Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
2. LAGINEN PRESTAKUNTZA<br />
Metodoak<br />
Aurreko atalean aipaturiko laginak lortu ondoren frakzio solugarria <strong>eta</strong> mintzari<br />
loturikoaren banak<strong>eta</strong> burutu zen:<br />
2.1. Zatiki solugarriaren lorpena<br />
Laginak tris-HCl 10 mM (pH 7,4) soluzioan sartu <strong>eta</strong> plastikozko<br />
homogeneizatzaile baten bidez, banan banan, homogeneizatu ziren. Ondoren,<br />
homogeneizatua 100000 g-tara, 35 minututan zehar <strong>eta</strong> 4ºC-tara, ultrazentrifugatu zen<br />
zatiki solugarria eskuratzeko.<br />
Sobrenadante<strong>eta</strong>tik, zatiki solugarriaren aktibitate entzimatikoak <strong>eta</strong> proteina<br />
kantitatea neurtzeko laginak jaso ziren. Neurk<strong>eta</strong> guztiak hiru al<strong>eta</strong>n egin ziren.<br />
2.2. Mintzari loturiko zatikiaren lorpena<br />
Mintzari loturiko zatikia isolatzeko helburuarekin, hauspeakinak hiru aldiz<br />
garbitu ziren tris-HCl 10 mM soluzioarekin <strong>eta</strong> NaCl 4M soluzioan homogenizatu.<br />
Homogenizatua ultrazentrifugatu zen 100000 g-tara, 35 minututan zehar <strong>eta</strong> 4ºC-tara.<br />
Prozesu hon<strong>eta</strong>n lortutako sobrenadanteak baztertu <strong>eta</strong> hauspeakinak berriro tris-HCl<br />
10 mM soluzioarekin garbitu ziren, %1-era dagoen tritoi X-100 soluzioan<br />
homogenizatzeko. Aurreko protokoloa jarraituz, azkeneko ultrazentrifugazio bat egin<br />
zen, sobrenadante<strong>eta</strong>tik mintzari loturiko zatikiaren aktibitate entzimatikoak <strong>eta</strong><br />
proteina kantitatea determinatzeko laginak jasoz. Neurk<strong>eta</strong> guztiak hiru al<strong>eta</strong>n egin<br />
ziren.<br />
Materialak <strong>eta</strong> Metodoak 89
Change language