: +49-(0)89-6513-1504; 

+49-(0)89-6513-0 

Fax: +49-(0)89-6513-1169 

udo.sticher@sial.com, deorders@sial.com 

www.sigmaaldrich.com 

S.CO LifeScience GmbH 

Boltzmannstr. 11A 

85748 Garching (München) 

Tel.: +49-(0)89-1214023 40 

Fax: +49-(0)89-1214023 44 

info@sco-lifescience.com 

www.sco-lifescience.com 

Firma/Kontakt Roche Diagnostics GmbH 




Tel.: +49-(0)621-759-8568 



CA200-1KT cAMP Enzyme Immunoassay Kit, 

Direct 

Produktname Cell Death Detection ELISAPLUS S.CORE - Web-based Image Analysis CS0010-1KT beta-Secretase (BACE1) Activity Detection 

Kit (Fluorescent) 

The EIA Direct cyclic AMP kit is a competitive immunoassay 

for the quantitative determination of 

cyclic AMP in samples treatedwith 0.1M HCl. 

BACE1 Activity Assay Kit is designed for BACE1 

inhibitor screening. It provides all the reagents, 

including the BACE1 enzyme for use as a positive 

control, required for an efficient detection of 

BACE1 activity. 

Auswertung von biologischen Assays | Zellkultur 

| Zellzählung | Tumorforschung | Angiogenese | 

Sprouting Assay | Tube Formation Assay | CAM 

Assay | estimmung des Vaskularisationsgrades | 

Migration Assay | Bestimmung der Transfektionseffizienz 

| Colony Forming Assay | Quantitative 

Immunhistochemie | Cell Tracking 

Einsatzgebiete nach Induktion der Apoptose Detektion fragmentierter 

DNA im Zellkulturüberstand, Plasma, Serum, 

Zell-Lysaten oder Zellen ex vivo 

The kit uses a polyclonal antibody to cAMP to 

bind, in a competitive manner, the cAMP in the 

sample or an alkaline phosphatase molecule that 

has cAMPcovalently attached to it. Samples or 

standards, alkaline phosphatase conjugate, and 

antibody are simultaneously incubated at room 

temperature in a secondary antibody coated multiwell 

plate. The excess reagents are then washed 

away and substrate is added. After incubation the 

enzyme reaction is stopped and the yellow color 

generated read on a multiwell plate reader at 405 

nm. The intensity of the yellow color is inversely 

proportional to the concentration of cAMP in 

either the standards or the samples. The measured 

optical density is used to calculate the concentration 

of cAMP. 

The assay is based on a convenient method of 

fluorescence resonance energy transfer (FRET) 

in which the fluorescence signal enhancement is 

observed after the substrate is cleaved by BACE1 

Web-basiertes System zur automatischen Bildauswertung 

| objektive quantitative Auswertung 

komplexer Assays | einfache Bedienung der Applikationen 

über ein personifiziertes Internetportal | 

Zugriff auf das System von jedem Rechner auf der 

Welt, 24 Stunden am Tag 

Photometrischer Enzym-Immunoassay zum 

qualitativen und quantitativen in vitro-Nachweis 

von zytoplasmatischen Histon-assoziierten DNA- 

Fragmenten (Mono- und Oligonucleosomen) nach 

induziertem Zelltod 


Assays 



Messprinzip/Endpunkt Colorimetrischer ELISA Software-basiert automatisch Bildauswertung Endpoint Endpoint 

Automationsgrad Web-basiert, vollautomatisch No No 

Non-Acetylated Version: 0.39 pmol/ml | Acetylated 

Version: 0.037pmol/ml 

The assay is designed so that the enzyme converts 

5–20% of the substrate to a fluorescent product 

during 1–2 hours at 37 °C. Sensitivity/Linearity 

depends on the fluorometer used to perform the 

assay, typical range 30–500 pmol. 

äußerst robuste Objekterkennung | Trennung zwischen 

Objekten des Interesses und Artefakten 

Sehr hohe Sensitivität: bereits 5 x 102 Zellen/ml 

können detektiert werden 


Sensitivität 

The cAMP Direct EIA may be used to assay cAMP 

samples that have been treated with hydrochloric 

acid to stop endogenous phosphodiesterase activity. 

Samples in this matrix can be read directly 

without evaporation or further treatment. Samples 

with very low levels of cAMP may be acetylated. 

Acetylation of the samples increases the sensitivity 

of the assay. 

BACE1 is a transmembrane protease responsible 

for the β site cleavage of the amyloid precursor 

protein (APP) to produce amyloid beta peptide (Abeta). 

The accumulation of A-beta in the brain is a 

primary cause for the progression of Alzheimer‘s. 

BACE1 is a target for inhibitor drug discovery. 

Free Trial Service | Angebot kostenloser Machbarkeitsstudien 

für Individuallösungen | Entwicklung 

von maßgeschneiderten individuellen Lösungen 

Besonderheiten/Extras One-step ELISA mit hoher Sensitivität, einfache 

und schnelle Durchführung (ca. 3h); Positivkontrolle 

ist im Kit enthalten; nicht-radioaktiv, kein prelabelling 

nötig; auch für High Throughput-Analysen 

geeignet 

618 Euro/Kit (250 Reaktionen) 510 €/Kit (sufficient for 96 assays) 

Preis 360 Euro (96 Tests) zwischen 1 und 5 Euro pro analysiertem Bild, je 

nach Komplexität und Anzahl der Bilder


VWR International GmbH 

Hilpertstr. 20a 

64295 Darmstadt 

Matthias Dornheim 

Tel.: +49-(0)6151-39720 

Fax: +49-(0)6151-3972450 

biotech@de.vwr.com 

TTP LabTech Limited 

Melbourn Science Park 

Melbourn, Herts, SG8 6EE, UK 

Thermo Fisher Scientific 

Adenauerallee 113 

53113 Bonn 

Dr. Carolin Kutzki 

Tel.: +49-(0)228-9125650 

tebu-bio GmbH 

Berliner Str. 255 

63067 Offenbach 

Ingrid Kautner 

Tel.: +49-(0)69-801013-0 

Fax: +49-(0)69-801013-20 

ingrid.kautner@tebu-bio.com 

www.tebu-bio.com 

Firma/Kontakt tebu-bio GmbH 

Berliner Str. 255 

63067 Offenbach 

Ingrid Kautner 

Tel.: +49-(0)69-801013-0 

Fax: +49-(0)69-801013-20 

ingrid.kautner@tebu-bio.com 

www.tebu-bio.com 

Produktname PPAR Screening Assay Cell-based ELISA Kits Cellomics HCS Reagent Kits Acumen ® eX3 Origene TissueScan qPCR Array 

High content cell-based screening Biomarker-Validierung, SNP-Analyse, 

Genexpressionsprofiling 

High Content Screening (HCS) and 

Analysis (HCA) 

Zur Bestimmung des relativen Phosphorylierungsgrades 

von Proteinen 

Einsatzgebiete Der Assay erlaubt die Identifizierung 

von Subtyp-spezifischen Liganden, die 

an PPAR-alpha, -beta/delta oder -gamma 

binden. 

Die cDNA von verschiedensten Krebstypen 

und Patienten wurde über RT PCR 

gewonnen und auf eine Ready to Use 

qPCR-Platte aufgebracht. 

Fluorescence-based high content 

assays, in-cell Westerns, reporter gene 

expression 

Validated single- and multiplexed kits 

for cell-based screening and analysis 

of specific molecular targets and 

biological parameters e.g. Cytotoxicity 

and Apoptosis, Inflammation and Cell 

Stress, Cell Cycle and Proliferation, Cell 

Signaling and Transcription Factors or 

Morphology 

Die zu untersuchenden Zellen werden 

in 96-well-Platten ausgesät und nach 

der experimentellen Behandlung fixiert. 

Der Kit enthält zwei Primärantikörper 

von denen einer nur die aktivierte, 

phosphorylierte Form des Zielproteins 

erkennt, und der andere sowohl das 

aktivierte wie auch das nicht modifizierte 

Zielprotein. Nach Inkubation mit 

HRP-konjugiertem Zweitantikörper und 

Zugabe von Substrat erfolgt die Auswertung 

im ELISA-Reader. 

Assay basiert auf stabilen HeLa-Luciferase-Reporterzelllinien. 

Zellen werden 

in 96-well-Platten ausgesät und mit 

zu testender Substanz für 24 Stunden 

inkubiert. Luciferase-Aktivität wird luminometrisch 

gemessen, die Ergebnisse 

als RLU (relative light units) angegeben. 

Als Positivkontrollen dienen Referenzsubstanzen, 

die eine max. Luciferaseaktivität 

für die jeweilige Zelllinie zeigen, 

als NegativkontrolleDMSO. 


Assays 

Messprinzip/Endpunkt Luciferase-Aktivität in RLU. Die RLU 

Werte der Referenzliganden werden als 

100% Aktivität gesetzt, die RLU-Werte 

der Testsubstanzen werden darauf bezogen 

angegeben. 


Fluorescence detection Fluorescence / live or fixed endpoint qPCR 

Kolorimetrische Auswertung im ELISA 

Reader 

Integration with standard plate stacker 

e.g. Thermo RapidStak 

Automationsgrad Der Assay ist für HTS geeignet Möglich bis zum HTS Validated on fully automated Thermo 

Scientific Array Scan HCS Reader 

Keine Herstellerangaben Single-cell detection Multiple laser excitation and high sensitivity 

photomultiplier tube detection 

Der Assay kann Liganden als „non 

agonist“, „total agonist“ und „partial 

agonist“ identifizieren. 


Sensitivität 

Alle Patientenproben sind bestens 

dokumentiert (pathologische Befunde, 

Berichte über Krankheitsstadien etc.). 

Zugang zu allen Ursprungsmaterialen 

wie RNA, Protein oder Gewebe. 

Choice of laser excitations, plate stacker 

for automation, Locator integrated 

fluorescence microscope 

Einfache Handhabung: keine Extraktionen, 

kein Western Blot; Assay ist nicht 

radioaktiv; in ca. 3 Stunden durchzuführen 

Besonderheiten/Extras Mit den drei zur Verfügung stehenden 

Zelllinien können Liganden für PPARalpha, 

-beta/delta oder -gamma identifiziert 

werden. Die Liganden werden 

klassifiziert als „non agonist“, „total 

agonist“ oder „partial agonist“. 

600 Euro bis 1.500 Euro 

£110,000 to £200,000 depending on 

specification 

416 Euro bis 907 Euro 232 Euros for 96 assays 

515 Euros for 5 x 96 assays 

Preis Abhängig von der Anzahl der getesteten 

Substanzen

Seite bitte abtrennen – per Fax an 030-264921-11 

Kontakt zu Verbänden 

Die Mitglieder der nachfolgenden Fachgesellschaften erhalten LABORWELT regelmäßig mit freundlicher Empfehlung ihrer Organisationen. 

Wer sich darüber hinaus für eine Mitarbeit oder einen Beitritt interessiert, erreicht die Fachgesellschaften unter den folgenden 

Kontakt daten: 

Ich interessiere mich für 

den Beitritt 

Unterstützung für Jungwissenschaftler 

Interessenvertretung 

eine Spende 

Fachgruppen im Bereich 

Verband (siehe unten, bitte ankreuzen) 

DECHEMA 

Fachgemeinschaft 

Biotechnologie 

Theodor-Heuss-Allee 25 

60486 Frankfurt am Main 

Tel.: +49-(0)-69-7564-0 

Fax: +49-(0)-69-7564-169 

www.dechema.de 

Deutsche Gesellschaft für 

Proteomforschung 

c/o MPI für Biochemie 

Am Klopferspitz 18a 


Tel.: +49-(0)-89-1897-9007 

Fax: +49-(0)-89-1897-9009 

c.kleinhammer@dgpf.org 

www.dgpf.org 

Österreichische Gesellschaft 

für Biotechnologie 

c/o Inst. f. Molekulare Biotechnologie, 

TU Graz 

Petersgasse 14 

A-8010 Graz, Austria 

Tel.: +43-(0)-316-873-4072 

Fax: +43-(0)-316-873-4071 

www.oegbt.org 

Deutsche Gesellschaft für Hygiene 

und Mikrobiologie (DGHM) 

c/o Institut für Hygiene und 

Mikrobiologie 

Josef-Schneider-Str. 2 

97080 Würzburg 

Tel.: +49-(0)-931-201-46936 

Fax: +49-(0)-931-201-46445 

www.dghm.org 

bts (Biotechnologische Studenteninitiative 

e.V.) 

c/o BIOCOM 

Stralsunder Str. 58-59 

13355 Berlin 

Tel.: +49-(0)-2649-21-21 

Fax: +49-(0)-2649-21-11 

www.bts-ev.de 

Bitte kontaktieren Sie mich 

Name Firma 

Tel. Fax 

E-Mail 

Gesellschaft für Genetik 

GESELLSCHAFT FÜR GENETIK 

c/o HZM – Deutsches 

Forschungszentrum für 

Gesundheit/Inst. of Developmental 

Genetics 

Tel.: +49-(0)-89-3187-2610 

Fax: +49-(0)-89-4620 

www.gfgenetik.de 

Gesellschaft für Signaltransduktion 

c/o Prof. Dr. Ralf Hass 

Med. Hochschule Hannover 

AG Biochemie u. Tumorbiol. 

