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Télécharger - Laboratoire Colloïdes et Matériaux Divisés - Espci

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l’espace dans le microcanal <strong>et</strong> le temps de réaction dans le microréservoir. Grâce à ce conceptde microréacteurs, la chimie passe véritablement à l’ère du haut débit, avec de grandeséconomies de substances <strong>et</strong> de temps (Song <strong>et</strong> al., 2003 ; Chen <strong>et</strong> al., 2005).Dans le domaine de la biologie, la compartimentation <strong>et</strong> la maîtrise de réactions en gouttesapparaissent aussi être un outil indispensable pour le criblage de librairie de banques de gènes.Le criblage de banque de gènes nécessite de créer un lien entre le génotype (les ADN de labanque à cribler) <strong>et</strong> le phénotype (une caractéristique mesurable par l’intermédiaire de laprotéine synthétisée) des obj<strong>et</strong>s utilisés. Ce lien est réalisé naturellement dans le compartimentcellulaire : le phénotype de chaque cellule est déterminé par les gènes qu’elle exprime.L’utilisation d’organismes vivants (bactéries, levures) pour le criblage de banques de gènesreste toutefois longue <strong>et</strong> contraignante (clonage du gène dans l’organisme, culturecellulaire…). De plus, elle n’est pas toujours efficace (obtention d’un signal mesurable,influence du métabolisme de la cellule, risque de cytotoxicité…).Pour s’affranchir de ces contraintes, plusieurs méthodes d’études in vitro ont été développées(Griffiths <strong>et</strong> Tawfik, 2003 ; Mastrobattista <strong>et</strong> al., 2005 ; Bernath <strong>et</strong> al., 2004). Elles diffèrentprincipalement par le moyen utilisé pour assurer le lien entre le génotype <strong>et</strong> le phénotype.L’une de ces méthodes m<strong>et</strong> en jeu la compartimentalisation in vitro (IVC) : il s’agit d’utiliserdes microréservoirs pour maintenir le lien entre génotype <strong>et</strong> phénotype <strong>et</strong> recréer ainsi lecompartiment cellulaire. Ces microréacteurs biologiques constituent ainsi une collection deréservoirs indépendants qui peuvent alors être triés grâce à l’utilisation d’outils de criblage àhaut débit tel que le FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) comme l’illustre lafigure 1.4.Water EauSEnzProduitfluorescentProductARNGene GèneMembraneFACSGouttes non fluorescentesGouttes fluorescentes= gènes codant pour l'enzymeavec l'activité désiréeSélectionnées <strong>et</strong> amplifiéesFigure 1.4Principe de la compartimentalisation in vitro dans une microstructureD’après Bernath <strong>et</strong> al., 2004.21

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