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no conectar agua circulante porque el fenol puede cristalizarse en el mismo
refrigerante). El fenol que va destilando se puede recibir en un pequeño volumen de
Tris- HCl 0.5 M para evitar su cristalización.
2. Saturación: Antes de comenzar la saturación, el fenol debe ser equilibrado a un pH
mayor de 7.8 debido a que el DNA puede quedar dentro de la fase orgánica si el pH del
fenol es ácido.
3. Agregar hidroxiquinoleína a una concentración final de 0.1% (función antioxidante).
4. Añadir un volumen de solución amortiguadora Tris-HCl 0.5 M, pH 8.0 y mezclar con
una barra magnética hasta que el pH de la fase fenólica sea mayor de 7.8 (medir con
papel indicador).
5. Agitar durante 48 h a temperatura de refrigeración, dejar que se separen las fases y
eliminar la fase acuosa utilizando una pipeta conectada a una línea de vacío con trampa
o embudo de separación.
6. Repetir la misma operación pero utilizando solución amortiguadora Tris-HCl 0.1 M, pH
8.0.
7. Eliminar la fase acuosa final y añadir 0.1 volúmenes de Tris-HCl 0.1 M pH 8.0
conteniendo β-mercaptoetanol a una concentración 0.2%.
8. La solución de fenol puede ser almacenada de esta forma en un frasco obscuro a -20ºC,
las alícuotas de fenol en uso se almacenan a 4ºC.
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