30625 Hannover 

Tel.: +49-(0)-511-532-6070 

Fax: +49-(0)-511-532-6071 

www.sigtrans.de 

Gesellschaft für Pharmakologie und 

Toxikologie 

Geschäftsstelle der DGPT 

Achenbachstraße 43 

40237 Düsseldorf 

Tel.: +49-(0)-211-600-692-77 

Fax: +49-(0)-211-600-692-78 

mitglieder@dgpt-online.de 

www.dgpt-online.de 

Nationales Genomforschungsnetz 

c/o DKFZ 

Im Neuenheimer Feld 580 


Tel.: +49-(0)-6221-424-743 

Fax: +49-(0)-6221-423-454 

S.Argo@dkfz-heidelberg.de 

www.ngfn.de 

Deutsche Gesellschaft für 

Neurogenetik 

Institut für Humangenetik 

Calwer Straße 7 

72076 Tübingen 

Tel.: +49-(0)-7071-2977692 

Fax: +49-(0)-7071-295171 

peter.bauer@ 

med.uni-tuebingen.de 

www.hih-tuebingen.de/dgng/ 

Netzwerk Nutrigenomik 

RNA-Netzwerk 

BIO Deutschland 

Service Verbände 

Netzwerk Nutrigenomik 

Arthur-Scheunert-Allee 114 

14558 Nuthetal 

Tel.: +49-(0)-33200-88-301 

Fax: +49-(0)-33200-88-541 

mail@nutrigenomik.de 

www.nutrigenomik.de 

c/o Prof. Dr. Volker A. Erdmann 

Freie Universität Berlin 

Thielallee 63, 14195 Berlin 

Tel.: +49-(0)-30-8385 6002 

Fax: +49-(0)-30-8385 6413 

erdmann@chemie.fu-berlin.de 

www.rna-network.com 

Tegeler Weg 33/ 

berlinbiotechpark 

10589 Berlin 

Tel.: +49-(0)-30-264-840-87 

Fax: +49-(0)-30-264-840-88 

info@biodeutschland.org 

www.biodeutschland.org 

AG Life Science Research (AG LSR) 

c/o VDGH im VCI 

Mainzer Landstraße 55 

60329 Frankfurt am Main 

Tel.: +49-(0)-69-2556-1730 

Fax: +49-(0)-69-236650 

vdgh@vdgh.de 

www.vdgh.de 

Sollen die Mitglieder Ihrer 

wissenschaftlichen Fachgesellschaft 

künftig auch kostenfrei 

LABORWELT beziehen? Informationen 

erhalten Sie bei: 

Andreas Macht 

a.macht@biocom.de 


Service Stellenmarkt 

Akademischer Stellenmarkt 

Veröffentlichen Sie Ihre Stellenanzeigen zielgruppengerecht in unserem akademischen Stellenmarkt, der allen nicht-kommerziellen Instituten 

für ihre Stellenausschreibungen kostenlos zur Verfügung steht. Bitte senden Sie dazu Ihre Anzeige (1/4 Seite 90 mm breit x 122,5 mm hoch, Logo – 

jpg oder tiff, 300 dpi Auflösung) an a.macht@biocom.de. Annahmeschluß für die nächste LABorweLt-Ausgabe 4/08 (erscheinungstermin 

18.07.2008) ist der 4. Juli 2008. 

1 Doktorarbeit Biologie (BAT IIA/2) 

1 Diplom/Masterarbeit Biologie/ 

Biotechnologie/Biochemie 

1 Diplom/Masterarbeit Bioinformatik 

Drosophila Group, Department of Cellular Neurology, Hertie-Institute for Clinical 

Brain Research, 

Center for Neurology, Universitätsklinikum Tübingen 

Ziel unserer Arbeitsgruppe, ist es zu einem besseren Verständnis der molekularen 

Mechanismen beizutragen, die die Stabilisierung bzw. den Abbau der 

Synapsen kontrollieren. Solche Störungen stellen die zelluläre Grundlage von 

mentaler Retardierung sowie von Neurodegeneration dar. 

Neuromuskuläre Drosophila-Synapsen werden in unserem Labor als Modell 

genutzt. Hierbei erlaubt uns ein spezieller Assay, Veränderungen an individuellen 

Synapsen über einen Zeitraum von mehreren Tagen in lebenden Tieren 

zu verfolgen (Refs. 1+2). 

Doktorarbeit sowie Diplomarbeit Biologie: 

Deine Aufgabe wäre es, unser Team (1 medizinische + 2 biologische Doktorandinnen 

+ mehrere Diplomanden) weiter zu verstärken und mitzuhelfen herauszufinden, 

wie genau die identifizierten Gene interagieren um zu „entscheiden“, 

welche Synapsen stabilisiert und welche eliminiert werden. Anliegen Deiner 

Arbeit ist es, eine „Brücke“ vom mutierten Molekül zum Verhaltensdefekt zu 

schlagen. 

Methodisch sind Erfahrungen mit Molekularbiologie, Drosophila-Genetik, 

Konfokaler Mikroskopie, Elektronenmikroskopie, Bildanalyse/Bioinformatik 

und Biochemie von Vorteil, aber keine Voraussetzung für eine erfolgreiche 

Bewerbung. 

Für eine Promotion solltest Du zu den Top 15% Deines Jahrganges gehören 

und idealerweise Erfahrung auf dem Gebiet der Neurobiologie oder Erfahrung 

mit Drosophila mitbringen. 

Bioinformatik: 

Ziel der ausgeschrieben Diplomarbeit ist es, OrthoExpress – ein Programm das 

organismenübergreifende Expressionsanalysen aus multiplen Experimenttypen 

auf Basis von bestehenden Orthologien ermöglicht – weiterzuentwickeln. Bisher 

kann OrthoExpress nur als lokale Applikation genutzt werden. Im Rahmen 

einer Publikation soll OrthoExpress nun so modifiziert werden, daß es als 

Webapplikation genutzt werden kann. Hierzu sollen u.a. neue Protokolle zum 

automatisierten Einlesen und Verwalten von Datensätzen erstellt werden. Es 

besteht (falls gewünscht) die Möglichkeit, an der Charakterisierung der erzeugten 

Kandidaten mitzuarbeiten. 

Du solltest Erfahrung mit DBMS und JAVA mitbringen. Erfahrungen mit HTML 

oder XML und Programmiersprachen zur Modellierung von Web-Interfaces sind 

von Vorteil, aber nicht unbedingt notwendig. 

Bewerbungen und Rückfragen bitte per E-Mail an: 

tobias.rasse@medizin.uni-tuebingen.de senden. 

(1. Nature Neuroscience (2005) 8: 898-905, (2. Nature Protocols (2007); 2 (12): 3285-3298. 

Am Forschungszentrum Borstel 

ist ab sofort eine 

POST-DOC (Dr. rer. nat) m/w 

Stelle im Rahmen des Exzellenzclusters „Inflammation at Interfaces“ neu 

zu besetzen. 

Als Bestandteil der Zellwand von Gram-negativen und Gram-positiven 

Bakterien stellt Peptidoglycan (PG, Murein) eine ideale Zielstruktur für 

das Immunsystem dar, um bakterielle Infektionen festzustellen und erste 

Abwehrstrategien zu entwickeln. Schwerpunkte des Projektes bilden die 

strukturelle und funktionelle Analyse von Nod-Rezeptoren und deren Liganden, 

die über eine spezifische Wechselwirkung mit dem programmierten 

Zelltod (Apoptose) und dem Angeborenen Immunsystem des Wirtes in 

Verbindung stehen. 

Das Projekt hat zum Ziel, Struktur und Funktion dieser Bakterienstrukturen 

(PAMPs) im Zusammenhang mit den „pathogen related receptors“ (PRR) 

auf molekularer Ebene aufzuklären und näher zu charakterisieren. Es ist 

integraler Bestandteil der Research Area G [Integrated Research Network 

(IRN) „Nod-like receptors“] und erfordert eine enge methodische und inhaltliche 

Zusammenarbeit mit anderen Gruppen, sowohl innerhalb dieser 

Research Area wie auch dem gesamten Cluster. 

Der/die Stelleninhaber/in sollte mit einem breiten Spektrum von biochemisch-anlytischen 

Techniken und Methoden (HPLC, MS, NMR), und auch 

solchen der angrenzenden Fachgebiete (Molekularbiologie, Biologie, 

Biochemie und Immunologie) vertraut sein. 

Die Stelle wird zunächst für 3 Jahre ausgeschrieben und kann im Bedarfsfall 

für weitere 2 Jahre verlängert werden. Die Bezahlung erfolgt 

nach TVÖD 14 (BAT IIa) und hängt von den individuellen Qualifikationen 

des Bewerbers/der Bewerberin ab. Das Forschungszentrum Borstel liegt 

zwischen Hamburg, Kiel und Lübeck und es besteht die Möglichkeit auf 

dem Campus zu wohnen. 

Es werden alle im öffentlichen Dienst üblichen Sozialleistungen geboten. 

Schwerbehinderte werden bei sonst gleicher Eignung bevorzugt eingestellt. 

Bitte schicken Sie Ihre Bewerbung, Lebenslauf und Zeugnisse zusammen 

mit allen wichtigen Dokumenten vorzugsweise per E-Mail an 

Personalwesen des Forschungszentrums Borstel 

Parkallee 2, 23845 Borstel 

E-Mail: hpump@fz-borstel.de 



Als europaweit führendes Forschungszentrum mit der Ausrichtung „Environmental 

Health“ (Verknüpfung von Biomedizin und Umweltforschung) analysieren die 

Forscherinnen und Forscher des Helmholtz-Zentrums München grundlegende 

Prozesse der Krankheitsentstehung, der Schädigung sowie der Abwehr- und 

Kompensationsfähigkeit des Organismus. Wir sind eine Forschungseinrichtung 

des Bundes und des Freistaats Bayern mit Sitz in Neuherberg, im Norden Münchens, und sind Mitglied der Helmholtz-Gemeinschaft Deutscher Forschungszentren 

e.V., der größten öffentlichen Forschungsorganisation Deutschlands. Das Helmholtz-Zentrum München als Träger des Bayerischen Frauenförderpreises sowie des Total 

E-Quality-Zertifikates strebt eine Erhöhung des Frauenanteils an und fordert deshalb qualifizierte Interessentinnen auf, sich zu bewerben. Schwerbehinderte werden 

bei gleicher Eignung bevorzugt. 

Die Abteilung Recht & Technologietransfer sucht für den Bereich Technologietransfer 

eine/n 

Naturwissenschaftler/in für Erfinder- 

beratung und Patente(134/2007) 

Ihre Aufgaben 

– Erfinderberatung 

– Technologie-Scouting 

– Management und Betreuung von Patentakten 

– Prüfung von wissenschaftlichen Publikationen auf schutzrechtsrelevante 

Inhalte 

– Durchführung von Recherchen zum Stand der Technik von Patentanmeldungen 

– Erstellung und Prüfung von Technologieangeboten für Kooperationsvorhaben 

mit der Industrie 

Ihre Qualifikation 

– Hochschulstudium und Promotion in den Bereichen Chemie, Biochemie, 

Physik oder Medizin 

– Kenntnisse im Umgang mit Patentschriften 

– sehr gutes Englisch 

– selbstständige Arbeitsweise 

Unser Angebot 

– Tätigkeit in einem innovativen, zukunftsorientierten Unternehmen 

– umfangreiches Fortbildungsangebot 

– zunächst für zwei Jahre befristetes Arbeitsverhältnis und eine Vergütung 

nach TVÖD 

Wir freuen uns auf Ihre Bewerbung, Martin Reichel 

E-Mail: reichel@helmholtz-muenchen.de 

Für Rückfragen wenden Sie sich bitte an: Dr. Wolfgang Nagel 

Tel.: 089/3187-1210, E-Mail: wolfgang.nagel@helmholtz-muenchen.de 

Helmholtz Zentrum München • Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) • Institut für Entwicklungsgenetik (IDG) 

Postfach 1129, 85758 Neuherberg 

An der RWTH Aachen ist im Lehr- und Forschungsgebiet Biomaterialien 

zum nächstmöglichen Termin eine 

für drei Jahre zu besetzen. 

