Test fonctionnel de mesure des activités enzymatiques de ...

tel-00126858, version 1 - 26 Jan 2007
Sommaire
II) Validation biologique du test _____________________________________________________ 177
III) Conclusion ________________________________________________________________ 179
Chapitre V : Expériences applicatives ___________________________________________ 181
I) Etude des profils de réparation de différents types cellulaires ____________________________ 183
A) Fonction et localisation des cellules étudiées ______________________________________ 184
1) Les cellules de la peau : fibroblastes et kératinocytes _____________________________ 184
2) Les cellules mononuclées du sang périphérique__________________________________ 185
B) Comparaison de profils de réparation cellulaire ____________________________________ 185
1) Comparaison des profils de réparation de trois cultures primaires de fibroblastes________ 185
2) Comparaison des activités de réparation de fibroblastes et de kératinocytes ____________ 187
3) Activités de réparation des cellules mononuclées du sang périphérique (CMSP) ________ 189
C) Conclusion ________________________________________________________________ 191
II) Etude de l’effet de doses adaptatives de rayonnement gamma sur les activités de réparation
cellulaires_________________________________________________________________________ 191
A) Le rayonnement gamma et l’adaptation cellulaire __________________________________ 191
1) Le rayonnement gamma (γ) _________________________________________________ 191
2) Effet du rayonnement gamma sur l’ ADN ______________________________________ 192
3) L’adaptation cellulaire _____________________________________________________ 193
B) Expérience d’adaptation cellulaire ______________________________________________ 195
4) Conclusion ______________________________________________________________ 200
III) Conclusion ________________________________________________________________ 201
Conclusion et perspectives ______________________________203
Matériels et méthodes __________________________________211
I) Préparation des plasmides _______________________________________________________ 213
A) Amplification et purification du plasmide contrôle pBluescript ________________________ 213
B) Préparation des différents plasmides comportant les lésions __________________________ 213
1) Le plasmide pCPD-64 _____________________________________________________ 213
2) Le plasmide pCPD-64* ____________________________________________________ 213
3) Le plasmids p8oxo ________________________________________________________ 214
4) Le plasmide p8oxo* _______________________________________________________ 214
5) Le plasmide pAlkB________________________________________________________ 214
6) Le plasmide pCisP ________________________________________________________ 214
7) Le plasmide pPso _________________________________________________________ 215
8) Le plasmide pAbaS________________________________________________________ 215
9) Le plasmide pThymG______________________________________________________ 215
C) Purification des plasmides traités _______________________________________________ 216