Cours-3-201112Fichier PDF - e-nautia

Protéases à sérine type Trypsine : Poche de spécificité.Complémentarité stérique (forme, surface), électrostatiqueSubstrat en P1 / "Poche " S1Explication parfois simpliste.Mutagenèse dirigée : Trypsine.• Enzyme native Asp189 (S1) coupure préférentielle après Arg• Mutant Asp189Lys– Effets Attendus :• hydrolyse préférentielle après résidus acides• Perte de hydrolyse préférentielle après résidus basiques– Effets observés. Surprises :• Inactif pour hydrolyse après Asp et Glu• faible activité d’hydrolyse après Lys et Arg• même faible activité que l'enzyme non mutée une hydrolyse après Phe etTyr• augmentation de kcat/km de 5000 avec pour une hydrolyse après Leu– Pas d'explication de cette activité pour le mutant D189K. Structure 3D nonconnue.• Effet d'une mutation ponctuelle pas toujours si simple.Structure des Protéines II. 2011/2012. Chap 3