Doktorandenstelle (TV-L13/2) 

(Fachrichtung: Biotechnologie/Biologie/Biochemie) 

Das Institut für Entwicklungsgenetik (Independent Research Group Neuronal 

Circuit Formation, Leitung: Dr. Andrea Huber Brösamle) sucht zum nächstmöglichen 

Zeitpunkt eine/n 

Naturwissenschaftler/in (93/2008) 

Ihre Aufgaben 

– Untersuchung der molekularen Mechanismen der Nervenfaserleitung während 

der Entwicklung 

– Untersuchung der molekularer Prozesse, die die Verdrahtung des Nervensystems 

steuern durch Manipulation der Expression von Kandidatenmolekülen 

in den Modellsystemen Maus und Hühnchen 

Ihre Qualifikation 

– Hochschulstudium und Promotion in Biologie oder verwandten Bereichen 

– gute Kenntnisse in Entwicklungsneurobiologie 

– Erfahrung in anatomischen und molekularbiologischen Methoden 

– großes fachliches Interesse 

– selbstständige und eigenverantwortliche Arbeitsweise 

Unser Angebot 

– Tätigkeit in einem innovativen, zukunftsorientierten Unternehmen 

– eine anregende Arbeitsumgebung 

– umfangreiches Fortbildungsangebot 

– zunächst für 2 Jahre befristetes Arbeitsverhältnis und eine Vergütung nach 

TVÖD 

Wir freuen uns auf Ihre Bewerbung. 

Dr. Andrea Huber Brösam 

E-Mail: andrea.huber@helmholtz-muenchen.de 

Telefon: 089/3187-4117 

Das DFG-Projekt „Modifizierte Glykosaminoglykane“ befasst sich mit der kombinierten chemo-enzymatischen Synthese von modifizierten Neo-Glykosaminoglykanen 

und beinhaltet die Produktion und Charakterisierung von rekombinanten Enzymen sowie deren Verwendung in der enzymatischen Synthese von Oligosaccharidliganden, 

und die biochemische Charakterisierung von biofunktionalisierten Oberflächen. Erfahrungen in der Enzymtechnologie, der Kohlenhydratchemie und der 

Biokatalyse wären vorteilhaft. 

Voraussetzungen sind ein Diplom/Master in Chemie, Biochemie, Biologie oder Biotechnologie und die Bereitschaft, sich mit Teamfähigkeit und Engagement in neue 

Methoden in einem interdisziplinären Arbeitsgebiet einzuarbeiten. 

Ihre schriftliche Bewerbung mit Lebenslauf, Zeugnissen und einer Kurzbeschreibung Ihrer bisherigen Forschungstätigkeit senden Sie bitte an: 

Univ.-Prof. Dr. Lothar Elling, Lehr- und Forschungsgebiet Biomaterialien, Institut für Biotechnologie und Helmholtz-Institut für Biomedizinische Technik, 

Worringer Weg 1, 52074 Aachen, E-Mail: l.elling@biotec.rwth-aachen.de, Tel.: 0241-8028350. 



Paul-Ehrlich-Institut Paul-Ehrlich-Straße 51 - 59, 

63225 Langen, Telefon (06103) 77-11 00 

Das Paul-Ehrlich-Institut ist eine wissenschaftliche Einrichtung des Bundes, die 

als Bundesoberbehörde für die Zulassung und Chargenprüfung immunbiologischer 

Arzneimittel zuständig ist und auf den damit verbundenen Gebieten der 

Naturwissenschaften (z.B. Virologie, Bakteriologie, Immunologie, Allergologie, 

Medizinische Biotechnologie, Hämatologie) Forschung betreibt. 

Im Interesse des Gesundheitsschutzes wurde im Paul-Ehrlich-Institut ein gemäß 

DIN EN 17025 und Richtlinie 98/79/EG akkreditiertes Prüflabor für In-vitro- 

Diagnostika (IVD) eingerichtet, das mit Benannten Stellen und Herstellern bei der 

Prüfung und Bewertung von Diagnostika (HIV-, HTLV-, HBV-, HCV- und Hepatitis 

Delta-Testkits sowie Blutgruppenreagenzien) zusammenarbeitet. 

Die Aufgaben des Prüflabors bestehen in der praktischen Prüfung der Testkits, 

der Beurteilung der Daten und der Kommunikation mit den Auftraggebern. 

Im Prüflabor ist zum nächstmöglichen Zeitpunkt die Position einer / eines 

Wissenschaftlichen Angestellten 

Stellenbewertung: E 13/14 TVöD Bewerbungskennziffer: 21 / 2008 

zu besetzen. 

Aufgabenprofil: 

Die verantwortungsvolle Aufgabe schließt die folgenden Tätigkeiten ein: 

– Bewertung von Prüfresultaten 

– Bewertung der Leistung von IVDs und Erstellung von Beurteilungsberichten 

– Pflege der Standard- und Referenzmaterialien 

– Mitarbeit auf dem Gebiet des Qualitätsmanagements 

– Fachliche Zusammenarbeit mit anderen Abteilungen des Institutes sowie 

externen Behörden und Einrichtungen 

– Anleitung der technischen MitarbeiterInnen des Labors 

– Mitwirkung bei der Ausbildung von Biologielaboranten und der Fortbildung 

ausländischer Behördenmitarbeiter im PEI (Training of Assessors) 

Anforderungsprofil: 

– Abgeschlossenes naturwissenschaftliches oder (veterinär-)medizinisches 

Hochschulstudium 

– Diplom/Approbation 

– Berufserfahrung in der Virologie, Diagnostik, Hämatologie, Labormedizin 

– Fähigkeit zur selbstständigen und eigenverantwortlichen Arbeit 

– Teamfähigkeit, Leistungsbereitschaft und Loyalität 

– Sehr gute Kenntnisse der englischen Sprache sowie der Standard MS Office 

Software 

– Bereitschaft zur Einarbeitung in rechtliche Regelwerke 

Das Beschäftigungsverhältnis ist zunächst befristet 5 Jahre. Die wöchentliche 

Arbeitszeit beträgt 39 Stunden; Teilzeitbeschäftigung ist grundsätzlich 

möglich. 

Die Eingruppierung erfolgt gemäß den tarifrechtlichen Bestimmungen des 

TVöD - Bund. 

Auswärtigen Bewerbern ist das Amt bei der Wohnraumbeschaffung behilflich. Trennungsgeld 

und Umzugskosten werden nach den gesetzlichen Vorschriften gewährt. 

Schwerbehinderte werden bei gleicher Eignung bevorzugt berücksichtigt. 

Das Paul-Ehrlich-Institut fördert die Gleichstellung von Frauen und Männern 

und ist daher an Bewerbungen von Frauen interessiert. 

Bitte richten Sie Ihre vollständigen Bewerbungsunterlagen unter Angabe 

der Bewerbungskennziffer bis zum 30. Mai 2008 an das Personalreferat 

des Paul-Ehrlich-Instituts. 

Postdoc or Ph.D. student position in neurobiology / 

protein chemistry of mental diseases 

The Institute for Neuropathology, Research Group „Neurodegeneration“ (PD Dr. 

C. Korth) invites applications for a postdoc position starting immediately for 2 

years, with possibility of extension. 

The research focus will be on characterizing proteins and genes associated 

with chronic mental diseases like schizophrenia and the affective disorders 

with the goal of developing novel ways of diagnosis and therapy. Please read J. 

Neuroscience 28: 3839f for a perspective into our research. A strong background 

in molecular biology and/or protein chemistry is favorable. The research group 

is embedded into several close collaborations with research groups in Europe 

and the U.S. on the named topic. 

We are looking for a dedicated scholar with excellent skills in protein biochemistry 

and molecular biology, fluency in written and spoken English, an open mind 

for new approaches and a lot of team spirit. 

Further information on the position can be obtained from PD Dr. C. Korth, 

0211-8116153, korth@med.uni-duesseldorf.de). Applications please only 

electronically to the following address: korth@med.uni-duesseldorf.de. 

Applications include CV, publication record, and names and contact information 

of three references. 

An der Universität Potsdam ist an der Mathematisch- 

Naturwissenschaftlichen Fakultät am Institut für Biochemie 

und Biologie, Professur für Bioinformatik, in enger 

Kooperation mit dem Max-Planck-Institut für Molekulare 

Pflanzenphysiologie im Rahmen eines Drittmittelprojekts 

möglichst zum 01.07.2008 die Stelle einer/eines 

wissenschaftlichen Mitarbeiterin/Mitarbeiters 

Entgeltgruppe 13 TV-Länder (Tarifgebiet Ost), Kenn-Nr. 13/2008, mit einer 

wöchentlichen Arbeitszeit von 40 Stunden befristet bis zum 30.06.2010 zu 

besetzen. 

Die Stelle ist in das vom BMBF finanzierte GABI-FUTURE-Verbundvorhaben 

“Biomasseproduktion bei Mais: Genomik-basierte und System-orientierte 

Pflanzenzüchtung auf Energiemais“ (GABI-ENERGY) eingebettet. 

Voraussetzungen: 

– abgeschlossenes naturwissenschaftliches Hochschulstudium 

– gute Programmierkenntnisse 

– Interesse an interdisziplinärer Forschungstätigkeit, insbesondere an Statistik 

und biologischen Fragestellungen 

– Promotion erwünscht 

Aufgaben: 

Bioinformatik-Forschungstätigkeit im Bereich der Analyse von komplexen 

experimentellen Profildaten über Gene, Metabolite und Proteine, vor allem mit 

statistischen Methoden und Verfahren des maschinellen Lernens. 

Weitere Auskünfte: Prof. Dr. Joachim Selbig 

Tel.: +49 (0)331 5678208, selbig@mpimp-golm.mpg.de 

(siehe auch http://www.bio.uni-potsdam.de/ professuren/bioinformatik) 

Bewerbungen richten Sie bitte bis an die Universität Potsdam, Dezernat 

für Personal- und Rechtsangelegenheiten, Am Neuen Palais 10, 14469 

Potsdam. 

Die Universität strebt eine Erhöhung des Anteils von Frauen im wissenschaftlichen 

Bereich an und fordert deshalb Frauen nachdrücklich zur Bewerbung 

auf. Bewerbungen von Schwerbehinderten werden bei gleicher Eignung 

bevorzugt. 

Für die Rücksendung der Bewerbungsunterlagen bitten wir Sie, einen adressierten 

und ausreichend frankierten Briefumschlag beizulegen. 


The Dep. Functional Proteomics, Medizinisches Proteom-Center (MPC), Ruhr- 

University Bochum advertises the following post: 

Full-time Post-Doc position 

The MPC is one of the world leading institutes for protein research. The main 

scientific focus of the Dep. Functional Proteomics, MPC led by Prof. Dr. Katrin 

Marcus is the detailed biochemical protein analysis of biological systems via 

state-of-the-art proteomics, molecular biological and cell-based approaches. 

Long-term aim is to contribute to the advancement of clinical diagnostics as well 

as to the development of therapies concerning major diseases like Alzheimer’s 

and Parkinson’s disease (PD). 

Responsibilities: 

Within an interdisciplinary project in the National Genome Research Network 

(NGFNplus) (funding by the Federal Ministry of Education and Research (BMBF) 

together with our partners we are interested in the investigation of PD using 

modern proteomic methods (HPLC, 2D Fluorescence Difference Gel Electrophoresis 

(2D-DIGE), and mass spectrometry) as well as cell-based and molecular 

biological approaches. Main focus is the understanding of pathomechanims 

underlying PD and the identification of biomarkers. 

The candidate will engage a central role in the Brain Proteomics group and 

strongly complement the expertise of the team. The position additionally includes 

the supervision of students, technical assistants and PhD students. 

Requirements: 

PhD in Biology, Chemistry, Biochemistry, Pharmacy, or Medicine. 

Experience in modern proteome analysis/neuroproteomics and/or Parkinson’s 

disease/neurodegeneration is mandatory. 

Experience in molecular biology/cell biology is highly desirable. 

Personal qualities: Excellent skills in communication and team-oriented work. 

An active, professional approach to the work with drive for independent work. 

Mobility, flexibility. 

