Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
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Metodoak<br />
90<br />
Muestras de Tejido del SNC:<br />
Hipotálamo.<br />
Caudado Putamen.<br />
Aukeratutako Corteza Pari<strong>eta</strong>l. ehunen<br />
laginak<br />
Corteza Frontal.<br />
Cerebelo.<br />
Médula.<br />
1. IRUDIA: Ehunaren prestakuntza aktibitate peptidasikoak neurtzeko<br />
Materialak <strong>eta</strong> Metodoak<br />
Homogenizazioa<br />
Homogeneización.<br />
Tris-HCl, Tris-sacarosa, 10mM 0’25 (pH7,5) M.<br />
15 seg, máxima velocidad.<br />
30sg, 800rpm<br />
Hauspeakina<br />
Garbitu<br />
Sobrenadante S<br />
Tris-HCl, 10mM 1.<br />
(pH7,5)<br />
Homogenizazioa<br />
P 1: Núcleos + células sin romper.<br />
NaCl 4M<br />
30sg, 800rpm<br />
Sobrenadantea:<br />
Proteina <strong>eta</strong><br />
aktibitate<br />
solugarriak Desechado.<br />
Fracción de Membrana (P2): Tirosil-amino<strong>peptidasa</strong> M.<br />
Tirosil-amino<strong>peptidasa</strong> Sobrenadantea MII.<br />
Endo<strong>peptidasa</strong> 24.11.<br />
baztertu<br />
Purificación de la Fracción de Membrana (P 2):<br />
- Resuspensión en Tris-HCl 50 mM.<br />
- Centrifugación (20000 xg, 15 min., 4ºC).<br />
Resuspensión de las membranas purificadas en tampón<br />
Tris-HCl 50mM y homogeneización (800 r.p.m., 30 seg.).<br />
Hauspeakina<br />
Sobrenadante Garbitu (S2).<br />
Tris-HCl, 10mM<br />
(pH7 5)<br />
Homogenizazioa<br />
Tritoi X-100 %1 Tris-<br />
HCl, 10mM (pH7,5)ean<br />
30sg, 800rpm<br />
Centrifugación. Zentrifugazioa<br />
1000 100000 xg, xg, 10 35min, min., 4ºC 4ºC<br />
Centrifugación. Zentrifugazioa<br />
20000 100000 xg, xg, 15 35min, min., 4ºC<br />
Ultracentrifugación.<br />
Zentrifugazioa<br />
100000 100000 xg, xg, 35 35min, min., 4ºC. 4ºC<br />
Desechado.<br />
Hauspeakina<br />
Fracción Soluble (S baztertu<br />
3):<br />
Tirosil-amino<strong>peptidasa</strong> Sobrenadantea: Soluble.<br />
Mintzari loturiko proteina <strong>eta</strong><br />
Fig. 3.3 Preparación del tejido para determinación de actividad aktibitateak peptidásica.
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