Test fonctionnel de mesure des activités enzymatiques de ...

tel-00126858, version 1 - 26 Jan 2007
Etude bibliographique
c) Resynthèse de la zone excisée
Deux voies de resynthèse sont possibles, et pour chacune d’entre elles le
nombre de nucléotides incorporés diffère :
- La voie de resynthèse courte :
Durant cette voie de resynthèse, un à deux nucléotides sont incorporés par la
polymérase β associée à XRCC1. En même temps que les nucléotides sont
polymérisés, la polymérase β, qui a aussi une activité ADN-desoxyribophosphatase
(dRpase), excise le 5’ desoxyribose-phosphate (dRp) généré lors de la coupure par
l’endonucléase.
- La voie de resynthèse longue :
Contrairement à la voie courte, lors de la voie de resynthèse longue, un nombre
plus important de nucléotides est incorporé, environ cinq à sept. Cette étape est
réalisée par les mêmes polymérases que celles impliquées dans la resynthèse lors de la
REN, à savoir : les polymérases ε ou δ associées au facteur de processivité PCNA. Les
polymérases ε et δ n’ayant pas d’activité dRpase, les nucléotides qu’elles polymérisent
provoquent une zone de recouvrement où l’ancien brin d’ADN n’est plus hybridé à
son complémentaire. Une Flap endonucléase (FEN1) va alors venir le couper afin de
permettre à l’étape de ligation d’avoir lieu.
Ce mécanisme de sélection entre l’une ou l’autre de ces deux voies n’a pas
encore été élucidée. Certains résultats tendent à montrer que cette sélection dépendrait
de la glycosylase qui a réalisé l’excision 37 , d’autres qu’elle serait guidée par la
capacité à éliminer le résidu dRp. L’hypothèse est que, si le résidu dRP est hydrolysé
rapidement, alors la voie de resynthèse courte est favorisée et inversement 38 .
d) L’étape de ligation
Cette étape finale de la REB fait intervenir différents acteurs en fonction de la
voie de resynthèse qui a été prise. Dans le cas de la voie courte, c’est le complexe
ligase III / XRCC1 qui referme la double hélice d’ADN, lors de la voie longue c’est le
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