Language skills: English business fluent. 

The Ruhr-University Bochum aims at increasing the percentage of women 

in research positions and strongly encourages women to apply; as an equal 

opportunity employer it particularly welcomes applications from individuals 

with disabilities. 

The position is open from July 1st, 2008 and is initially limited for a period 

of 2 years. 

Location: Bochum, Germany. 

Applicants should send a full CV, a list of publications, names and addresses 

of 2 academic referees and a short description of main research interest by 

email to 

Prof. Dr. Katrin Marcus, Dep. Functional Proteomics 

Medizinisches Proteom-Center, Ruhr-University Bochum 

Phone.: +49-(0)234-32-28444 

Email: katrin.marcus@rub.de, www.funktionelle-proteomik.de 

Informal scientific enquiries are always welcome via email or phone. 


Paul-Ehrlich-Institut Paul-Ehrlich-Straße 51 - 59, 

63225 Langen, Telefon (06103) 77-11 00 

Das Paul-Ehrlich-Institut ist eine wissenschaftliche Einrichtung des Bundes, die 

als Bundesoberbehörde für die Zulassung und Chargenprüfung immunbiologischer 

Arzneimittel zuständig ist und auf den damit verbundenen Gebieten der 

Naturwissenschaften (z.B. Virologie, Bakteriologie, Immunologie, Allergologie, 

Medizinische Biotechnologie, Hämatologie) Forschung betreibt. 

Im Fachgebiet “Therapeutische Impfstoffe“ der Abteilung – Immunologie – ist 

zum nächstmöglichen Zeitpunkt die Position eines/einer 

Technischen Assistenten/ 

Technischen Assistentin 

Stellenbewertung: E 8/ E 9 TVöD 

Bewerbungskennziffer: 20/2008 

zu besetzen. 

Aufgabenprofil: 

Es sollen Aufgaben in der Forschung wahrgenommen werden, wo Methoden 

der zellulären Immunologie und der Molekularbiologie zur Anwendung kommen. 

Forschungsschwerpunkte sind molekulargenetische Untersuchungen transgener 

Mauslinien und Analysen zur zellulären Immunität, z. B. gegen Tumore. 

Als zusätzliche Aufgaben sind die Herstellung von wässrigen Lösungen, 

Zellkulturmedien und hochreines Wasser auf der Basis eines QM-Systems 

sowie die Mitwirkung bei der Vorbereitung und Durchführung von Versuchen 

zu benennen. 

Anforderungsprofil: 

– Abgeschlossene Ausbildung als Technische Assistentin/Technischer Assistent 

– Erfahrung mit zellbiologischen oder molekularbiologischen Methoden 

– Fähigkeit zur Berechnung und Herstellung von Puffern und anderen Rezepturen 

– Fähigkeit zum gewissenhaften, selbständigen und verantwortlichen Bearbeiten 

der übertragenen Aufgaben 

– Teamfähigkeit und Belastbarkeit. 

– Kenntnisse der MS Office Software 

Das Beschäftigungsverhältnis ist vorerst auf 3 Jahre befristet. Die wöchentliche 

Arbeitszeit beträgt 39 Stunden; Teilzeitbeschäftigung ist grundsätzlich 

möglich. Die Eingruppierung erfolgt nach den tariflichen Bestimmungen des 

TVöD – Bund. 

Auswärtigen Bewerbern ist das Amt bei der Wohnraumbeschaffung behilflich. 

Trennungsgeld und Umzugskosten werden nach den gesetzlichen Vorschriften 

gewährt. 

Schwerbehinderte werden bei gleicher Eignung bevorzugt berücksichtigt. 

Das Paul-Ehrlich-Institut fördert die Gleichstellung von Frauen und Männern 

und ist daher an Bewerbungen von Frauen interessiert. 

Fachliche Auskünfte erteilen Ihnen gerne Herr Dr. Thomas Hinz 

(06103/77-5001) und Herr Sven Flindt (06103/77-5002). 

Bitte richten Sie Ihre vollständigen Bewerbungsunterlagen an das 

Personalreferat des Paul-Ehrlich-Instituts. 



Am Zentrum für Innere 

Medizin, Medizinische 

Klinik und Poliklinik II, 

Fachbereich Medizin, 

sind zum nächstmöglichen Zeitpunkt, zunächst auf zwei Jahre befristet, zwei 

Ganztagsstellen einer/eines 

Technischen Assistentin/Assistenten 

(BTA, CTA, VTA, MTA, MTLA) 

zu besetzen. Bei Erfüllung der tarifrechtlichen Voraussetzungen erfolgt die 

Eingruppierung bis BAT Vb. 

Aufgaben: 

Die Arbeitsgebiete sind sowohl in der Klinischen Forschergruppe 118 „Pathomechanismen 

und Therapie der Lungenfibrose“, dem von der Europäischen 

Kommission im 7. Rahmenprogramm geförderten Forschungsprojekt „European 

IPF Network: Natural course, Pathomechanisms and Novel Treatment Options in 

Idiopathic Pulmonary Fibrosis“ und in dem Exzellenz-Cluster „Cardiopulmonary 

System“ angesiedelt. Inhaltlich ist die Tätigkeit an der Aufdeckung wesentlicher 

Pathomechanismen der Entstehung fibrosierender Lungenerkrankungen ausgerichtet. 

Der vielfältige und äußerst interessante Tätigkeitsbereich innerhalb 

unserer Forschungslabore umfasst zellphysiologische, histologische, biochemische, 

molekularbiologische sowie tierexperimentelle Methoden. 

• Ein Schwerpunkt liegt in der Betreuung und Durchführung tierexperimenteller 

Versuchs ansätze der akuten respiratorischen Insuffizienz und pulmonalen 

Fibrose, sowie der Durchführung lungenphysiologischer Messungen und der 

histologischen Aufarbeitung von Lungengewebe aus den tierexperimentellen 

Ansätzen. 

• Ein weiterer Schwerpunkt umfasst molekularbiologische Arbeiten: RNA/DNA 

Isolierung, (RT)-PCR, Genotypisierungen, Laser-gestütztes „cell picking“ aus 

Gefrierschnitten und Nachweis der Expression von Surfactant, Gerinnungs- und 

Fibrinolysekomponenten mittels TaqMan real-time PCR, Vektor-Klonierungen, 

Sequenzierungen zur Überprüfung der korrekten Insertion sowie Transfektionen 

(in vitro und in vivo) unter Verwendung verschiedener Transfektionsverfahren. 

Biochemische Analysen umfassen SDS-PAGE, Western Blotting, ELISA, Enzymographien, 

Aktivitäts- und Gerinnungsassays. 

Voraussetzungen: 

Erwünscht sind eine abgeschlossene Ausbildung zur/zum BTA, CTA, MTA, 

MTLA, VTA oder eine ähnliche Ausbildung. Die Bereitschaft zur Mitarbeit in 

einem jungen engagierten Team sowie das Interesse, sich in wissenschaftliche 

Aufgabenbereiche einzuarbeiten. Aufgrund der ständig wechselnden und breit 

gefächerten Versuchsansätze ist ein hohes Maß an Flexibilität und Selbständigkeit 

erforderlich. Zumindest für eine der beiden Positionen sind weitreichende 

Erfahrungen auf tierexperimenteller Ebene, die zur selbstständigen Durchführung 

von physiologischen Untersuchungen befähigen, ausdrücklich erwünscht. Für 

die andere Position sind fundierte molekularbiologische Kenntnisse vorteilhaft. 

Eine kompetente Einarbeitung durch unsere erfahrenen Mitarbeiter ist für uns 

selbstverständlich. 

Ihre Bewerbung richten Sie bitte mit den üblichen Unterlagen an: 

Herrn Prof. Dr. Andreas Günther, Medizinische Klinik II, 

Klinikstraße 36, 35392 Gießen 

E-Mail: Andreas.Guenther@innere.med.uni-giessen.de. 

Bewerbungen Schwerbehinderter werden - bei gleicher Eignung - bevorzugt. 

Wir bitten, Bewerbungen nur in Kopie vorzulegen, da diese nach 

Abschluss des Verfahrens nicht zurückgesandt werden. 

Am Universitätsklinikum Tübingen, Abteilung für Molekulare Pathologie, Ärztlicher 

Direktor Prof. Dr. med. R. Kandolf ist im Rahmen eines DFG geförderten 

Projektes des SFB-Transregio 19 „Inflammatorische Kardiomyopathie, Molekulare 

Pathogenese und Therapie“ zunächst für die Dauer von 4 Jahren ab 1. 

Juli 2008 eine Stelle zu besetzen: 

Wissenschaftliche/n Mitarbeiter/in (E13/14) 

Schwerpunkt des Projektes ist die Evaluierung von Pathogenitätsdeterminanten 

im Rahmen kardialer Remodellierungsprozesse im Mausmodell der Coxsakkievirus 

B3-Myokarditis (J Mol Med. 2008, 86:49-60) u.a. durch Anwendung 

von siRNA-Strategien. Zudem unterliegt dem Mitarbeiter die Koordinierung 

der Kooperationen innerhalb des SFB-TR19 bezüglich der Charakterisierung 

pathobiochemischer/immunologischer Prozesse (z.B Signaltransduktion) in 

verschiedenen Modellsystemen der Virusmyokarditis. Das Projekt wird von 

einer MTA unterstützt. 

Qualifikation: 

abgeschlossenes Hochschulstudium und Promotion (Biologie, Biochemie, 

Medizin) und fundierte Kenntnisse in: Molekularer Zellbiologie, Immunologie 

und/oder Virologie/Pathologie. Gute Englischkenntnisse. 

Ihre aussagekräftige Bewerbung mit Lebenslauf und wissenschaftlichem 

Werdegang richten Sie bitte an: Prof. Dr. med. Karin Klingel 

Tel.: 07071 29 84925, E-mail: karin.klingel@med.uni-tuebingen.de 

Abteilung für Molekulare Pathologie, Liebermeisterstr. 8, 72076 Tübingen 

http://www.sfb-transregio-19.de/ 

http://www.medizin.uni-tuebingen.de/mol-pathologie/ 

Am Institut für Biophysik der Technisch- 

Naturwissenschaftlichen Fakultät der 

Universität Linz, Österreich ist die Stelle 

eines/r 

wissenschaftlichen Mitarbeiters/in 

mit Doktorat im Forschungs- und Lehrbetrieb gemäß § 94 Abs. 2 Z 2 UG 2002 

nach dem Angestelltengesetz im vollen Beschäftigungsausmaß für 4 Jahre 

zu besetzen. 

Molekularbiologen, Biochemiker, Biophysiker, Biologen 

Erfordernisse: 

abgeschlossenes Studium der Molekularbiologie, Biologie, Biochemie oder 

Biophysik. 

Sonstige Kenntnisse: 

Erfahrung in der Führung von Zellkulturen und Überexpression/ Reinigung von 

Proteinen aus E.coli und Hefe erwünscht. 

Mitarbeit in Forschung und Lehre und Administration wird erwartet. 

Nähere Auskünfte erteilt Univ. Prof. Dr. Peter Pohl, 

Tel.: +43-732-2468-9269. 

Johannes Kepler Universität Linz, Institut für Biophysik 

Altenbergerstraße 69, A-4040 Linz 

peter.pohl@jku.at 


Curacyte Discovery GmbH ist ein Tochterunternehmen der 

Curacyte AG und hat ihren Sitz in der Bio City in Leipzig, einem 

Biotechnologie-Biomedizin Zentrum, das Industrie, Wissenschaft 

und Forschung kombiniert. Curacyte beschäftigt sich 

mit der Entdeckung und Entwicklung neuer Medikamente in 

Bereichen akuter und kritischer Erkrankungen. 

Curacyte Discovery sucht eine/n 

Leiter/in der Chemie 

in geschäftsführender Funktion 

Der Arbeitsort ist Leipzig. Ein multidisziplinäres Team von ca. 25 

Mitarbeitern (Chemikern, Biologen und technisches Personal) 

wird an diese Funktion berichten. 

Bewerber/innen sollten über eine abgeschlossene Hochschulausbildung 

und Promotion in Chemie oder Biochemie, sowie 

eine mehrjährige Industrieerfahrung verfügen. 

Industrieerfahrung und spezielles Know-How sollte einschließen: 

• Organische und Peptid-Synthese 

• Computergestützte Chemie und molekulares Modelling 

• Quantitative Struktur-Aktivitäts-Beziehung (QSAR) 

• Medizinal Chemie 

• Verbinden biologischer Charakterisierung mit der 

chemischen Optimierung von Wirksubstanzen 

Neben starken Führungsqualitäten und guten Englisch- 

Kenntnissen wird von dem/der Kandidaten/in erwartet, den 

Forschungsbetrieb durch stringentes und ergebnisorientiertes 

Projektmanagement zu leiten, sowie die interdisziplinäre 

Kommunikation im Team zu fördern. 

Bitte senden Sie Ihren Lebenslauf mit Foto, Zeugnissen sowie 

Angaben hinsichtlich eines möglichen Beginns Ihrer neuen 

Tätigkeit und Gehaltserwartungen an: 

Curacyte Discovery GmbH 

Frau Daniela Pohlmann 

Deutscher Platz 5d, 04103 Leipzig 

e-mail: daniela.pohlmann@curacyte.com 


Guava Technologies ist der führende Hersteller kapillarer Flowzytometer für die Biotech- 

und Pharmaindustrie. Für den Ausbau unseres Direktvertriebs suchen wir zum 

baldmöglichsten Termin einen 

Vertriebsrepräsentant für Nord-Ostdeutschland 

als Mitglied eines jungen und dynamischen Vertriebsteams mit 

e nachgewiesener Erfahrung und Erfolg im Vertrieb erklärungsbedürftiger Investitionsgüter 

e wissenschaftlicher Ausbildung in Zellbilogie/Molekularbiologie 

HOCHSCHULE BIBERACH 

HOCHSCHULE BIBERACH 

BIBERACH HOCHSCHULE UNIVERSITY OF APPLIED SCIENCES 

BIBERACH UNIVERSITY OF APPLIED SCIENCES 

HOCHSCHULE 

BIBERACH 

BIBERACH UNIVERSITY OF APPLIED BIBERACH 

SCIENCES 

An der Hochschule Biberach sind in der Fakultät Pharma- 

BIBERACH An zeutische der Hochschule Biotechnologie UNIVERSITY Biberach zum OF sind 01.09.2008 APPLIED in der Fakultät SCIENCES Pharma- 

BIBERACH An 

zeutische 

der Hochschule UNIVERSITY folgende zwei 

Professorenstellen Biotechnologie 

Biberach OF APPLIED SCIENCES 

zu besetzen zum 

sind 

01.09.2008 

in der Fakultät 

folgende 

Pharma- 

An 

zwei 

An Professorenstellen 

zeutische der Hochschule Biotechnologie Biberach 

der Hochschule zu Biberach besetzen 

zum sind 01.09.2008 in der Fakultät folgende Pharma- zwei 

sind in der Fakultät Pharma- 

Professorenstellen zeutische Biotechnologie zu besetzen zum 01.09.2008 folgende zwei 

zeutische 

Professorenstellen W2 Biotechnologie -Professur 

zu besetzen 

zum 01.09.2008 folgende zwei 

Professorenstellen zu besetzen 

W2 -Professur 

(Kennziffer W2 PBT 08) 

(Kennziffer W2 

-Professur 

-Professur PBT 08) 

(Kennziffer PBT 08) 


für das Lehrgebiet Entwicklung und Steuerung biotechnologischer 

für das Lehrgebiet Entwicklung und Steuerung biotechnologischer 

für 

Produktionsprozesse. 

Produktionsprozesse. 

das Lehrgebiet (Kennziffer Entwicklung 

Diese Professur 

Diese Professur 

und PBT Steuerung 

wird i. d. 08) R. 

wird i. d. R. 

biotechnologischer 

zunächst drei Jahre 

für auf zunächst drei Jahre 

auf 

Produktionsprozesse. das Probe Lehrgebiet wahrgenommen Entwicklung 

Probe wahrgenommen 

Diese 

und 

und 

Professur 

bei und entsprechender Steuerung 

bei entsprechender 

wird i. d. R. biotechnologischer 

Eignung 

Eignung 

zunächst 

und 

und 

drei 

VorlieVorlie- 

Jahre 

für gen das der Lehrgebiet weiteren Voraussetzungen Entwicklung und anschließend Steuerung entfristet. biotechnologischer 

gen 

auf Produktionsprozesse. Probe 

der weiteren 

wahrgenommen Diese 

Voraussetzungen 

und Professur bei 

anschließend 

entsprechender wird i. d. R. 

entfristet. 

Eignung zunächst und drei Vorlie- Jahre 

Produktionsprozesse. Diese Professur wird i. d. R. zunächst drei Jahre 

Bewerber/innen gen auf Probe der weiteren wahrgenommen sollten Voraussetzungen über und einen bei überdurchschnittlichen anschließend entsprechender entfristet. Eignung Hochschulab- und Vorlie- 

Bewerber/innen 

auf 

schlussgen Probe 

der und weiteren 

wahrgenommen 

eine sollten Voraussetzungen Promotion über 

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Erfah- 

Die/der rungenschluss in und zukünftige der eine Bioprozesstechnik Promotion Stelleninhaber/in sowie für über eukaryontische soll mehrjährige Vorlesungen Zellen einschlägige und verfügen. praktische Erfah- 

Die/der 

schluss und 

Übungen rungen in zukünftige 

eine Promotion 

in der den Bioprozesstechnik Lehrgebieten Stelleninhaber/in 

sowie über 

der für Zellkulturtechnik, eukaryontische soll 

mehrjährige 

Vorlesungen Zellen 

einschlägige 

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und verfügen. praktische 

Erfah- 

Übungen 

rungen Die/der in zukünftige 

lung und in der 

verwandten den 

Bioprozesstechnik 

Lehrgebieten 

Stelleninhaber/in 

Disziplinen der 

für 

Zellkulturtechnik, 

eukaryontische soll Vorlesungen Zellen 

übernehmen. Bioprozessentwick- 

und verfügen. praktische 

lung 

Übungen Die/der zukünftige 

Die/der und zukünftige in 

in 

verwandten 

den Lehrgebieten Stelleninhaber/in 

Stelleninhaber/in Disziplinen 

der Zellkulturtechnik, soll Vorlesungen 

übernehmen. 

Bioprozessentwick- 

und praktische 

soll Vorlesungen und praktische 

lung Übungen und in in verwandten den Lehrgebieten Disziplinen der Zellkulturtechnik, übernehmen. Bioprozessentwick- 

Übungen 

lung und in 

in 

verwandten 

den Lehrgebieten W2 Disziplinen -Professur 

der Zellkulturtechnik, 

übernehmen. 

Bioprozessentwicklung 

und in verwandten Disziplinen übernehmen. 

W2 -Professur 

(Kennziffer W2 PBT 07) 

(Kennziffer W2 

-Professur 

-Professur PBT 07) 



für das Lehrgebiet Physik, Mathematik und Statistik. Diese Professur 

für ist das Lehrgebiet Physik, Mathematik und Statistik. Diese Professur 

ist 

für 

zunächst 

zunächst 

das Lehrgebiet 

bis 31.12.2015 

bis 31.12.2015 

Physik, (Kennziffer Mathematik 

auf Probe PBT /Zeit 

auf Probe /Zeit 

und Statistik. 

geplant. 07) Die 

geplant. Die 

Diese 

Vollzeitstelle 


Professur 

kann 

kann 

ist für zunächst das grundsätzlich Lehrgebiet 

grundsätzlich 

bis 31.12.2015 Physik, auch in Teilzeit Mathematik 

auch in Teilzeit 

auf Probe 

besetzt 

besetzt 

/Zeit und werden. Statistik. 

werden. 

geplant. Die Diese Vollzeitstelle Professur 

für das Lehrgebiet Physik, Mathematik und Statistik. Diese Professur 

Bewerber/innen kann ist zunächst grundsätzlich bis sollten 31.12.2015 auch über in Teilzeit einen auf Probe überdurchschnittlichen besetzt /Zeit werden. geplant. Die Hochschulab- 



ist 

schluss kann 

zunächst 

grundsätzlich 

bis 

sollten 

31.12.2015 

und eine Promotion auch über in Teilzeit einen 

auf Probe 

sowie überdurchschnittlichen besetzt 

/Zeit 

über mehrjährige werden. 

geplant. Die 

Hochschulab- 


einschlägige Erfahschluss 

kann Bewerber/innen grundsätzlich 

und eine 

sollten 

Promotion 

auch über in Teilzeit einen 

sowie 

überdurchschnittlichen besetzt 

über mehrjährige 

werden. 

einschlägige 

HochschulabrungenErfahrungenschluss 

Bewerber/innen in 

in 

und 

einem 

einem 

eine sollten angewandten 

angewandten 

Promotion über einen sowie 

Bereich überdurchschnittlichen 

Bereich 

über 

der 

der 

mehrjährige 

oben genannten 

oben genannten 

einschlägige HochschulabFachrichtunFachrichtunErfahgen 

Bewerber/innen verfügen. sollten über einen überdurchschnittlichen Hochschulabgenrungenschluss 

verfügen. 

in und einem eine angewandten Promotion sowie Bereich über der mehrjährige oben genannten einschlägige FachrichtunErfahschluss und eine Promotion sowie über mehrjährige einschlägige Erfah- 

Die/der genrungen verfügen. in zukünftige einem angewandten Stelleninhaber/in Bereich soll der oben Vorlesungen genannten und Fachrichtun- praktische 

Die/der 

rungen 

Übungen gen verfügen. 

in 

zukünftige 

einem angewandten 


Bereich 

soll 

der oben 

Vorlesungen 

genannten 

und 

Fachrichtun- 

in den Lehrgebieten der Physik, Mathematik, Statistik praktische sowie in 

Übungen 

gen Die/der verfügen. zukünftige 

den Vertiefungsfächern in den Lehrgebieten 


Bioinformatik der Physik, 

soll 

oder Mathematik, 

Vorlesungen 

verwandten Ingenieurwissen- 

Statistik 

und praktische 

sowie in 

den 

Übungen Die/der zukünftige 

schaften Vertiefungsfächern 

in den Lehrgebieten Stelleninhaber/in 

übernehmen. Bioinformatik 

der Physik, soll 

oder 

Mathematik, Vorlesungen 

verwandten Ingenieurwissen- 

Statistik und praktische sowie in 

Die/der zukünftige Stelleninhaber/in soll Vorlesungen und praktische 

schaften 

den Übungen Vertiefungsfächern in den Lehrgebieten 

übernehmen. 

Bioinformatik der Physik, oder Mathematik, verwandten Ingenieurwissen- 

Statistik sowie in 

Übungen in den Lehrgebieten der Physik, Mathematik, Statistik sowie in 

Beide schaften den Vertiefungsfächern Professuren übernehmen. sind Bioinformatik für den Studiengang oder verwandten Pharmazeutische IngenieurwissenBiotech- Beide 

den 

nologieschaften Vertiefungsfächern 

Professuren in übernehmen. 

der gleichnamigen sind 

Bioinformatik 

für den Fakultät Studiengang 

oder verwandten 

vorgesehen, Pharmazeutische 

Ingenieurwissen- 

den die Hochschule Biotechnologieschaften 

Beide Professuren 

im Wintersemester in 

übernehmen. 

der gleichnamigen 

sind für den 

2006/2007 Fakultät 

Studiengang 

in ihr Studienprogramm vorgesehen, 

Pharmazeutische 

den die aufgenommen 

Hochschule 

Biotech- 

im 

nologie Beide Professuren 

hat. Wintersemester 

in der gleichnamigen sind für den 

Eine detaillierte 2006/2007 

Fakultät Studiengang 

Beschreibung in ihr des Studienprogramm 

vorgesehen, Pharmazeutische den die 

jeweiligen Lehrgebiets aufgenommen 

Hochschule Biotech- 

Beide Professuren sind für den Studiengang Pharmazeutische Biotech- erhalten 

hat. 

im nologie Wintersemester in der gleichnamigen 

Sie vom Eine Dekan, detaillierte 

2006/2007 Fakultät 

Herrn Beschreibung 

in ihr 

Prof. Dr. Hannemann, des 

Studienprogramm vorgesehen, den die 

jeweiligen unter Tel. Lehrgebiets 

aufgenommen 

Hochschule 

nologie in der gleichnamigen Fakultät vorgesehen, den 0 73 die 51/582-450. 

Hochschule erhalten 

Sie 

hat. im Wintersemester 

vom 

Eine 

Dekan, 

detaillierte 2006/2007 

im Wintersemester Herrn 

Beschreibung in ihr 

2006/2007 Prof. Dr. Hannemann, 

des Studienprogramm jeweiligen 

in ihr Studienprogramm unter Tel. 

Lehrgebiets aufgenommen 

0 73aufgenommen 51/582-450. 

erhalten 

Es Sie hat. wird vom Eine vorausgesetzt, Dekan, detaillierte Herrn Beschreibung Prof. dass Dr. die/der Hannemann, des zukünftige jeweiligen unter Stelleninhaber/in Tel. Lehrgebiets 0 73 51/582-450. erhalten beim 

Es 

hat. 

Auf- Sie wird vom 

Eine 

und vorausgesetzt, Dekan, 

detaillierte Beschreibung 

Ausbau Herrn sowie Prof. bei dass der Dr. die/der 

des 

Fortentwicklung Hannemann, zukünftige 

jeweiligen 

unter des Stelleninhaber/in Tel. 

Lehrgebiets erhalten 

Studiengangs 0 73 51/582-450. Phar- beim 

Auf- 

Sie Es wird vom 

mazeutische und 

vorausgesetzt, Dekan, 

Ausbau 

Herrn 

Biotechnologie sowie 

Prof. 

bei 

dass 

der 

Dr. die/der 

tatkräftig Fortentwicklung 

Hannemann, zukünftige unter 

mitarbeitet. des 

Stelleninhaber/in Tel. 

Dazu Studiengangs 

0 73 51/582-450. 

gehören Phar- 

beim 

auch 

die mazeutische 

Auf- Es wird und vorausgesetzt, Ausbau 

Es wird Konzeption vorausgesetzt, Biotechnologie 

sowie bei dass der die/der 

und Übernahme dass tatkräftig 

Fortentwicklung zukünftige 

die/der von zukünftige mitarbeitet. 

des Stelleninhaber/in 

Lehrveranstaltungen Stelleninhaber/in Dazu 

Studiengangs 

gehören 

Phar- beim 

aus auch beim dem 

die 

mazeutische Auf- und Ausbau 

Bereich Auf- Konzeption 

Biotechnologie sowie bei der 

und anderer Ausbau Professorenstellen. und sowie Übernahme 

tatkräftig Fortentwicklung 

bei der Fortentwicklung von 

mitarbeitet. des 

Darüber Lehrveranstaltungen 

Dazu Studiengangs gehören Phar- 

hinaus des Studiengangs wird die aktive aus 

auch 

Phar- dem Mit- 

Bereich 

die mazeutische Konzeption Biotechnologie 

arbeitmazeutische in anderer der Selbstverwaltung Biotechnologie Professorenstellen. 

und Übernahme tatkräftig von mitarbeitet. 

tatkräftig und in Darüber 

Lehrveranstaltungen Dazu gehören 

Gremien mitarbeitet. hinaus erwartet. Dazu wird die gehören aktive 

aus auch dem 

auch Mitarbeit 

Bereich die Konzeption 

die Konzeption in 

anderer 

der Selbstverwaltung 

Professorenstellen. und Übernahme von 

und Übernahme und in 

Darüber Lehrveranstaltungen 

von Gremien 

hinaus 

Lehrveranstaltungen erwartet. 

wird die aktive aus dem Mit- 

aus dem 

arbeit Bereich Weitere in allgemeine anderer der Selbstverwaltung Professorenstellen. Informationen und zur in Dienstaufgabe, Darüber Gremien hinaus erwartet. den wird Bewerbungs- die aktive Mit- und 

Bereich 

arbeit Einstellungsvoraussetzungen Weitere in allgemeine 

anderer 

der Selbstverwaltung 

Professorenstellen. 

Informationen sowie und zur die in Dienstaufgabe, 

Darüber 

Gremien 

hinaus 

detaillierten erwartet. Stellenausschreibungen 

den 

wird 

Bewerbungsdie 

aktive Mit- 

und 

arbeit 

Einstellungsvoraussetzungen 

Weitere in allgemeine der Selbstverwaltung Informationen 

finden Sie unter http://www.fh-biberach.de/service/Stellenanzeigen. 

sowie 

und zur 

die 

in Dienstaufgabe, Gremien 

detaillierten 

erwartet. 

Stellenausschreibungen 

den Bewerbungs- und 

finden 

Einstellungsvoraussetzungen Weitere allgemeine Informationen 

Weitere Sie allgemeine unter http://www.fh-biberach.de/service/Stellenanzeigen. 

sowie zur die Dienstaufgabe, detaillierten Stellenausschreibungen 

den Bewerbungs- und 

Informationen zur Dienstaufgabe, den Bewerbungs- und 

finden Einstellungsvoraussetzungen Sie unter http://www.fh-biberach.de/service/Stellenanzeigen. 

sowie die detaillierten Stellenausschreibungen 

Einstellungsvoraussetzungen 

finden Sie unter http://www.fh-biberach.de/service/Stellenanzeigen. 

sowie die detaillierten Stellenausschreibungen 

Bewerbungen finden Sie unter mit http://www.fh-biberach.de/service/Stellenanzeigen. 

den üblichen Unterlagen werden unter Angabe der 

Bewerbungen Kennziffer bis 13.06.2008 mit den üblichen erbeten Unterlagen an die Personalabteilung werden unter Angabe der Hoch- der 

Kennziffer 

Bewerbungen 

schule Biberach, bis 13.06.2008 

mit den üblichen 

Karlstr. erbeten 

Unterlagen 

11, 88400 an Biberach, die Personalabteilung 

werden unter Angabe 

Tel. 0 73 51/5der 82-120. Hoch- 

der 

Kennziffer Bewerbungen 

Bewerbungen schule Biberach, 

bis 13.06.2008 mit den üblichen 

mit Karlstr. 

erbeten Unterlagen 

den üblichen 11, 88400 

an 

Unterlagen Biberach, 

die Personalabteilung werden unter Angabe 

werden Tel. 0unter 73 51/5 

der 

Angabe 82-120. 

Hoch- der 

Kennziffer 

der 

schule Biberach, bis 13.06.2008 Karlstr. erbeten 11, 88400 an Biberach, die Personalabteilung Tel. 0 73 51/5der 82-120. Hoch- 

Kennziffer 

schule Biberach, 

bis 13.06.2008 

Karlstr. 

erbeten 

11, 88400 

an 

Biberach, 

die Personalabteilung 

Tel. 0 73 51/5 

der 

82-120. 

Hochschule 

Biberach, Karlstr. 11, 88400 Biberach, Tel. 0 73 51/5 82-120. 

Bitte richten Sie Ihre Bewerbung gerne per E-Mail an: 

Dr. Michael Liebler • Guava Technologies • Kanalstrasse 19/1 • 72631 Aichtal • mliebler@guavatechnologies.com • www.guavatechnologies.com 


Service Produktwelt 


High-Content-Screening 

für die Forschung 

scan® ist eine modulare, Mikroskop-basierte 

Imaging-Plattform, die Olympus in Zusammenarbeit 

mit dem EMBL (Heidelberg) speziell 

für die vollautomatische Bilderfassung und die 

Datenanalyse biologischer Proben entwickelt 

hat. scan® unterstützt diverse Probenformate, 

wie Multiwell-Platten, Objektträger oder Cus- 

tom-Arrays. Der modulare Aufbau des Systems 

ermöglicht einen flexiblen Einsatz sowohl für 

Routinezwecke als auch in hochentwickelten 

Applikationen, zum Beispiel in der Assay-Entwicklung 

und dem High-Content-Screening. 

Ein leistungsstarkes Analysemodul ermöglicht 

komplexe Bildanalysen und anspruchsvolle 

Datenauswertungen; unterschiedliche 

Partikel- und Objekterkennungsfunktionen 

können miteinander kombiniert werden und 

steigern dadurch die Effizienz der Bildanalyse. 

Anschließend werden die zuvor detektierten 

Objekte einer eingehenden zytometrischen 

Analyse unterzogen. Dabei können komplexe 

Entwürfe für Multiparameter-Datenanalysen 

problemlos durch Wahl von Ausschluss- und 

Klassifikationsparametern erstellt werden. 


Andrea Rackow 

Wendenstr. 14-18 

20097 Hamburg 

Tel.: +49-(0)40-23773-4612 

Fax: +49-(0)40-230817 

mikroskopie@olympus.de 

SBMC 2008 

Nachwuchspreise 

Als besonderes Highlight der diesjährigen Systembiologie-Konferenz 

SBMC (Dresden, 22.–24 

Mai 2008) vergibt die MTZ-Stiftung, gemeinsam 

mit dem Bundesforschungsministerium und 

dem Projektträger Jülich erstmals den mit 5.000 

Euro dotierten „MTZ-Award for medicallyoriented 

Systems Biology“. Die Auszeichnung 

wird am zweiten Veranstaltungstag an drei 

junge Wissenschaftler für ihre herausragenden 

Promotionen verliehen. Der Preis soll künftig 

in jährlichem Turnus vergeben werden, um 

talentierten Systembiologen mehr öffentliche 

Aufmerksamkeit zuteil werden zu lassen. 

evocatal GmbH 

Fluoreszenz-Markierung von Biomolekülen 

evoglow®, so heißt eine neue Art fluoreszierender 

Proteine (FPs), die – im Gegensatz 

zu den bekannten Leuchtproteinen wie GFP 

und davon abgeleiteten Fluorophoren – auch 

unter anaeroben Bedingungen in vivo leuchten. 

Die von der Firma evocatal entwickelten 

Leuchtproteine eignen sich somit auch für 

Untersuchungen in Biofilmen, anaeroben 

Mikroorganismen oder Zellverbänden. Diese 

spielen in vielen biotechnologischen und 

biomedizinischen Prozessen eine zentrale 

Rolle, waren aber bislang nahezu unzugänglich 

für bildgebende Verfahren wie zum 

Beispiel die Fluoreszenzmikroskopie. 

Die evoglow®-Serie, die in Kürze auf den 

Markt kommen wird, eröffnet nunmehr 

neue Möglichkeiten auf diesem Gebiet, 

beispielsweise durch selektive Anfärbung 

einzelner Zellen oder Zellkompartimente 

oder aber durch den Einsatz in Expressionsstudien 

in Form von Transkriptions- oder 

Translationsfusionsproteinen. 

Ein weiterer Vorteil: Dadurch dass die 

Leuchtintensitäten sowie die Anregungs- 

und Emissionsspektren der evoglow®- 

Proteine im selben Bereich wie jene von 

GFP und seiner Varianten liegen, können 

Porvair Sciences Ltd. 

Untersuchung von Wirkstoffen in biologischen 

Matrices 

Porvair Sciences hat einen Anwendungsbericht 

veröffentlicht, der die operationalen 

Vorteile des Mikroplatten-basierten Microlute 

Festphasenextraktion (SPE)-Systems 

bei der Analyse pharmazeutischer Stoffe in 

biologischen Flüssigkeiten beleuchtet.Unter 

Verwendung von Microlute mit SPE-Wells 

mit geringer Sorbens-Menge wurden Analyte 

unterschiedlicher Wasserlöslichkeit untersucht 

– von fettlöslichen Steroiden bis zu wasserlöslichen 

Nukleosid-Analoga. Dabei zeigte sich, 

dass bei Probenaufarbeitung mit Microlute 

die SPE, das Priming, Waschen und die Elution 

signifikant eingegrenzt werden, woraus eine 

zur Detektion und Analyse vergleichbare 

instrumentelle Anordnungen verwendet 

werden. 

evocatal GmbH 

Dr. Michael Puls 

Merowingerplatz 1a 

40225 Düsseldorf 

Tel.: +49- (0) 211-1576095-2 

m.puls@evocatal.de 

schnellere Verarbeitung und gesteigerte Sensitivität 

resultierten. 

Die 96 wells von Microlute werden aus einem 

einzigen Formteil aus qualitativ hochwertigem 

Kunststoff konstruiert. Dadurch werden 

durch das Einstecken einzelner SPE-Kartuschen 

hervorgerufene Verformungen vermieden. 

Durch Einsatz eines unternehmenseigenen 

Verfahrens zum Beschicken mit schlammförmig 

vorliegendem Sorbens konnte Porvair Kanalisierungseffekte 

ausschalten, die häufig die 

Leistung der mit Trockenpulver beladenen SPE- 

Kolonnen begrenzen. Jede einzelne Vertiefung 

der Microlute-Platte wurde mit seiner eigenen 

Abflussrille versehen – die Gewähr für 100%igen 

Probentransfer und Null-Überkreuzkontamination. 

Microlute bietet eine hohe Produktivität 

auf allen robotergestützten Systemen zur Probenhandhabung 

und -bearbeitung. 

Porvair Sciences Ltd. 

Unit 6, Shepperton Business Park 

Govett Avenue 

Shepperton, Middlesex TW17 8BA UK 

Tel.: + 44-(0)1932-240255 

int.sales@porvair.com 

www.porvair-sciences.com 



Fluoreszenz-Markierung von Biomolekülen 

PromoCell bietet eine große Auswahl qualitativ 

hochwertiger Fluoreszenzfarbstoffe, 

die den blau-grünen bis nahen Infrarot-Bereich 

des Lichtspektrums abdecken und zur 

schnellen, einfachen und effizienten Kopplung 

an Proteine, Nukleinsäuren und Antikörper 

geeignet sind. Die aktuell lieferbaren 

PromoFluor-Farbstoffe (z.B. PromoFluor-488, 

PromoFluor-555, PromoFluor-590, PromoFluor-647, 

PromoFluor-680, PromoFluor-700 

oder PromoFluor-750) sind kostengünstige 

und qualitativ hochwertige Alternativen 

zu etablierten Fluorophoren wie etwa den 

Alexa Fluo®- und Cy-Farbstoffen. Sie zeigen 

eine außergewöhnliche Photostabilität, 

hohe Fluoreszenzquantenausbeute, eine 

starke Absorption sowie gute Wasserlöslichkeit. 

Die PromoFluor-Farbstoffe sind als 

Carboxylsäuren, NHS-Ester und Maleimide 

sowie als Konjugate mit Aminogruppen, 

Biotin, Avidin, Streptavidin und Phalloidin 

verfügbar und für Immunfluoreszenz-, 

FISH-, FACS- sowie Microarray-Experimente 

geeignet. 

Gebrauchsfertige „PromoFluor Labeling- 

Kits“ zur Markierung von Proteinen und Antikörpern 

sowie mit den PromoFluor-Farbstoffen 

markierte Sekundär-Antikörper stehen 

ebenfalls zur Verfügung. Des weiteren bietet 

das Unternehmen R- und B-Phycoerythrin 


Die Objektträgerflasche mit dem Klick – lumox 

slide flask 

Die Neuentwicklung von In Vitro Systems & 

Services ist Objektträger und Zellkulturflasche 

in einem. Die Basis dieses Zellkultursystems 

ist ein gasdurchlässiger Folienobjektträger 

mit sehr geringer Autofluoreszenz 

und hoher Transparenz. 

Aufgrund der hervorragenden optischen 

Eigenschaften der lumox Folie eignet sich 

die lumox slide flask besonders für zellba- 

sowie Allophycocyanin – ebenfalls als Streptavidin- 

und Biotin-Konjugate. 




Tel.: +49-(0)6221-649 34-0 

Fax: +49-(0)6221-64934-40 



sierte Fluoreszenz-Assays in der hochauflösenden 

Mikroskopie. Eine hohe Sensitivität 

bei Fluoreszenzmessungen ermöglicht eine 

hintergrundfreie Bilddarstellung. 

Die Gasdurchlässigkeit der lumox Folie 

(TC-Qualität) sorgt für optimalen O 2 - und 

CO 2 -Austausch und bietet allen Zelltypen 

eine adäquate Wachstumsfläche. 

Nach der Kultivierung kann der lumox 

Folienobjektträger von dem Flaschengehäuse 

abgezogen werden. Dadurch sind die 

Zellen für die mikroskopische Analyse leicht 

zugänglich. 

Weitere Varianten des objektträgerbasierten 

Zellkultursystems sind im 1, 2, 4 und 

8-well Format erhältlich. 


Rudolf-Wissell-Str. 28 

37079 Göttingen 

Tel.: +49-(0)551-500-97-329 

Fax: +49-(0)551-500-97-311 

customerservice@ivss.de 

www.ivss.de 

Eppendorf AG 

Guava Technologies Inc. 


Nachweis aktivierter 

Transkriptionsfaktoren 

Zwei neue Kits der Eppendorf Biochip 

Systems GmbH weisen in einer einzigen 

Messung bis zu 12 aktivierte Transkriptionsfaktoren 

aus Kernextrakten nach. 

Dazu wird Doppelstrang-DNA mit jeweils 

spezifischen Bindungssequenzen für die 

Transkriptionsfaktoren auf eine beschichtete 

Glasoberfläche gespottet. Nach Inkubation 

mit einem Kernproteinextrakt 

werden mittels Antikörpern die gebundenen 

Transkriptionsfaktoren nachgewiesen, die 

spezifisch für den aktivierten Status sind. 

Die Detektion erfolgt mit dem Eppendorf 

Silverquant®-System oder mittels fluoreszierender 

Sekundär-Antikörper. Allerdings ist 

der Nachweis mit dem Silverquant®-System, 

der auf der Silbernitratreduktion mit Hilfe 

eines Anti-Biotin-Nanogold-Konjugates 

beruht, deutlich sensitiver als die etablieren 

Fluoreszenzfärbungen. Der TF Chip MAPK- 

Kit detektiert acht zentrale Transkriptionsfaktoren 

des MAPK-Pathways. Der TF Chip 

Stem Cell-Kit ermöglicht den Nachweis von 

12 aktivierten Transkriptionsfaktoren, die als 

Pluripotenz- und Differenzierungsmarker für 

Stammzellen fungieren. 

Eppendorf AG 

Bettina Doerler 

doerler.b@eppendorf.de 

www.eppendorf-biochip.com 

Informationsschrift 

Guava Technologies hat eine Broschüre zur 

firmeneigenen Laser-basierten, Mikrokapillartechnologie 

veröffentlicht, die deren 

Vorteile bei der Detektion von Säugerzellen, 

Bakterien und Mikroperlen darlegt. Neben 

zahlreichen Daten präsentiert das Unternehmen 

auch einen Vergleich mit anderen 

Systemen zur Zellzählung. 

Guava Technologies Inc. (Europe) 

Stamford, UK 

Tel.: +44-(0)1780-764390 

mtaylor@guavatechnologies.com 




PE LAS GmbH 

ELISAs im Kit-Format 

PerkinElmer hat sein Angebot an Assays für das 

Wirkstoff-Screening um die neue AlphaLISA TM - 

Plattform erweitert. AlphaLISA TM basiert auf 

der ALPHAScreen TM -Technologie und erlaubt 

die Bestimmung kleinster Biomarker-Mengen 

sowie von biologischen Therapeutika. Die 

für das Hochdurchsatz-Screening geeignete 

Technologie bietet sich besonders für Marker 

an, für die keine kommerziellen Kits existieren 

und für komplexe Proben wie Serum 

oder Plasma, wie sie in präklinischen Studien 

verwendet werden. Die ab Mai verfügbaren 

ersten Analyte umfassen P24, Amyloid-beta 

40, Amyloid-beta 42, TNF-alpha, IgG, EPO, VEGF 

und Insulin. PerkinElmer bietet für AlphaLISA TM 

auch einen Assay-Entwicklungs Service an, um 

den Wechsel vom traditionellen ELISA-Format 

auf die neue Plattform zu erleichtern. 

PE LAS (Germany) GmbH 

Dr. Michael Lässle 

Ferdinand-Porsche-Ring 17 

63110 Rodgau 

Tel.: +49-(0)6198-587692 

Fax: +49-(0)6198-587561 

michael.lassle@perkinelmer.com 

Fujifilm Europe GmbH 

Imaging-System für 

Proteinanalysen 

Mit „Starion“ hat Fujifilm Life Science das erste 

Modell der neuesten Generation Laser-basierter 

Infrarot-Imaging-Systeme für Proteomics- 

Anwendungen vorgestellt. Der für das Western 

Blotting oder Multiplexed Western ausgestattete 

Laser-Scanner erlaubt durch Exzitationswel- 

lenlängen von 685nm und 785nm einen Einsatz 

von Fluoreszenzfarbstoffen, die im Nah-Infrarot- 

Bereich emittieren. Hohe Auflösung und ein dynamischer 

Bereich über fünf Größenordnungen 

tragen zur Leistungsfähigkeit des Systems bei. 

Mit einem weiteren Laser kann Starion auch als 

Phosphor-Imager eingesetzt werden. 

FUJIFILM Europe GmbH 

European Life Science Division 

Tel.: +49-(0)211-5089-144 

lifescience@fujifilm.de 

www.fujifilm.de/lifescience 

m2p-Labs GmbH 

Hochdurchsatz-Fermentation 

Forschen und Entwickeln wird leichter. Mit 

Hilfe des neuen Mikrofermentation-Systems 

BioLector können jetzt wesentlich mehr 

Fermentationen im Screening und in der 

frühen Bioprozessentwicklung automatisiert 

durchgeführt werden. Neben der einfachen 

Handhabung von Mikrotiterplatten kombiniert 

die Technologie Hochdurchsatz mit 

online-Monitoring aller essentiellen Fermentationsparameter 

unter verfahrenstechnisch 

definierten Bedingungen. Die nicht-invasive 

optische Messtechnik detektiert Biomasse- 

und Proteinkonzentrationen sowie pH und pO 2 

parallel in bis zu 96 Mikroreaktoren. 

ProBioGen AG 

Lymphknotenmodell zur in vitro-Testung 

Die ProBioGen AG hat mit dem künstlichen 

humanen Lymphknoten (human Artificial 

Lymph Node, „human ALN“) ein neues 

in vitro-Testsystem entwickelt, das die 

Vorhersage von Immunreaktionen auf biopharmazeutische 

Wirkstoffe ermöglicht. 

Mit Hilfe des ALN kann das Wirkungs- und 

Nebenwirkungsprofil eines humanen Pharmazeutikums 

vorhergesagt werden. 

Das komplexe Gewebemodell basiert auf 

humanen Blutzellen definierter Spender, 

die in einer dreidimensionalen Kulturmatrix 

immunkompetente Gewebestrukturen 

ausbilden, sogenannte Mikro-Organoide. 

Im Laufe der Kultivierung können Prozess- 

und immunologisch relevante Parameter 

,wie etwa Zytokinprofile, erfasst werden. 

Im Anschluss kann zudem die zelluläre Zusammensetzung 

der Organoide und ihre 

Differenzierung immunhistologisch sowie 

im Durchflusscytometer und via Genexpressionanalyse 

ermittelt werden. Dies erlaubt 

sowohl das immunogene Risiko als auch das 

Wirksamkeitspotential eines Medikamentes 

frühzeitig zu bestimmen. 

Modelle wie der von ProBioGen entwickelte 

humane ALN, liefern neue Einsichten 

in die Wirkweise eines Pharmazeutikums 

und können für die Evaluierung produktbezogener 

Risiken sowie für die Erstellung von 

Die hohe Informationsdichte der Daten 

garantiert eine bessere Beschreibung der 

zu untersuchenden biologischen Systeme 

und reduziert den Arbeitsaufwand spürbar. 

Erstmals ist es somit möglich, auf Basis 

kinetischer „real-time“-Daten, Fermentationen 

bereits im Mikromaßstab von 200µL 

bis 1000µL quantitativ zu beurteilen und 

den Prozess auf einer breiten Wissenbasis 

zu gestalten. 

Die Skalierbarkeit der Ergebnisse im Mikromaßstab 

auf größere Laborsysteme konnte für 

etablierte Expressionssysteme wie Bakterien 

und Hefen bereits gezeigt werden und ebnet 

somit den direkten Übertrag auf größere 

Reaktoreinheiten. Der BioLector findet Anwendung 

im Klonscreening, der Medien- und 

Prozessparameter-Optimierung sowie der 

Aufklärung von Wachstums- und Produktbildungskinetiken. 

m2p-labs GmbH 

Forckenbeckstr. 6 

52074 Aachen 

Tel.: +49-(0)241-608513121 

www.m2p-labs.com 

Wirkstoffprofilen herangezogen werden. 

Zusätzlich verhilft der ALN entscheidend 

die Anzahl notwendiger Tierversuche zu 

reduzieren. 

ProBioGen AG 

Dr. Gabriele Schneider 

Tel.: +49-(0)30-924006-0 

info@probiogen.de 

www.probiogen.de 


Mai bis Juli 2008 

Veranstaltungskalender 

19.-21.05.08 

1 st European Conference for Clinical Nanomedicine, 

Basel (CH) 

Info: Beat Löffler, European Foundation 

for Clinical Nanomedicine 

(Tel.: +41-61-695-9395, 

E-Mail: loeffler@clinam.org, 

Web: www.clinam.org) 

22.-23.05.08 

Biotech 2008 , Zürich (CH) 

Info: Birgit Camenisch, Universität Zürich 

(Tel.: +41-589-345-733, 

E-Mail: birgit.camenisch@zhaw.ch, 

Web: www.biotech2008.ch) 

22.-25.05.08 

Analysis of Microbial Cells at the Single-Cell 

Level, Bad Schandau 

Info: (Web: http://qbab.dbs.aber.ac.uk/sc2008) 

03.–04. Juni 2008 

European Downstream 

Technology Forum, Göttingen 

Um die neuesten Entwicklungen im Feld 

des Downstream Processing zu diskutieren, 

treffen sich Europas Top-Experten im Sartorius 

College in Göttingen. Von Disposables 

über Prozessintegration bis hin zu neuen 

Separationstechnologien reicht dabei 

die Themenpalette. Registrierung unter: 

www.sartorius-stedim.com/downstream 

23.-24.05.08 

4. Glycan-Forum, Berlin 

Info: Thomas Ruttkowski, P&R Kongresse GmbH 

(E-Mail: info@pr-kongresse.de, 

Web: www.glycostrukturfabrik.de) 

26.-30.05.08 

Modification of Large DNA Constructs 

like BACs, Cosmids and the E.coli Genome, 

Heidelberg 

Info: Gene Bridges GmbH 

(E-Mail: contact@genebridges.com, 

Web: www.genebridges.com) 

03.–04. Juni 2008 

mAb Workshop, Heidelberg 

Einen hervorragenden Überblick über 

Stand und Entwicklung beim Design und 

Engineering, der Analytik, Formulierung 

und Produktion sowie klinischen Anwendung 

monoklonaler Antikörper gibt der 

2. EUFEPS + EAPB Workshop zum Thema. 

Information: www.eufeps.org 

28.05.-01.06.08 

Crossing Frontiers in Biomaterials and 

Regenerative Medicine – WBC 2008, 

Amsterdam (NL) 

Info: European Society for Biomaterials (ESB) 

(E-Mail: wbc2008-info@ics-online.nl, 

Web: www.wbc2008.nl) 

28.05.08 

Fortschritte in der Laboratoriumsmedizin: 

Schwerpunkt Hämatologie, Berlin 

Info: Priv.-Doz. Dr. Andreas Lun, Charité 

(Fax: +49-30-8445-4152, 

E-Mail: andreas.lun@charite.de) 

03.-04.06.08 

2 nd EUFEPS and EAPB Workshop on 

Monoclonal Antibodies, Heidelberg 

Info: EUFEPS Secretariat, Stockholm 

(Tel.: +46-8-7235-000, 

Fax: +46-8-4113-217, 

E-Mail: conferences@eufeps.org, 

Web: www.eufeps.org) 

03.-04.06.08 

European Downstream Technology Forum 

2008, Göttingen 

Info: Beate Sommerfeld, 

Sartorius College Göttingen 

(Tel.: +49-551-308-3318, 

E-Mail: beate.sommerfeld@sartorius-stedim.com, 

Web: www.sartorius-stedim.com/downstream) 

Service Kalender 

06.06.08 

„Mikrosystemtechnik für Analytik und 

Diagnostik“, Mainz 

Info: mst-Netzwerk Rhein-Main e.V. 

(Web: www.mst-rhein-main.de) 

22.-26.06.08 

TERMIS-EU Meeting 2008, Porto (P) 

Info: Ariana Santos, 3B’s Research Group 

(E-Mail: termiseu2008@dep.uminho.pt, 

Web: www.termis.org/eu2008) 

24.-27.06.08 

1 st Global Conference on GMO Analysis, 

Como (IT) 

Info: European Commission/Institute for Health and 

Consumer Protection 

(E-Mail: gmo-global-conference@jrc.it, 

Web: http://gmoglobalconference.jrc.it) 

06.-09.07.08 

2 nd International Congress on Stem Cells 

and Tissue Formation 2008, Dresden 

Info: Hilke Marina Petersen, Center for Regenerative 

Therapies Dresden/SFB 655 Cells into Tissues 

(Web: www.stemcellcongress-dresden.de) 

07.-11.07.08 

qPCR-Workshop, Freising 

Info: Dr. Michael Pfaffl, Tataa Biocenter 

(Web: www.tataa.gene-quantification.info) 

09.-10.07.08 

Medizin Innovativ 2008, Nürnberg 

IInfo: Forum MedTech Pharma e.V. 

(Web: www.medizin-innovativ.de) 

9.–10. Juli 2008 

Medizin Innovativ, Nürnberg 

Mehr als 90 Aussteller und ein hochkarätiges 

Vortragsprogramm locken jetzt nach 

Nürnberg. Wer mehr über Biomateria lien, 

Diagnostik, Pharma-Biotech, Bildgebung 

etc. erfahren möchte, kann sich unter 

www.medizin-innovativ.de anmelden. 


Ausblick 

Endlich! Entscheidungen 

für die Forschung 

Thomas Gabrielczyk 

Gleich zwei richtungsweisende Entscheidungen haben Politiker im April getroffen, die das 

Forschungsabarometer in Deutschland abrupt auf „schön“ haben springen lassen. Die eine 

– zur Forschung an embryonalen Stammzellen – war mit kontroversen Diskussionen und viel 

Öffentlichkeit verbunden, die andere Weichenstellung – zum geplanten Gendiagnostikgesetz 

– wurde von der breiten Masse noch gar nicht als solche wahrgenommen. 

Im April entschieden die Abgeordneten des 

Deutschen Bundestages mit großer Mehrheit, 

dass deutsche Stammzellforscher straffrei und 

zusammen mit ihren Kollegen in Europa und 

der Welt das Geheimnis der menschlichen 

Entwicklung an geeigneten humanen embryonalen 

Stammzellen untersuchen dürfen. Sie 

verschoben dazu den Stichtag für den Import 

der Stammzellen auf den 1. Mai 2007 und gewährten 

den Forschern damit den Zugriff auf 

die besten in einem ethisch balancierten Rahmen 

verfügbaren embryonalen Stammzellen. 

Zusätzlich entschieden Politiker, dass ein 

hohes Datenschutzniveau bei prädiktiven 

gendiagnostischen Tests möglich ist, ohne die 

klinische oder Grundlagen-Forschung einzuschränken. 

Denn zur Freude klinischer Forscher 

soll das künftige Gendiagnostikgesetz weder 

pharmakogenetische Tests an zugelassenen 

Arzneimitteln noch genetische Untersuchungen 

im Rahmen von Biobankprojekten 

betreffen. Über die pharmakogenetischen 

Tests soll wie bisher das Bundesinstitut für Arzneimittel 

und Medizinprodukte entscheiden, 

und auch die Biobanken fallen weiter unter 

bestehendes Recht, sagt die Biotechnologin 

und gesundheitspolitische Sprecherin der SPD, 

Carola Reimann. 

Landauf, landab redet deshalb auch kein Forscher 

davon, dass es besser gewesen wäre, den 

Stichtag ganz abzuschaffen oder dass die Beschränkung 

auf Gentests angesichts der Fortschritte 

in den Proteomics und Metabonomics 

Impressum 

LABORWELT (ISSN 1611-0854) 

erscheint zweimonatlich im 


Stralsunder Straße 58–59 

13355 Berlin, Germany 

Tel./Fax: 030/264921-0 / 030/264921-11 

laborwelt@biocom.de 

www.biocom.de 

Redaktion 

Dipl.-Biol. Thomas Gabrielczyk 

Tel.: 030/264921-50 

Anzeigenleitung 

Oliver Schnell 

Tel. 030/264921-45, 

o.schnell@biocom.de 

Leserservice 

Angelika Werner 

Tel. 030/264921-40 

Bildtechnik und Layout 

Heiko Fritz 

Graphik-Design 

Michaela Reblin 

Druck: 

Druckhaus Humburg GmbH, 28325 Bremen 

Für einen regelmäßigen Bezug von LABORWELT 

ist eine kostenlose Registrierung unter www. 

biocom.de oder per Fax erforderlich. Namentlich 

gekennzeichnete Beiträge stehen in der 

inhaltlichen Verantwortung der Autoren. 

eigentlich viel zu eng ist. Statt dessen werden 

emsig Forschungsanträge geschrieben, neue 

Schwerpunkte mit induzierten pluripotenten 

Stammzellen (ipS) gestartet wie etwa an der 

Medizinischen Hochschule Hannover, an der 

bislang nur mit Affenstammzellen gearbeitet 

wurde, und EU-Stammzellprojekte unter deutscher 

Federführung initiiert. 

Toxizitätsmodelle aus 

embryonalen Stammzellen 

Koordiniert vom Stammzellexperten Jürgen 

Hescheler hob etwa Mitte April in Köln das 

15,5 Mio.-Euro-Programm ESNATS ab. Mit 

neuen Stammzelllinien der schwedischen 

Cellartis AB wollen 21 Forschungsgruppen, 

sieben KMU und drei große Pharma-Unternehmen 

Toxizitätssignaturen in aus embryonalen 

Stammzellen differenzierten Zellen finden, 

validieren und in einem automatisierbaren 

Assay vereinen. Im Fokus dabei: pharmakogenetische 

und Protein-Toxizitätsmarker, die 

während der Neurogenese, Spermatogenese, 

in embryonalen Stammzellen des Menschen 

und in aus diesen differenzierten Hepatozyten 

detektiert werden. Dass sich deutsche Forscher 

kurz nach dem Beschluss des Bundestages mit 

einem solch ambitionierten Projekt der internationalen 

Szene präsentieren, lässt hoffen. 

Und es zeigt, was politischer Rückhalt möglich 

machen kann. 

Alle Beiträge sind urheberrechtlich geschützt. 

Ohne schriftliche Genehmigung des BIOCOM 

Verlages darf kein Teil in irgendeiner Form 

reproduziert oder mit elektronischen Systemen 

verarbeitet, vervielfältigt oder verbreitet werden. 

Dieser Ausgabe liegt eine Beilage der 

Invitrogen GmbH und der BIOCOM bei. 

Die Druckauflage von 20 000 Exemplaren 

ist IVW geprüft (Stand I/08): 

© BIOCOM Verlag GmbH, Berlin 

® BIOCOM ist eine geschützte Marke der 

BIOCOM AG, Berlin 

BIOCOM 

Inserentenverzeichnis 

Applied Biosystems …………………………… 13,25 

BD Biosciences GmbH …………………………… 27 

Biometra GmbH ………………………………………… 7 

Biocrates Life Sciences GmbH ……………… 33 

Curacyte AG ……………………………………………… 65 

DASGIP GmbH ………………………………………… 35 

Guava Technologies Ltd. ………………………… 65 

Invitrogen GmbH ……………………………Beilage 

In Vitro Systems & Services GmbH ……… 23 

GE Healthcare Europe GmbH ………………… 41 

Molecular Devices Ltd. …………………………… 39 

Mole AS …………………………………………………………9 

New England Biolabs GmbH …………………U4 

Nikon GmbH ……………………………………………… 15 

Porvair Sciences Ltd ………………………………… 39 

Olympus Deutschland GmbH …………………11 

Provendis GmbH ……………………………………… 39 

Roche Diagnostics GmbH ……………………… U2 

Forum MedTech Pharma e.V ………………… U3 

Sigma-Aldrich Chemie GmbH ………………… 5 

USB Europe GmbH …………………………………… 17 

Technologiezentrum Dortmund …………… 31 

Zinsser Analytik ………………………………………… 45 

Vorschau Heft 4/2008 

Thema 

Proteinanalytik 

Die Juli-Ausgabe von LABORWELT steht ganz 

im Zeichen der Proteinanalytik. Neue Ansätze, 

die Lokalisation von Proteinen zu erfassen, 

Modifikationen zu detektieren, Proteine zu 

angeln, auf Arrays oder Filtermembranen 

nachzuweisen, sind nur einige unserer Themen 

des nächsten Heftes. 

Marktübersicht: Leuchtproteine 

Werbekunden bietet diese Ausgabe mit einer 

garantierten Auflage von 20.000 Exemplaren 

(IVW-geprüft) eine optimale Plattform 

für ihre Produkt- und Imageanzeigen. Reservieren 

Sie Ihren Werbeplatz in LABORWELT 

4-08 bis spätestens 4. Juli. Ergänzend zu 

dem Themenschwerpunkt Proteinanalytik 

veröffentlichen wir eine Marktübersicht 

„Leuchtproteine und in vivo-Imaging“. Weitere 

Informationen zu Ihrer möglichen Teilnahme 

gibt Oliver Schnell (Tel: +49-30-264921-45, 

eMail: o.schnell@biocom.de). 


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� Cell Signaling Technology Inc. 

Danvers, MA USA Tel. 1-877-616-CELL (2355) Fax 1-978-867-2488 email: info@cellsignal.com www.cellsignal.com 

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